酵母文庫實(shí)驗(yàn):本研究發(fā)現(xiàn)了一個(gè)硝酸鹽響應(yīng)的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2,它參與調(diào)節(jié)硝酸鹽介導(dǎo)的蘋果植株生長。利用酵母雙雜交、蛋白質(zhì) pull-down、BiFC 實(shí)驗(yàn)證實(shí),MdBT2 可以與一個(gè) DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作,這種互作是 MdRGL3a 蛋白經(jīng)由 26S 蛋白酶體途徑的泛素化及降解所必需的。此外,異源表達(dá) MdBT2 部分回復(fù)了 MdRGL3a 過表達(dá)所導(dǎo)致的擬南芥生長抑制。綜上表明,MdBT2 可以通過降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的豐度促進(jìn)硝酸鹽介導(dǎo)的植物生長。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)顯示,培養(yǎng) 45 天,蘋果幼苗的高度和生物量隨硝酸鹽濃度的增加而增加(圖 A-C)。酵母單雜篩庫酵母文庫篩選酵母雙雜交篩庫步驟。河南什么是酵母文庫做什么
酵母文庫研究:棉花是世界上天然纖維的主要來源。近年來,氣候變化給植物帶來的干旱、高鹽等滲透脅迫,使棉花產(chǎn)量穩(wěn)步下降。為適應(yīng)變化莫測的氣候,植物不斷進(jìn)化出復(fù)雜而有組織的應(yīng)對(duì)非生物脅迫的反應(yīng)機(jī)制,其中數(shù)千個(gè)抗性相關(guān)基因間的相互作用,在提高植物的抗旱性和耐鹽性中發(fā)揮著重要作用。功能基因組學(xué)研究表明,植物胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白(LEA)就是這樣一種基因,它在植物發(fā)育過程中,面對(duì)多種環(huán)境脅迫時(shí)均有表達(dá),對(duì)提高植物的抗旱性和耐鹽性具有重要作用。2022年3月,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所在國際期刊上發(fā)表了BiologicalMacromolecules上發(fā)表了題為“LateembryogenesisabundantgeneLEA3(Gh_A08G0694)enhancesdroughtandsaltstresstoleranceincotton”的研究論文,該研究發(fā)現(xiàn)LEA3能夠增強(qiáng)棉花的抗旱性和耐鹽性。該項(xiàng)目中所用的棉花酵母文庫由歐易生物構(gòu)建。青海建庫酵母文庫報(bào)價(jià)酵母文庫產(chǎn)品線由7個(gè)實(shí)驗(yàn)室組成,分別有RNA抽提室,RNA質(zhì)檢室、酵母建庫室、篩庫室等。
酵母雙雜交、GSTpull-down實(shí)驗(yàn)顯示,SWC6可以直接與HY5、HYH相互作用(圖A-C)。pull-down實(shí)驗(yàn)顯示ARP6同樣可以與HY5、HYH相互作用(圖D)。split-LUC、Co-IP實(shí)驗(yàn)證實(shí)HY5可以與SWC6、ARP6結(jié)合(圖E-J)。下胚軸表型分析顯示,藍(lán)光下arp6hy5hyh三突變體下胚軸長度明顯大于arp6突變體、hy5hyh雙突變體,表明ARP6和HY5有可能通過不同途徑調(diào)控下胚軸的發(fā)育。Semi-in vivo pull-down、Co-IP 實(shí)驗(yàn)顯示,藍(lán)光下,在 CRY1 存在下,SWC6 與 ARP6 的結(jié)合***增強(qiáng)。表明藍(lán)光***的 CRY1 可能通過藍(lán)光依賴的 CRY1-SWC6/ARP6 相互作用增強(qiáng) SWC6 與 ARP6 的結(jié)合。
小歐從2018年即開始關(guān)注酵母雜交與高通量測序相結(jié)合的技術(shù)發(fā)展,如2017年CaoGang老師等發(fā)表的RLL-Y2H技術(shù),實(shí)現(xiàn)了文庫篩文庫可能,該技術(shù)通過對(duì)酵母雙雜常用載體的改造,并結(jié)合高通量測序,可直接獲得AD-BD互作蛋白對(duì)。所用方法相當(dāng)巧妙,感興趣的同學(xué)請(qǐng)點(diǎn)擊《當(dāng)酵母雙雜交遇到高通量測序》。鈕老師團(tuán)隊(duì)之前的研究已經(jīng)鑒定了DAL1作為一種保守的針葉樹年齡生物標(biāo)記基因,在油松從營養(yǎng)生長到生殖生長的時(shí)相轉(zhuǎn)變過程中起重要作用。為了進(jìn)一步理解年齡效應(yīng)如何驅(qū)動(dòng)針葉樹的發(fā)育,闡明與DAL1相關(guān)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)很關(guān)鍵。鈕老師團(tuán)隊(duì)利用傳統(tǒng)的Y2H篩選技術(shù)結(jié)合NGS測序技術(shù),優(yōu)化得到了Y2H-seq技術(shù),與傳統(tǒng)的篩選測序相比,大幅度節(jié)省了時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本。文庫質(zhì)粒與酵母文庫載體重組。
單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導(dǎo)蘋果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子,作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌,通過酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋果愈傷組織cDNA文庫。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應(yīng)、***信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、木質(zhì)素生物合成、果實(shí)成熟發(fā)育等過程,以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中, MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子,由于其在草莓中的同源基因已被報(bào)導(dǎo)與黃酮的合成有關(guān),引起了研究者的注意。進(jìn)一步通過Y1H assay驗(yàn)證確認(rèn)了MdSCL8可以與MdFLS1啟動(dòng)子互作(圖2A)。通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和GUS檢測,發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負(fù)向調(diào)控MdFLS1啟動(dòng)子活性(圖2B-D)。結(jié)合自主優(yōu)化的SMART和GATEWAY三框接頭,可滿足各種酵母雙雜交文庫構(gòu)建要求。湖北應(yīng)用酵母文庫
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文章中酵母雙雜交文庫由歐易生物制備。2021年5月,北京林業(yè)大學(xué)鈕世輝副教授為通訊作者,在PlantPhysiology雜志(IF:6.902)在線發(fā)表了題為“MADS-boxtranscriptionfactorsMADS11andDAL1interacttomediatethevegetative-to-reproductivetransitioninpine”的研究論文,深入探討了油松中營養(yǎng)生長-生殖生長時(shí)相轉(zhuǎn)變調(diào)控的分子機(jī)制。北京林業(yè)大學(xué)馬晶晶博士為***作者,文章中酵母雙雜交文庫由歐易生物制備。本研究通過 7 個(gè)樹齡的油松樣品轉(zhuǎn)錄組測序,鑒定到一個(gè)與年齡信號(hào)***相關(guān)的基因模塊,該模塊包含 33 個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,包括 SOC1-like、DAL1 等。河南什么是酵母文庫做什么
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