根據(jù)泊松分布的定義和適用條件可知，如果我們?cè)O(shè)微液滴總數(shù)為N，投入的靶序列拷貝數(shù)為M，那么“每個(gè)微液滴中的靶序列拷貝數(shù)”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前，首先要明確一點(diǎn)，在檢測(cè)的過(guò)程中，并不是說(shuō)一個(gè)樣本中檢測(cè)到了幾個(gè)亮點(diǎn)，這個(gè)反應(yīng)當(dāng)中就有幾個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因?yàn)槟繕?biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說(shuō)進(jìn)不進(jìn)的概率相等，并且相互獨(dú)立）。所以，一個(gè)發(fā)光的微滴中，可能有一個(gè)或者三個(gè)四個(gè)，甚至更多個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對(duì)一的對(duì)應(yīng)關(guān)系。目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學(xué)顯微鏡觀測(cè)為主。蘇州臻準(zhǔn)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
引物設(shè)計(jì)（DesignPrimers）：引物長(zhǎng)度（PrimerLength）：18-25個(gè)堿基之間。短的引物更易于同靶序列結(jié)合，但過(guò)短的引物也更可能同基因組上的多個(gè)區(qū)域相結(jié)合而產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。更長(zhǎng)的引物會(huì)提高同靶序列結(jié)合的特異性，但過(guò)長(zhǎng)的引物（>30bp）同靶序列結(jié)合速度變慢，降低結(jié)合率。引物長(zhǎng)度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數(shù)量的百分比，該值應(yīng)在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物。廣東銳訊數(shù)字PCR儀器dPCR被稱作第三代PCR技術(shù)，但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。
基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術(shù)，將樣品平均分配到20000個(gè)微滴油包水中，利用微滴分析儀對(duì)微滴進(jìn)行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅(qū)動(dòng)下，將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分割成包含100萬(wàn)至1000萬(wàn)個(gè)皮升級(jí)別微滴的反應(yīng)乳液。數(shù)字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數(shù)字PCR，其原理都是有限稀釋?zhuān)K點(diǎn)PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系，平均分配成幾萬(wàn)個(gè)PCR反應(yīng)，分配到芯片或微滴中，使每個(gè)反應(yīng)中盡可能含有一個(gè)模板分子，進(jìn)行單分子模板PCR反應(yīng)，通過(guò)讀取熒光信號(hào)的有或無(wú)進(jìn)行計(jì)數(shù)，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)泊松分布的校準(zhǔn)進(jìn)行定量。
本次推出的全自動(dòng)數(shù)字PCR一體機(jī)可以適用于包括醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域在內(nèi)的多種應(yīng)用場(chǎng)景。對(duì)于可以實(shí)現(xiàn)早期篩查、早期診斷、用藥指導(dǎo)以及監(jiān)測(cè)的復(fù)發(fā)。對(duì)于病原體可以實(shí)現(xiàn)超多重檢測(cè)，以利于快速診斷。在優(yōu)生優(yōu)育領(lǐng)域也可以實(shí)現(xiàn)更多遺傳性疾病的診斷和檢測(cè)。對(duì)于臨床應(yīng)用具有極大的潛力和價(jià)值。通過(guò)線上+線下的方式舉行了數(shù)字PCR2.0技術(shù)方案研討會(huì)，來(lái)自醫(yī)療界的**學(xué)者共聚一堂，圍繞PCR技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用進(jìn)行交流和討論。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。數(shù)字PCR是直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，是對(duì)起始樣品的定量。
無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的锏應(yīng)用。首先，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查領(lǐng)域?qū)τ诩骖櫝杀?、?zhǔn)確性、速度的創(chuàng)新技術(shù)的需求還未滿足。其次，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查市場(chǎng)空間龐大，雖說(shuō)中國(guó)每年新生兒的增長(zhǎng)速度正在放緩，但每年仍有超過(guò)1000萬(wàn)的新生兒，帶來(lái)了巨大的想象空間。2022年6月，鄭大一附院遺傳與產(chǎn)前診斷中心、塔歌生物聯(lián)合在JournalofTranslationalMedicine（影響因子5.531）雜志上發(fā)表文章，驗(yàn)證了數(shù)字PCR作為T(mén)21,T18和T13產(chǎn)前篩查方法的可行性，這是世界上報(bào)道在真實(shí)臨床條件下通過(guò)盲檢實(shí)現(xiàn)一管反應(yīng)可從孕婦血漿樣本中同時(shí)檢測(cè)出T21、T18和T13的數(shù)字PCR無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查試劑盒。文章顯示，塔歌生物胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查數(shù)字PCR試劑盒總體篩查的靈敏度為100%，特異性為95.12%，均優(yōu)于血清學(xué)篩查。除準(zhǔn)確率高之外，塔歌生物的產(chǎn)品還擁有成本低、操作簡(jiǎn)便，及檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)，可以加速無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查在各級(jí)醫(yī)院，特別是基層地區(qū)普遍落地，助力中國(guó)出生缺陷防控。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊(cè)證的申報(bào)。一體化數(shù)字PCR原理
3D數(shù)字PCR是基于納米流體芯片進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)一次檢測(cè)，將樣品分到數(shù)千個(gè)單獨(dú)的PCR。蘇州臻準(zhǔn)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
數(shù)字PCR產(chǎn)品的發(fā)展，為不同場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路，尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面，在 性疾病早期檢測(cè)、病癥的液體活檢、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。實(shí)現(xiàn) 性疾病早期高效檢測(cè)——以病毒為例，有病毒檢測(cè)、和臨床樣本病毒載量評(píng)估He監(jiān)測(cè)環(huán)境病毒載量；二代熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)是目前病毒檢測(cè)的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但由于病毒探針結(jié)合位點(diǎn)突變、樣本病毒載量不足等原因，在臨床檢測(cè)過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)假陰性結(jié)果，由于數(shù)字PCR具有更高的靈敏度、精細(xì)度，以及其適合痕量樣本檢測(cè)的特性，能夠檢測(cè)出熒光定量PCR檢測(cè)過(guò)程中錯(cuò)過(guò)的 ，可作為后者的補(bǔ)充。在人群篩查及臨床診療中，為科學(xué)選取采樣方式，需要評(píng)估不同臨床樣本病毒載量，如鼻咽拭子、血尿、糞便、肺泡灌洗液等，由于數(shù)字PCR可提供一定程度上量化指標(biāo)，為采樣方法的選取提供了參考，從而提高檢出率。在外防輸入的戰(zhàn)略要求下，環(huán)境病毒檢測(cè)工作尤為重要，數(shù)字PCR可對(duì)低核酸豐度樣本進(jìn)行有效檢測(cè)，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本，如病房、醫(yī)院衛(wèi)生間、實(shí)驗(yàn)室等等，在病情防控中起到了不可忽視的作用。此外，數(shù)字PCR的應(yīng)用場(chǎng)景還有病程不同階段的病毒載量評(píng)估、核酸參考品制備、抗病毒藥物研發(fā)等環(huán)節(jié)。蘇州臻準(zhǔn)數(shù)字PCR分析應(yīng)用
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司屬于精細(xì)化學(xué)品的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。公司致力于為客戶提供安全、質(zhì)量有保證的良好產(chǎn)品及服務(wù)，是一家有限責(zé)任公司（自然）企業(yè)。公司始終堅(jiān)持客戶需求優(yōu)先的原則，致力于提供高質(zhì)量的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀。雙螺旋科學(xué)儀器以創(chuàng)造***產(chǎn)品及服務(wù)的理念，打造高指標(biāo)的服務(wù)，引導(dǎo)行業(yè)的發(fā)展。