酵母雙雜交、pulldown和BiFC實(shí)驗(yàn)均顯示,MdTRB1可以通過其C末端與JAZ1蛋白互作。在蘋果葉片和愈傷組織中過表達(dá)MdJAZ1,花青素和原花青素的累積受到明顯抑制。在蘋果葉片和愈傷組織***表達(dá)MdJAZ1/MdJAZ1,結(jié)果顯示過表達(dá)MdJAZ1抑制了MdTRB1對(duì)花青素和原花青素累積的促進(jìn)作用。Pull down 實(shí)驗(yàn)和熒光素酶互補(bǔ)成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在 MdJAZ1 存在下,MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合減弱(圖 a-c);外源施加 JA 可以部分恢復(fù) MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合。對(duì)于 MdTRB1 在 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素積累中的作用機(jī)制,本研究建立了一個(gè)新的模型:MdTRB1 通過與 MdMYB9 互作,增強(qiáng)了 MdMYB9 對(duì)下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性,進(jìn)而正向調(diào)節(jié)了 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素累積。在 JA 缺乏的條件下,MdJAZ1 與 MdTRB1 互作,干擾了 MdTRB1 與 MdMYB9 之間的結(jié)合;在 JA 存在的條件下,MdJAZ1 被降解,MdTRB1 被釋放出來以參與后續(xù)過程。關(guān)于酵母雜交文庫構(gòu)建及篩選你需要知道這些。天津技術(shù)酵母文庫做什么
酵母文庫實(shí)驗(yàn)由歐易生物完成。6.902)在線發(fā)表了題為“MKK4-MPK3-WRKY17-mediated salicylic acid degradation increases susceptibility to Glomerella leaf spot in apple”的研究論文,報(bào)道了一個(gè)蘋果炭疽葉枯病易感相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子 MdWRKY17,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了詳細(xì)探討。蘋果是世界上頗受歡迎的水果。蘋果炭疽葉枯病(Glomerellaleafspot,GLS)在我國多次爆發(fā),是蘋果相當(dāng)有毀滅性的***病害之一,嚴(yán)重影響蘋果質(zhì)量和產(chǎn)量。但目前在蘋果中尚未鑒定出GLS的抗性基因。天津?qū)嵙湍肝膸熳鍪裁唇湍肝膸旌Y庫 在酵母雙雜交系統(tǒng)中 。
進(jìn)行了酵母雙雜交篩選實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示 MdMPK3 可以與 MdWRKY17 相互作用(圖 C),并且通過 BiFC、Co-IP 得以證實(shí)(圖 D-E)。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升(圖 B)。進(jìn)一步的 BiFC 和 Co-IP 表明,MdMEK4 可以與 MdMPK3 相互作用(圖 F-G)。體外激酶試驗(yàn)表明,MdWRKY17 能夠被MdMEK4- MdMPK3 級(jí)聯(lián)磷酸化(圖 H)。綜上,MdMEK4-MdMPK3 級(jí)聯(lián)磷酸化 MdWRKY17。與對(duì)照相比,MdWRKY17過表達(dá)植株中水楊酸含量降低,而RNAiMdWRKY17植株中水楊酸含量升高(圖A)。
歐易生物酵母平臺(tái),從公司成立伊始,伴隨著公司和客戶一路成長,櫛風(fēng)沐雨十多年。不僅積累了沉甸甸的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn),獲得了眾多客戶認(rèn)可,協(xié)助客戶發(fā)表Cell、Science 等前列期刊雜志。更值得驕傲的是,我們幫助了國內(nèi)眾多實(shí)驗(yàn)室,從無到有建立起了酵母雜交體系,對(duì)基礎(chǔ)科研貢獻(xiàn)了自己的一份力量。**值得欣喜的是,不斷有人從我們的酵母產(chǎn)品用戶成為了歐易大家庭的一員,流年笑擲,未來可期,我們一起攜手繼續(xù)做更走心的科研服務(wù)。歐易生物酵母平臺(tái),從公司成立伊始,伴隨著公司和客戶一路成長,櫛風(fēng)沐雨十多年。不僅積累了沉甸甸的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn),獲得了眾多客戶認(rèn)可,協(xié)助客戶發(fā)表Cell、Science 等前列期刊雜志。更值得驕傲的是,我們幫助了國內(nèi)眾多實(shí)驗(yàn)室,從無到有建立起了酵母雜交體系,對(duì)基礎(chǔ)科研貢獻(xiàn)了自己的一份力量。**值得欣喜的是,不斷有人從我們的酵母產(chǎn)品用戶成為了歐易大家庭的一員,流年笑擲,未來可期,我們一起攜手繼續(xù)做更走心的科研服務(wù)。酵母雙雜交優(yōu)惠快速出報(bào)告品牌歐易生物特色科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確。
蛋白被泛素化后(即蛋白上結(jié)合了泛素),意味著將要被運(yùn)往蛋白酶體降解,一般用于降解細(xì)胞內(nèi)老弱病殘蛋白,再回收利用。同時(shí)也被用于排除異己,抵御外敵。該過程需要一系列酶介導(dǎo):泛素***酶(E1)、泛素偶聯(lián)酶(E2)和泛素E3連接酶(E3)。其中E3是起特異性識(shí)別作用的,即決定誰該被降解,不能把好同志降解掉。所以E3基因很多,植物中主要有四種類型:HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**豐富的E3連接酶。本研究中,通過酵母雙雜交篩選到的標(biāo)題蛋白MdBT2,整好是CRLs亞家族之一。因此作者推測(cè)MdBT2可能在與ApNMV1a結(jié)合后,起到了促進(jìn)其泛素化和降解的作用。歐易生物酵母文庫項(xiàng)目發(fā)表 Science 封面文章歐易生物。天津應(yīng)用酵母文庫報(bào)價(jià)
傳統(tǒng)酵母雜交技術(shù)應(yīng)用已經(jīng)30多年,技術(shù)已經(jīng)成熟穩(wěn)定。天津技術(shù)酵母文庫做什么
本研究通過酵母雙雜交篩選,鑒定到 CRY1 可以與 SWR1 復(fù)合物關(guān)鍵亞基 SWC6、ARP6 結(jié)合,共同以藍(lán)光依賴模式調(diào)控 H2A.Z 在染色質(zhì)的沉積。藍(lán)光***的 CRY1 可以增強(qiáng) SWC6 與 ARP6 的相互作用。此外,HY5 也可以與 SWC6、ARP6 結(jié)合,將 SWR1 復(fù)合物募集到 HY5 靶向位置,調(diào)控 HY5 靶基因的表達(dá),進(jìn)而影響擬南芥下胚軸的伸長據(jù)此,本研究提出擬南芥光形態(tài)建成調(diào)控的分子機(jī)制:CRY1 通過增強(qiáng) SWR1 復(fù)合物活性和 HY5 介導(dǎo) SWR1 復(fù)合物向 HY5 靶基因的募集,共同促進(jìn) H2A.Z 染色質(zhì)沉積,以調(diào)控 HY5 靶基因的表達(dá)和藍(lán)光條件下光形態(tài)建成。天津技術(shù)酵母文庫做什么
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