膜片鉗腦片

膜片鉗的應(yīng)用范圍：1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究；2.心肌細(xì)胞離子通道研究（尤其與藥物作用相關(guān)的）；3.常規(guī)與病理的離子通道作用機(jī)制研究；4.單細(xì)胞的形態(tài)與功能關(guān)系的研究；5.心血管藥理學(xué)的研究；6.腦片膜片鉗（證實(shí)了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài)，能使對(duì)腦細(xì)胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況，可檢驗(yàn)不同腦區(qū)間的神經(jīng)通路與功能鏈接）；7.神經(jīng)環(huán)路的研究（光遺傳或化學(xué)遺傳病毒載體表達(dá)的驗(yàn)證）；8.神經(jīng)突觸可塑性的研究。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成，增寬了記錄頻帶范圍，提高了分辨率。膜片鉗腦片

早在膜片鉗誕生之前，20世紀(jì)50~60年代，Hodgkin與Hexley便發(fā)現(xiàn)并使用了電壓鉗技術(shù)，他們通過(guò)雙電極電壓鉗在烏賊軸突上發(fā)現(xiàn)了動(dòng)作電位的離子機(jī)制，并因此獲得了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。這也為后來(lái)膜片鉗的誕生奠定了基礎(chǔ)。于1976年，德國(guó)馬克斯普朗克生物物理化學(xué)研究所的Neher和Sakmann第1次于青蛙的肌細(xì)胞上，用玻璃電極吸下了一小片細(xì)胞膜，記錄導(dǎo)了皮安級(jí)的單通道離子電流，從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。1980年，耶魯大學(xué)醫(yī)學(xué)院Sigworth等人在記錄電極內(nèi)增加了負(fù)壓吸引，實(shí)現(xiàn)了10-100GΩ的高阻抗封接，使得單電極可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)鉗制電位和記錄單通道電流。1991年，Neher與Sakmann因?yàn)閷?duì)膜片鉗技術(shù)的突出貢獻(xiàn)獲得了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。膜片鉗技術(shù)，在人類(lèi)對(duì)生理學(xué)的探究中，無(wú)異于一條道路，通往了名為細(xì)胞電生理的國(guó)度。膜片鉗技術(shù)也許某一天會(huì)被更便捷或更精確的技術(shù)取代，但其至今仍然是離子通道相關(guān)研究中使用蕞廣的技術(shù)。美國(guó)可升級(jí)膜片鉗產(chǎn)品介紹滔博生物膜片鉗實(shí)驗(yàn)外包,基因?qū)嵙?蛋白細(xì)胞,免疫檢測(cè),相關(guān)行業(yè)平臺(tái),實(shí)地考察,數(shù)據(jù)可靠。

1980年，Sigworth、Hamill、Neher等在記錄電極內(nèi)施加負(fù)壓吸引，得到了10~100GΩ的高阻封接（gigaseal），降低記錄噪聲，實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流。獲1991年Nobel獎(jiǎng)。1955年，Hodgkin和Keens應(yīng)用電壓鉗（Voltageclap）在研究神經(jīng)軸突膜對(duì)鉀離子通透性時(shí)發(fā)現(xiàn)放射性鉀跨軸突膜的運(yùn)動(dòng)很像是通過(guò)許多狹窄空洞的運(yùn)動(dòng)，并提出了"通道"的概念。1963年，描述電壓門(mén)控動(dòng)力學(xué)的Hodgkin-Hx上模型（簡(jiǎn)稱H-H模型）榮獲譜貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng)。1976年，Neher和Sakmann建立膜片鉗（Patchclamp）按術(shù)。1983年10月，《Single-ChannelRecording》一書(shū)問(wèn)世，奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑。1991年，Neher和Sakmann的膜片鋪技術(shù)榮獲諾貝爾醫(yī)學(xué)/生理學(xué)獎(jiǎng)。

膜片鉗技術(shù)是一種用于研究生物細(xì)胞膜離子通道的實(shí)驗(yàn)方法。它通過(guò)在細(xì)胞膜上形成小孔，從而對(duì)細(xì)胞膜的離子通道進(jìn)行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，研究人員通常會(huì)先將細(xì)胞膜上的脂質(zhì)雙層通過(guò)特殊設(shè)備進(jìn)行穿刺，形成一個(gè)小孔。然后，他們將一個(gè)玻璃微電極插入這個(gè)小孔中，以接觸并測(cè)量細(xì)胞膜內(nèi)部的電位變化。這個(gè)玻璃微電極的端非常細(xì)，不會(huì)對(duì)細(xì)胞膜產(chǎn)生太大的干擾。通過(guò)膜片鉗技術(shù)，科學(xué)家可以精確地測(cè)量離子通道的活動(dòng)，從而了解離子通道在細(xì)胞生理學(xué)中的作用。例如，他們可以測(cè)量離子通道在不同刺激下如何開(kāi)啟或關(guān)閉，以及這些變化如何影響細(xì)胞的電活動(dòng)和化學(xué)信號(hào)傳遞。此外，膜片鉗技術(shù)還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點(diǎn)。通過(guò)觀察藥物對(duì)離子通道活動(dòng)的影響，科學(xué)家可以評(píng)估新藥對(duì)特定疾病的zhi療潛力?？偟膩?lái)說(shuō)，膜片鉗技術(shù)是一種非常有用的實(shí)驗(yàn)方法，它為我們提供了深入研究細(xì)胞膜離子通道以及藥物作用機(jī)制的工具。不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同。

膜片鉗放大器的工作模式；(1)電壓鉗制模式:在鉗制細(xì)胞膜電位的基礎(chǔ)上改變膜電位，記錄離子通道電流的變化，如通道電流；EPSC；IPSC等電流信號(hào)它是膜片鉗的基本工作模式。(2)屯留鉗向細(xì)胞注入刺激電流，記錄膜電位對(duì)刺激電流的響應(yīng)。記錄的是動(dòng)作電位，EPSP；IPSP等電壓信號(hào)膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電位固定的關(guān)鍵是在玻璃微電極前沿與細(xì)胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封，使與電極前開(kāi)口相連的細(xì)胞膜與周?chē)h(huán)境電隔離，通過(guò)施加指令電壓來(lái)鉗制膜電位。玻璃微電極的應(yīng)用使的電生理研究進(jìn)行了重命性的變化。膜片鉗技術(shù)

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膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術(shù)。從技術(shù)層面來(lái)解釋的話，膜片鉗技術(shù)(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來(lái)記錄細(xì)胞膜離子通道電活動(dòng)的微電極技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的原理為：使用一個(gè)一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管，管中設(shè)有微電極，管的前列直徑約1.5~3.0μm，通過(guò)負(fù)壓吸引使前列口與細(xì)胞膜形成千兆歐姆級(jí)的阻抗封接，前列口內(nèi)的細(xì)胞膜區(qū)域與周?chē)渌麉^(qū)域形成了電學(xué)分隔，然后人工鉗制此片區(qū)域細(xì)胞膜的電位，即可達(dá)到對(duì)膜片上離子通道電流的監(jiān)測(cè)與記錄。膜片鉗腦片