湖北應(yīng)用酵母文庫(kù)

單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導(dǎo)蘋(píng)果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子，作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌，通過(guò)酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋(píng)果愈傷組織cDNA文庫(kù)。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應(yīng)、***信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、木質(zhì)素生物合成、果實(shí)成熟發(fā)育等過(guò)程，以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中， MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子，由于其在草莓中的同源基因已被報(bào)導(dǎo)與黃酮的合成有關(guān)，引起了研究者的注意。進(jìn)一步通過(guò)Y1H assay驗(yàn)證確認(rèn)了MdSCL8可以與MdFLS1啟動(dòng)子互作（圖2A）。通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和GUS檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負(fù)向調(diào)控MdFLS1啟動(dòng)子活性（圖2B-D）。酵母雙雜交優(yōu)惠快速出報(bào)告品牌歐易生物特色科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確。湖北應(yīng)用酵母文庫(kù)

酵母雙雜交技術(shù)，自創(chuàng)建以來(lái)被廣泛應(yīng)用于蛋白互作研究領(lǐng)域，在生命科學(xué)的基礎(chǔ)探秘研究中起著重要作用。然而該技術(shù)設(shè)計(jì)初衷，*是斯坦利先生為了完成申請(qǐng)學(xué)校經(jīng)費(fèi)的目的。該技術(shù)設(shè)計(jì)巧妙，它的許多優(yōu)點(diǎn)在設(shè)計(jì)之初并未顯現(xiàn)，反而在這么多年的高頻使用和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用過(guò)程中越發(fā)明顯。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）盡管酵母雜交技術(shù)揭示了蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的詳細(xì)信息，但操作簡(jiǎn)單。只需2個(gè)質(zhì)粒+1個(gè)菌株即可完成，且有不同體系方便選擇。（2）該技術(shù)利用比較好的DNA結(jié)合位點(diǎn)，有效的***結(jié)構(gòu)域和友好的報(bào)告基因系統(tǒng)，可以放大弱互作的信號(hào)。（3）該技術(shù)可用于各種物種的蛋白互作檢測(cè)，具有物種普適性，尤其是人類蛋白。（4）衍生技術(shù)具有更***的應(yīng)用，可擴(kuò)展到檢測(cè)蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與小分子以及其他組合之間的相互作用，甚至可實(shí)現(xiàn)將生理相互作用與表型數(shù)據(jù)直接關(guān)聯(lián)。當(dāng)然，做過(guò)酵母雜交實(shí)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都了解，互作結(jié)果的判斷，往往要等酵母生長(zhǎng)好幾天才能看出來(lái)（當(dāng)然，小歐認(rèn)為這在偉大的科研事業(yè)過(guò)程中算不上啥），互作強(qiáng)弱也是主觀判斷性較強(qiáng)，存在假陽(yáng)性。北京發(fā)展酵母文庫(kù)酵母文庫(kù)雙雜交技術(shù)及應(yīng)用。

蘋(píng)果酵母文庫(kù)：黃酮醇是一類重要的次生代謝產(chǎn)物，在防治人類**、*******、****血脂、抗氧化、抗病毒、抗過(guò)敏等方面發(fā)揮著重要作用。蘋(píng)果除了含有多種維生素之外，還富含黃酮醇，這是"一日一蘋(píng)果，醫(yī)生遠(yuǎn)離我"的重要原因。了解黃酮醇的生物合成調(diào)控對(duì)改善蘋(píng)果果實(shí)品質(zhì)、提高蘋(píng)果營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和提高蘋(píng)果環(huán)境適應(yīng)性具有重要意義。2022年2月，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)汪良駒團(tuán)隊(duì)在國(guó)際期刊分子科學(xué)上發(fā)表了題為“MdSCL8asaNegativeRegulatorParticipatesinALA-InducedFLS1toPromoteFlavonolAccumulationinApples”的研究論文，該研究發(fā)現(xiàn)MdSCL8作為MdFLS1的新調(diào)節(jié)因子，在ALA誘導(dǎo)蘋(píng)果黃酮醇積累的過(guò)程中發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。該項(xiàng)目中所用的蘋(píng)果酵母文庫(kù)由歐易生物構(gòu)建。

歐易生物酵母文庫(kù)技術(shù)發(fā)表的又一篇高水平研究論文。植物***茉莉酸(JA)參與植物許多發(fā)育過(guò)程的調(diào)控。JAZ蛋白是茉莉酸信號(hào)反應(yīng)的阻遏物，通過(guò)抑制JA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑來(lái)負(fù)向調(diào)節(jié)JA信號(hào)?；ㄇ嗨睾驮ㄇ嗨厥欠N子、葉、花和果實(shí)中重要的植物次生代謝產(chǎn)物，可充當(dāng)抗氧化劑，幫助***活性氧和對(duì)**老，對(duì)人類健康具有重要價(jià)值。已有研究表明，花青素和原花青素的生物合成基因的轉(zhuǎn)錄受MYB、basichelix-loop-helix(bHLH)及WD40蛋白的調(diào)控。其中，蘋(píng)果MYB轉(zhuǎn)錄因子MdMYB9參與調(diào)控JA介導(dǎo)的花青素和原花青素的生物合成，但其分子機(jī)制仍有待深入研究。眾所周知，酵母雜交技術(shù)存在一定的假陽(yáng)性。

通過(guò)傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)，以PtDAL1為誘餌，篩選樣本來(lái)源于不同年齡段的油松cDNA文庫(kù)。將獲得的陽(yáng)性克隆，10個(gè)一組，挑選到1個(gè)96孔板的PCR板孔中，獲得10*96個(gè)陽(yáng)性克隆的96孔板。以其中陽(yáng)性克隆mix為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將所有的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。使用純化后的PCR產(chǎn)物，進(jìn)行打斷后構(gòu)建二代測(cè)序文庫(kù)，通過(guò)NGS測(cè)序，獲得6G的陽(yáng)性克隆數(shù)據(jù)。通過(guò)分析二代測(cè)序數(shù)據(jù)，獲得陽(yáng)性克隆基因信息（去冗余后獲得135個(gè)互作子，包含21個(gè)TFs，2個(gè)TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結(jié)合等蛋白，部分見(jiàn)表1）。挑選重要的候選基因進(jìn)行一對(duì)一驗(yàn)證（圖2）。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行比對(duì)分析。對(duì)DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表達(dá)譜、啟動(dòng)子中的順勢(shì)作用元件功能進(jìn)行分析，并對(duì)DIPs進(jìn)行GO注釋（圖3）。綜合生信分析結(jié)果，構(gòu)建針葉樹(shù)老化途徑的調(diào)控模型（圖4）。酵母單雙雜交服務(wù)促銷(xiāo)季技術(shù)服務(wù)。吉林品質(zhì)酵母文庫(kù)做什么

酵母有那些結(jié)構(gòu)及各部分的功能是什么。湖北應(yīng)用酵母文庫(kù)

酵母單雜交篩選：（4）在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中，***GL1促進(jìn)HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細(xì)胞中***表達(dá)，并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中顯示HEK293T細(xì)胞中，***GL1過(guò)表達(dá)后，與LTR連接的螢火素酶表達(dá)上升近2倍，說(shuō)明***GL1是一個(gè)轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是，文章的背景介紹內(nèi)容中，對(duì)應(yīng)用其他技術(shù)（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）對(duì)HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析，發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見(jiàn)解，但并沒(méi)有直接評(píng)估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對(duì)酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)（如Chip-seq、motif預(yù)測(cè)）進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對(duì)已識(shí)別因子的驗(yàn)證率為30-60%，同等或優(yōu)于其他技術(shù)。湖北應(yīng)用酵母文庫(kù)

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