胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過程它可以被看成一種簡單的動(dòng)力學(xué)過程,它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),然后這些留下的物質(zhì)可以用來維持細(xì)胞的高能量水平這種過程通過將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,通常有四種類型,它們是肽酶,脂水解酶,載脂蛋白酶和糖水解酶,分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子,以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì),維持其自身的正常功能和形態(tài)。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。中國臺灣進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37°℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。中國臺灣進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。
在253nm的波長處測定吸光度,必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié),使吸光度在~,作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量,加~60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液,加μl,混勻,作為空白。另取供試品溶液200μl,加底物溶液(恒溫于℃±℃),立即計(jì)時(shí),混勻,使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃,照紫外-可見分光光度法(2010年版*典二部附錄ⅣA),在253nm的波長處,每隔30秒鐘讀取吸光度,共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo),時(shí)間為橫坐標(biāo),作圖;每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在~,呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求,應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度,再作測定。在上述吸光度對時(shí)間的關(guān)系圖中,取成直線部分的吸光度,按下式計(jì)算:式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量,單位;A1為直線上終止的吸光度;A2為直線上開始的吸光度;T為A1至A2讀數(shù)的時(shí)間,分;W為測定液中含供試品的量,mg;,吸光度每分鐘改變,即相當(dāng)于1個(gè)胰蛋白酶單位。胰蛋白酶制劑注射用胰蛋白酶[3]胰蛋白酶胰蛋白酶的醫(yī)學(xué)檢查胰蛋白酶檢查名稱胰蛋白酶胰蛋白酶分類血液生化檢查>酶類測定胰蛋白酶胰蛋白酶的測定原理同酶速率法測定。
對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對難消化的細(xì)胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2,增加消化效力胰酶是一種復(fù)合消化酶制劑。
0.25%胰酶和加了EDTA胰酶區(qū)別是什么詳細(xì)說明
細(xì)胞之間是通過CAM(細(xì)胞粘性分子)相連的,而很多粘性分子只有在有+2價(jià)金屬離子,如Ca2+,Mg2+,的存在下才能行使這種功能。EDTA是鈣離子的鰲合劑,在胰酶中加入EDTA的作用簡單的說就是為了增加胰酶的消化作用,尤其適用于比較難于消化的細(xì)胞;同時(shí)可以減少胰消化時(shí)間,以減少酶對細(xì)胞的損傷作用。加入EDTA的消化反應(yīng)不能通過加入培養(yǎng)液終止,必須離心才能去除EDTA,所以要掌握好消化時(shí)間。 EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。浙江重組胰酶一般多少錢
消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。中國臺灣進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹
胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被發(fā)現(xiàn),現(xiàn)在已經(jīng)擴(kuò)展到多種來源,包括哺乳動(dòng)物(人、牛、豬和狗)、無脊椎動(dòng)物和微生物等。胰蛋白酶的商業(yè)化生產(chǎn)主要依賴哺乳動(dòng)物的胰腺組織提取或者重組表達(dá)提取。直接從哺乳動(dòng)物胰腺組織中提取的缺點(diǎn)是生產(chǎn)成本高,易造成其他結(jié)構(gòu)相近的蛋白污染。重組表達(dá)提取胰蛋白酶可以縮短提取時(shí)間、降低生產(chǎn)成本,提取的蛋白純度高,通過優(yōu)化重組表達(dá)體系可以提高蛋白的表達(dá)量,這些優(yōu)勢為其在醫(yī)療、食品等行業(yè)中的應(yīng)用提供了更多的可能性。[1]折疊中國臺灣進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹