酵母雙雜交文庫:本研究通過7個樹齡的油松樣品轉錄組測序,鑒定到一個與年齡信號***相關的基因模塊,該模塊包含33個轉錄因子,包括SOC1-like、DAL1等。油松和晚坐果白皮松突變體中的基因表達模式分析顯示,PtMADS11與生殖能力之間存在緊密相關性。酵母雙雜交顯示,MADS11和DAL1直接相關作用以參與對年齡信號的調(diào)控。過表達PtMADS11、PDAL1可以部分挽救擬南芥中miR156過表達或spl突變導致的開花延遲缺陷。只有PtMADS11可以挽救ft突變體中的開花缺陷,表明它與PtDAL1在擬南芥開花調(diào)控網(wǎng)絡中發(fā)揮了不同的作用。酵母雜交技術是很巧妙且很好用的蛋白/蛋白,蛋白/DNA等分子互作檢測的技術。河南建庫酵母文庫
通過傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng),以PtDAL1為誘餌,篩選樣本來源于不同年齡段的油松cDNA文庫。將獲得的陽性克隆,10個一組,挑選到1個96孔板的PCR板孔中,獲得10*96個陽性克隆的96孔板。以其中陽性克隆mix為模板,進行PCR擴增,并將所有的PCR產(chǎn)物進行純化。使用純化后的PCR產(chǎn)物,進行打斷后構建二代測序文庫,通過NGS測序,獲得6G的陽性克隆數(shù)據(jù)。通過分析二代測序數(shù)據(jù),獲得陽性克隆基因信息(去冗余后獲得135個互作子,包含21個TFs,2個TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結合等蛋白,部分見表1)。挑選重要的候選基因進行一對一驗證(圖2)。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網(wǎng)絡進行比對分析。對DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表達譜、啟動子中的順勢作用元件功能進行分析,并對DIPs進行GO注釋(圖3)。綜合生信分析結果,構建針葉樹老化途徑的調(diào)控模型(圖4)。河南建庫酵母文庫酵母文庫構建的目的酵母的做法。
酵母文庫實驗由歐易生物完成。6.902)在線發(fā)表了題為“MKK4-MPK3-WRKY17-mediated salicylic acid degradation increases susceptibility to Glomerella leaf spot in apple”的研究論文,報道了一個蘋果炭疽葉枯病易感相關的轉錄因子 MdWRKY17,并對其作用機制進行了詳細探討。蘋果是世界上頗受歡迎的水果。蘋果炭疽葉枯病(Glomerellaleafspot,GLS)在我國多次爆發(fā),是蘋果相當有毀滅性的***病害之一,嚴重影響蘋果質量和產(chǎn)量。但目前在蘋果中尚未鑒定出GLS的抗性基因。
酵母單雜交測試:為驗證該文庫在Y2H和Y1H體系中的有效性,作者以OsMADS1為誘餌篩選水稻轉錄因子文庫,進行了酵母雙雜交測試。以Ghd7的啟動子片段為誘餌,進行了酵母單雜交測試。結果顯示我們的水稻轉錄因子文庫可以有效且高通量的檢測蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF間的相互作用。另外,該研究中指出,使用該文庫篩選鑒定蛋白-TF互作,采用mating法較為方便,即Y2HGold-Bait誘餌菌液與Y187-TF文庫菌液一對一雜交。而篩選鑒定DNA-TF互作,采用Y1HGold系統(tǒng),即Y1HGold-pomoter篩選TF文庫質粒更簡單高效。此外,可通過降低篩選壓力處理,進行弱相互作用的檢測。什么是酵母文庫的構建? 只需構建自己需要研究蛋白的BD載體,就能和本司**儲備的酵母文庫進行篩庫實驗。
酵母雙雜交表明擬南芥AtBT2蛋白可以與AtRGA互作。與對照相比,擬南芥bt1/2雙突變體幼苗高度降低,而硝酸鹽處理可以進一步抑制其生長,外源施加GA可以回復其生長缺陷。在擬南芥中異源表達MdBT2可以明顯提高植株高度,而PAC處理則會抑制這種生長的促進作用。在擬南芥中異源表達MdRGL3a可以明顯抑制植株生長,而硝酸鹽處理和MdBT2過表達則會緩解這種生長抑制作用。外源GA處理可以逆轉以上對植株生長的影響(圖A-D)。以上結果表明,BT蛋白通過DELLA蛋白調(diào)控植株生長,這一機制在不同的植物中具有保守性。結合自主優(yōu)化的SMART和GATEWAY三框接頭,可滿足各種酵母雙雜交文庫構建要求。甘肅品質酵母文庫報價
酵母文庫篩庫 在酵母雙雜交系統(tǒng)中 。河南建庫酵母文庫
酵母文庫實驗實驗表明,MdTRB1 可以正向調(diào)節(jié)花青素和原花青素的累積。MdTRB1 與 MdMYB9 結合可以增強后者對下游基因的轉錄***活性。而 MdTRB1 與 MdJAZ1 的結合,可以干擾其與 MdMYB9 的互作,進而負向調(diào)控 MdTRB1 介導的對花青素和原花青素積累的促進作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9 復合物可以動態(tài)調(diào)控 JA 介導的花青素和原花青素的積累。本研究為進一步研究 JA 對花青素和原花青素生物合成的調(diào)節(jié)提供了新見解。本研究鑒定了一個可以與 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。實驗表明,MdTRB1 可以正向調(diào)節(jié)花青素和原花青素的累積。河南建庫酵母文庫
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