浙江胰酶常見問題

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候對上滅菌PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會，因為加的量很少，所以一般不會凍壞細胞。9、消化時。 適用于貼壁細胞的消化傳代；也可用于組織細胞分離的初步消化。浙江胰酶常見問題

胰酶消化細胞的原理胰酶消化細胞是一種用來分解細胞質和細胞間物質的化學過程它可以被看成一種簡單的動力學過程，它將細胞結合部分的物質分解為其他物質，然后這些留下的物質可以用來維持細胞的高能量水平這種過程通過將脂肪、蛋白質、糖類和其它物質分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生。胰酶是細胞分解與吸收物質的一種關鍵分子，通常有四種類型，它們是肽酶，脂水解酶，載脂蛋白酶和糖水解酶，分別可以將蛋白質、脂肪、脂蛋白和糖類物質分解為更小的離子和分子，以便細胞可以更好地吸收物質，維持其自身的正常功能和形態(tài)。海南胰酶哪家好0.25%胰酶細胞消化液(含有EDTA，含酚紅)消化細胞時間不宜過長。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)干細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下干細胞。這種方法作用溫和，對干細胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質量是影響干細胞的消化的關鍵因素之一，如果配的比較標準，消化的時候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下，如果干細胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細胞是有一定的影響的。對于容易消化的干細胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細胞消化單細胞。

    在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散（將組織塊制備成單個細胞懸液）以及傳代細胞培養(yǎng)中，貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin)，EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切段，水解細胞間的蛋白質，破壞細胞間的連接，從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關，在℃時，胰酶的作用能力**強，因此使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為，而半貼壁細胞或對胰酶敏感的細胞常采用低濃度（）的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細胞連接促進細胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用，以增強解離效果。但是對于EDTA可能會干擾后續(xù)的測試分析時，推薦選擇不含EDTA的消化液。本產品含有(Trypsin)，溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化。為改良型，除了具有方便快速、穩(wěn)定安全、細胞狀態(tài)好等特點之外，消化時間更短，消化效果媲美進口產品，特別適用于難消化的細胞。 有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。

胰酶和雙抗怎么保存？

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雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年。由于該試劑在4°C下長期存放是不穩(wěn)定的，分裝后在-20°C下避光保存。青霉素在2-8°C存放時間不應超過4天，鏈霉素相對穩(wěn)定一點，在2-8°C可以存放30天左右。雙抗從凍融后基本成分已開始降解。胰酶的保存：胰酶可在-20°C下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20°C冰箱取出。盡量避免在4C長期保存。 含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。西藏進口胰酶牌子

胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內切酶，作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側。浙江胰酶常見問題

    胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸餾水5～10ml溶解。2.一般應用：1次5000單位，每日1次肌注，用量酌情而定。為防止疼痛，可加適量普魯卡因。局部用*視情而定，可配成溶液制劑（～，微堿性時活性**強）、噴霧劑、粉劑、油膏等，用作體腔內注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用結晶胰蛋白酶2000單位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀釋，以牙痕為中心，在傷口周圍作浸潤注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次。如病情需要可重復使用。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后，切開傷口排毒減壓（嚴重出血者例外），也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛，可用其***胰蛋白酶注意事項1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗，應注意可能產生過敏反應。2.吸取注射液后應另換針頭，以免注射時疼痛。3.外用時，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時內用畢。胰蛋白酶不良反應：1．注射局部疼痛、硬結。2．本品可引起組胺釋放，產生全身反應，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、***、頭暈、胸痛、***、皮疹、血管神經性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細胞減少等。癥狀輕時不影響繼續(xù)***，給予抗組胺*和對癥*物即可控制，嚴重時應即停*。3．本品偶可致過敏性休克。浙江胰酶常見問題