利用酵母雙雜交技術(shù)進(jìn)行篩選,結(jié)果顯示SP8可以與水稻OsMYC3蛋白相互作用,并且二者互作關(guān)系通過酵母一對(duì)一互作、BiFC、Co-IP、LCI實(shí)驗(yàn)得以驗(yàn)證(圖A-C)。利用截短的SP8進(jìn)行酵母一對(duì)一互作和Co-IP檢測(cè)表明,與OsMYC3的結(jié)合依賴于SP8的NTP結(jié)構(gòu)域(圖D-E);同樣,OsMYC3的TAD結(jié)構(gòu)域也是二者互作所必不可少的(圖F)。酵母雙雜交、BiFC實(shí)驗(yàn)表明,OsMYC3可以與OsJAZ相互作用。經(jīng)茉莉酸處理,野生對(duì)照株根的長(zhǎng)度明顯被抑制、一系列JA生物合成和信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)量上升,但Osmyc3突變體中抑制程度減輕、JA相關(guān)基因表達(dá)量上升減少。初篩+復(fù)篩提高目標(biāo)陽(yáng)性克隆質(zhì)粒精確度。一對(duì)一篩庫(kù)驗(yàn)證服務(wù),客戶無需再次驗(yàn)證。甘肅歐易生物酵母文庫(kù)報(bào)價(jià)
酵母雙雜交、GSTpull-down實(shí)驗(yàn)顯示,SWC6可以直接與HY5、HYH相互作用(圖A-C)。pull-down實(shí)驗(yàn)顯示ARP6同樣可以與HY5、HYH相互作用(圖D)。split-LUC、Co-IP實(shí)驗(yàn)證實(shí)HY5可以與SWC6、ARP6結(jié)合(圖E-J)。下胚軸表型分析顯示,藍(lán)光下arp6hy5hyh三突變體下胚軸長(zhǎng)度明顯大于arp6突變體、hy5hyh雙突變體,表明ARP6和HY5有可能通過不同途徑調(diào)控下胚軸的發(fā)育。Semi-in vivo pull-down、Co-IP 實(shí)驗(yàn)顯示,藍(lán)光下,在 CRY1 存在下,SWC6 與 ARP6 的結(jié)合***增強(qiáng)。表明藍(lán)光***的 CRY1 可能通過藍(lán)光依賴的 CRY1-SWC6/ARP6 相互作用增強(qiáng) SWC6 與 ARP6 的結(jié)合。安徽篩庫(kù)酵母文庫(kù)做什么酵母文庫(kù)篩庫(kù) 在酵母雙雜交系統(tǒng)中 。
進(jìn)行了酵母雙雜交篩選實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示 MdMPK3 可以與 MdWRKY17 相互作用(圖 C),并且通過 BiFC、Co-IP 得以證實(shí)(圖 D-E)。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升(圖 B)。進(jìn)一步的 BiFC 和 Co-IP 表明,MdMEK4 可以與 MdMPK3 相互作用(圖 F-G)。體外激酶試驗(yàn)表明,MdWRKY17 能夠被MdMEK4- MdMPK3 級(jí)聯(lián)磷酸化(圖 H)。綜上,MdMEK4-MdMPK3 級(jí)聯(lián)磷酸化 MdWRKY17。與對(duì)照相比,MdWRKY17過表達(dá)植株中水楊酸含量降低,而RNAiMdWRKY17植株中水楊酸含量升高(圖A)。
文章中酵母雙雜交文庫(kù)由歐易生物協(xié)助完成。近日,上海交通大學(xué)/復(fù)旦-交大-諾丁漢植物生物技術(shù)研發(fā)中心主任唐克軒課題組在New Phytologist(IF:8.512)發(fā)表了題為“AaWRKY9 contributes to light- and jasmonate-mediated to regulate the biosynthesis of artemisinin in Artemisia annua”的研究論文,揭示了青蒿轉(zhuǎn)錄因子AaWRKY9有助于光和茉莉酸信號(hào)所介導(dǎo)的青蒿素生物合成調(diào)控的新型分子機(jī)制,本研究通過藍(lán)/紅光誘導(dǎo)青蒿中青蒿素生物合成基因的表達(dá),使用轉(zhuǎn)錄組分析確定了一個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子AaWRKY9,可明顯***青蒿素生物合成相關(guān)基因的表達(dá)。酵母膜系統(tǒng)文庫(kù)構(gòu)建與篩選技術(shù)。
通過酵母雙雜交進(jìn)行篩選,結(jié)果顯示 SWC6 可以在藍(lán)光下與 CRY1 相互作用(圖 A-C)。同樣,酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)顯示 CRY2 也可以在藍(lán)光下與 SWC6 相互作用(圖 D)。并通過 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實(shí)驗(yàn)(圖 E-L)證實(shí) CRY1、CRY2 與 SWC6 的結(jié)合是藍(lán)光依賴性的。SWC6 是真核生物中已報(bào)道的 SWR1 復(fù)合物亞基,負(fù)責(zé)催化 H2A.Z 在染色質(zhì)上的替換。已報(bào)道 SWR1 復(fù)合物中 SWC6 可以與 ARP6 亞基結(jié)合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實(shí)驗(yàn)(圖 A-H)顯示,CRY1、CRY2 可以藍(lán)光依賴性與 ARP6 結(jié)合。酵母生長(zhǎng)速度快且容易操作的特點(diǎn)酵母文庫(kù)。廣東酵母文庫(kù)應(yīng)用
根據(jù)每個(gè)客戶的研究目標(biāo)和內(nèi)容靈活定制研究方案。既能提供建庫(kù)服務(wù),也能提供篩庫(kù)服務(wù)。甘肅歐易生物酵母文庫(kù)報(bào)價(jià)
單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導(dǎo)蘋果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子,作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌,通過酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋果愈傷組織cDNA文庫(kù)。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應(yīng)、***信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、木質(zhì)素生物合成、果實(shí)成熟發(fā)育等過程,以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中, MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子,由于其在草莓中的同源基因已被報(bào)導(dǎo)與黃酮的合成有關(guān),引起了研究者的注意。進(jìn)一步通過Y1H assay驗(yàn)證確認(rèn)了MdSCL8可以與MdFLS1啟動(dòng)子互作(圖2A)。通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和GUS檢測(cè),發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負(fù)向調(diào)控MdFLS1啟動(dòng)子活性(圖2B-D)。甘肅歐易生物酵母文庫(kù)報(bào)價(jià)
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