二項(xiàng)式分布是一個(gè)離散概率分布,它給出了m次試驗(yàn)中k次成功的可能性,每次試驗(yàn)的概率為p,例如當(dāng)擲骰子時(shí),二項(xiàng)分布給出了在10次試驗(yàn)中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中,投擲骰子類(lèi)似于將一個(gè)目標(biāo)實(shí)體隨機(jī)“投擲”到一組分區(qū)中,當(dāng)目標(biāo)落在選定的分區(qū)中時(shí),就是成功。如果有n個(gè)分區(qū),并且分區(qū)過(guò)程是完全隨機(jī)的,則目標(biāo)出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗(yàn)重復(fù)m次,樣品中的每個(gè)分子一次。更多關(guān)于PCR的相關(guān)信息,歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。數(shù)字PCR是直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的定量。美國(guó)銳訊數(shù)字PCR價(jià)格
20世紀(jì)末,Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digitalPCR,dPCR)的概念,通過(guò)將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬(wàn)份,分配到不同的反應(yīng)單元,每個(gè)單元至少包含一個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板),在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)各個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。PCR實(shí)際上是一個(gè)在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下,DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng),擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。蘇州銳訊數(shù)字PCR生命科學(xué)用品dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量,即拷貝數(shù)轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比,而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量,其結(jié)果基于統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行定量,增加反應(yīng)單元數(shù)量(統(tǒng)計(jì)樣本量),可以增加其檢測(cè)的容量和動(dòng)態(tài)檢測(cè)線性范圍達(dá)到和qPCR相近的動(dòng)態(tài)范圍,同時(shí)減小一個(gè)反應(yīng)單元中包含多個(gè)分子所造成的誤差,達(dá)到提高靈敏度和準(zhǔn)確度。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括:儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定,分散體積和結(jié)果表達(dá)方式需要實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中優(yōu)化得到。
dPCR的測(cè)量結(jié)果通常表示為含量,即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比,而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場(chǎng)上可購(gòu)買(mǎi)到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)(單倍體基因組當(dāng)量)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來(lái)表示特性量;以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來(lái)表示特性量。不同方法使用不同的表示方式,會(huì)造成測(cè)量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化,才能得到單位一致,數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)??截悢?shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。
在精細(xì)診療領(lǐng)域,患者外周血中的循環(huán)DNA(ctDNA),在的早期篩查,圍術(shù)期監(jiān)測(cè),藥物療效評(píng)估,預(yù)后等方面具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。在肺液體活檢領(lǐng)域,EGFR突變由于其在東亞人群中的高突變率,實(shí)現(xiàn)精細(xì)檢測(cè)顯得尤為重要。研究表明,相較于熒光定量PCR,數(shù)字PCR對(duì)于血液ctDNA的檢測(cè)靈敏度更高(0.01%),EGFR突變的陽(yáng)性檢出率也更高。在患者術(shù)后復(fù)發(fā)檢測(cè)中,數(shù)字PCR評(píng)估出的ctDNA陽(yáng)性,可以早于影像學(xué)數(shù)月提前揭示出患者復(fù)發(fā)。因此,該項(xiàng)技術(shù)在肺精細(xì)診療中具有重要的作用。通過(guò)創(chuàng)新技術(shù)微流控芯片,讓數(shù)字PCR單反應(yīng)耗材價(jià)格進(jìn)入個(gè)位數(shù),實(shí)現(xiàn)了新的進(jìn)步,也降低開(kāi)發(fā)難度。廣州全自動(dòng)數(shù)字PCR品牌
數(shù)字PCR作為研發(fā)階段的驗(yàn)證方案之一。美國(guó)銳訊數(shù)字PCR價(jià)格
全自動(dòng)樣本制備系統(tǒng)DMX-1000配備氣流發(fā)生裝置和氣壓控制裝置,能夠?qū)崿F(xiàn)高精度壓力控制,結(jié)合**產(chǎn)品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術(shù),DMX-1000可以在70秒內(nèi)快速、穩(wěn)定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數(shù)量可達(dá)2萬(wàn)-60萬(wàn)個(gè),粒徑范圍30-120μm,性能穩(wěn)定。除此之外,銳訊還提供微流控芯片的定制服務(wù),以滿足不同的液滴數(shù)目和尺寸要求。平板式快速擴(kuò)增儀TC-1000,不再使用傳統(tǒng)的96孔板,而是特制的液滴擴(kuò)增芯片;不再是傳統(tǒng)的“燒開(kāi)水”加熱模式,代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式。在這樣的改進(jìn)之下,TC-1000完成40個(gè)PCR循環(huán)只需約45分鐘(TC-2.0升級(jí)版更是把時(shí)間縮短到了25分鐘?。?,大幅縮短了等待時(shí)間,提升了實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。這對(duì)實(shí)驗(yàn)人員而言,無(wú)疑是莫大的福利——高效完成工作,不加班——愛(ài)工作,也愛(ài)生活。美國(guó)銳訊數(shù)字PCR價(jià)格
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司是以提供數(shù)字PCR,純水機(jī),病理切片機(jī),倍性分析儀為主的有限責(zé)任公司(自然),雙螺旋科學(xué)儀器是我國(guó)精細(xì)化學(xué)品技術(shù)的研究和標(biāo)準(zhǔn)制定的重要參與者和貢獻(xiàn)者。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR,純水機(jī),病理切片機(jī),倍性分析儀為主業(yè),服務(wù)于精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域,為全國(guó)客戶提供先進(jìn)數(shù)字PCR,純水機(jī),病理切片機(jī),倍性分析儀。多年來(lái),已經(jīng)為我國(guó)精細(xì)化學(xué)品行業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)濟(jì)等的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。