遼寧歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組使用

來源: 發(fā)布時間:2021-11-06

 空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)(ST)是一種方法,允許在組織樣本中可視化和定量分析轉(zhuǎn)錄組與空間分辨率。通過在載玻片上排列含有位置條形碼的寡核苷酸的組織切片,該方法聲稱可以生成具有精確位置信息的高質(zhì)量的RNA-seq cDNA文庫。條形碼芯片有1007個帶有獨特條形碼序列的引物位點。每個位置都有一個直徑100μm(對應(yīng)于一個組織域)中心到中心的距離是200μm。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,在空間轉(zhuǎn)錄組樣本處理、實驗和數(shù)據(jù)挖掘上的成功經(jīng)驗,致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破??臻g轉(zhuǎn)錄組是在組織原位檢測基因表達的一種技術(shù)。遼寧歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組使用

空間轉(zhuǎn)錄組的一般流程2。這使得在后續(xù)步驟中覆蓋細胞組織圖像和基因表達數(shù)據(jù)成為可能。用我們的滲透試劑對組織進行滲透,這意味著在細胞膜上形成小孔。RNA分子可以通過這些通道離開細胞,并與芯片上相鄰的捕獲探針結(jié)合。因此,基因表達信息被捕獲在芯片上。需要通過以下步驟將捕獲的RNA分子中存儲的信息轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)。cDNA合成是為了創(chuàng)造穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。這是必要的,因為cdna - rna -雜交體的降解速度很快。此外,這是構(gòu)建可測序文庫之前的必要步驟。所有之前收集的信息都被匯集起來,可以在線訪問。這意味著在實踐中,您可以查看組織切片的圖像并選擇組織中的不同區(qū)域。然后你可以確定哪些基因在這些區(qū)域中以什么數(shù)量表達。因此,你可以在一個單一的實驗中進行新分析。吉林歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組是什么10x? Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm。

單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的如火如荼,伴隨著空間轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的蓬勃發(fā)展,可以看到,在現(xiàn)有的高通量檢測技術(shù)領(lǐng)域,這兩種技術(shù)已為科學(xué)研究的發(fā)展提供了前所未有的技術(shù)支撐。從2019年單細胞多組學(xué)被評為《Nature Methods》年度技術(shù)進展,到2020年空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)也被評為年度技術(shù)進展,相信在接下來的時間里,單細胞轉(zhuǎn)錄組和空間轉(zhuǎn)錄組將為生命科學(xué)的發(fā)展做出極其重要的貢獻。單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的特點在于提供詳實的每個細胞的轉(zhuǎn)錄表達信息,但是缺失了來源組織的空間組成信息?,F(xiàn)有商用空間轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的特點在于提供了完整的組織空間位置信息,但是每個捕獲spot的信息無法達到單細胞分辨率(10個左右細胞)。因此,這兩個技術(shù)的存在是天然互補的,而將兩者的結(jié)合也是水到渠成,完美結(jié)合。

 空間重構(gòu)的計算策略:這種計算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達模式或共表達的趨勢,從單個細胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細胞間的環(huán)境。然而,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢或特定組織的總體布局。基于LCM的方法:基于LCM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個細胞的空間轉(zhuǎn)錄組,盡管其通量很低,但是在可以標(biāo)記成千上萬個單個細胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,將少量細胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,可能具有一定價值?;趫D像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué):基于圖像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測區(qū)域,但也存在一些問題,例如幾種smFISH方法很難從包括信號干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個細胞??臻g條形碼加高通量:費用較高且無法在單個細胞中獲得轉(zhuǎn)錄組。10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可以應(yīng)用于免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理等研究方向。

10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組的實現(xiàn)原理是什么?10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標(biāo)記的點(barcoded spots),每個點的直徑為55 μm,點和點之間中心的距離為100 μm,并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細胞中會釋放出mRNA,遷移到每個spot的mRNA會被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,然后進行文庫構(gòu)建并進行測序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對數(shù)據(jù)進行分析,以確定哪些數(shù)據(jù)來自哪個位置,從而實現(xiàn)空間基因表達的可視化。 研究通過對 ALS 小鼠疾病進程(癥狀前、發(fā)病、癥狀期和終末期)的脊髓組織進行空間轉(zhuǎn)錄組測序。湖南歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組是什么

研究的***主要集中于人類和小鼠的大腦,而其他***(例如肝臟)的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究相對滯后。遼寧歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組使用

基于原位測序的空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)?;谠粶y序(ISS)的方法通過測序產(chǎn)生空間轉(zhuǎn)錄組信息,這種方法只依靠連接酶連接兩段DNA—一段已知序列的引物和一個探針與模板匹配,不匹配的探針就會被洗掉。2013年開發(fā)的ISS中,每個探針使用一個查詢堿基來測序基因條形碼。FISSEQ和后來的EXeq使用了SOLiD,每個探針使用兩個查詢堿基來測序環(huán)化和RCA擴增的cDNAs。在STARmap中,基因條形碼由SEDAL測序,其中還使用了兩個類似固體的查詢堿基來避免錯誤。BARseq還用基因條形碼放大了RCA探針。基于ISS技術(shù)的優(yōu)勢包括:單細胞分辨率、亞細胞轉(zhuǎn)錄物定位和可應(yīng)用于更大的組織區(qū)域。缺點是:檢測效率較低。遼寧歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組使用

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