PCR(PolymeraseChainReaction)技術(shù),即聚合酶連反應(yīng),是一種擴(kuò)大和復(fù)制目的片段DNA的技術(shù),其發(fā)現(xiàn)對(duì)于生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的意義。而3D數(shù)字PCR到底是什么鬼?它其實(shí)是出現(xiàn)的一款PCR儀,其具有對(duì)目的DNA分子做出定量的優(yōu)點(diǎn),進(jìn)而提供的準(zhǔn)確性、靈敏度。應(yīng)用該技術(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA進(jìn)行精確定量,精確度可通過(guò)復(fù)制次數(shù)實(shí)現(xiàn)。通過(guò)準(zhǔn)確性的進(jìn)行定量檢測(cè)基因,有助于臨床上在、病毒等疾病作參考。同時(shí),其具有高通量,檢測(cè)速度快,成本相對(duì)低等優(yōu)點(diǎn),為后期精細(xì)奠定基礎(chǔ)。數(shù)字PCR是定量技術(shù),基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量,是一種定量的方法。一體化數(shù)字PCR價(jià)格
在定量PCR時(shí),我們常常糾結(jié)一個(gè)問(wèn)題,究竟是相對(duì)定量還是***定量呢?如今,你無(wú)需糾結(jié)了,因?yàn)閿?shù)字PCR(digitalPCR)來(lái)了。盡管這兩種技術(shù)有些類似,都是估計(jì)起始樣品中的核酸量,但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來(lái)測(cè)定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究(如等位基因不平衡表達(dá))、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。上海一體化數(shù)字PCR生命科學(xué)用品dPCR被稱作第三代PCR技術(shù),但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。
數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來(lái)定量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,Ct值就是指可以檢測(cè)到熒光值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù);數(shù)字PCR是的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量,是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后,有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào),沒(méi)有模板的反應(yīng)器就沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。
常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致,會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響,可以進(jìn)行定量。如何在雙通道設(shè)置及雙探針標(biāo)記的情況下實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)?不同位點(diǎn)的雙探針檢測(cè)體系中引物和探針采用不同的終濃度,這樣陽(yáng)性微滴的終點(diǎn)FAM/HEX熒光信號(hào)強(qiáng)度就會(huì)不同,利用陽(yáng)性微滴不同的“分簇(cluster)”來(lái)區(qū)分不同的突變位點(diǎn)。采用對(duì)應(yīng)的KRAS野生型和突變型細(xì)胞系對(duì)雙重ddPCR檢測(cè)體系的性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示除了Q61H位點(diǎn)外,其他位點(diǎn)的檢測(cè)體系在54C的情況下均能很好的區(qū)分4個(gè)明顯的cluster。數(shù)字PCR等新興技術(shù)要在臨床應(yīng)用上得到爆發(fā)式增長(zhǎng),有賴于LDT市場(chǎng)的放開(kāi)。
面對(duì)日益嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)和可預(yù)期降低的儀器購(gòu)置成本,數(shù)字PCR將在食品檢測(cè)領(lǐng)域起到越來(lái)越重要的作用:同時(shí),數(shù)字PCR技術(shù)帶來(lái)的量值的溯源方式,也將成為轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的主要研究方向。發(fā)展dPCR協(xié)同分析和自動(dòng)化程度,使其具有更好兼容性、更低廉的成本,可使數(shù)據(jù)結(jié)果不間斷地納入到全食品安全全產(chǎn)業(yè)鏈中,從而在未來(lái)的食品檢測(cè)中得到更廣的應(yīng)用。dPCR多重檢測(cè)可在不使用標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下,在同一分析過(guò)程中同時(shí)測(cè)定單一或多個(gè)轉(zhuǎn)基因與參考基因的比率,提高檢測(cè)的效率節(jié)省重復(fù)操作。數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。廣東一體化數(shù)字PCR解決方案
楊雁峰博士堅(jiān)信數(shù)字PCR是可以應(yīng)用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術(shù)之一,這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。一體化數(shù)字PCR價(jià)格
數(shù)字PCR技術(shù)流分類目前,dPCR的基本方法都已經(jīng)建立,根據(jù)反應(yīng)單元的不同形式,主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng)。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,俗稱物理分隔法,公司有Fluidgm,Qiagen,Roche,ThermoFisher,;2)液滴分割法,俗稱油包水,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動(dòng)制滴法。PS:芯片式物理分割技術(shù)所有已經(jīng)過(guò)期,目前有不少公司在這個(gè)技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行開(kāi)發(fā),例如羅氏。一體化數(shù)字PCR價(jià)格
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司總部位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房,是一家儀器儀表批發(fā);商品批發(fā)貿(mào)易(許可審批類商品除外);商品零售貿(mào)易(許可審批類商品除外);教學(xué)設(shè)備的研究開(kāi)發(fā);辦公設(shè)備耗材批發(fā);生物技術(shù)開(kāi)發(fā)服務(wù);生物技術(shù)推廣服務(wù);計(jì)算機(jī)批發(fā);生物技術(shù)轉(zhuǎn)讓服務(wù);農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;水處理設(shè)備的研究、開(kāi)發(fā);食品科學(xué)技術(shù)研究服務(wù);環(huán)保設(shè)備批發(fā);辦公設(shè)備批發(fā);的公司。雙螺旋科學(xué)儀器擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供數(shù)字PCR,純水機(jī),病理切片機(jī),倍性分析儀。雙螺旋科學(xué)儀器致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn)。雙螺旋科學(xué)儀器始終關(guān)注精細(xì)化學(xué)品行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。