數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。全自動(dòng)數(shù)字PCR一體機(jī)可以適用于包括醫(yī)療檢測領(lǐng)域在內(nèi)的多種應(yīng)用場景。廣東數(shù)字PCR系統(tǒng)
相比于qPCR，dPCR在轉(zhuǎn)基因檢測中具有以下優(yōu)勢：（1）檢測靈敏度高：理論上dPCR的靈敏度可達(dá)1個(gè)拷貝，而實(shí)際應(yīng)用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數(shù)值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目標(biāo)拷貝數(shù)下得到精確的結(jié)果；通常轉(zhuǎn)基因比參考基因（內(nèi)源基因）濃度低很多；（2）前處理簡單且受基質(zhì)成分干擾較?。篸PCR反應(yīng)效率和精密度受到食品基質(zhì)成分干擾影響較小，可應(yīng)用于混合基質(zhì)樣品中低豐度DNA的檢測；（3）dPCR對抑制劑的敏感性較低：由于dPCR結(jié)果表示為“有熒光“或“無熒光”，即使存在抑制劑降低了熒光強(qiáng)度仍可以表示為“有熒光；（4）適合多重轉(zhuǎn)基因檢測：食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉(zhuǎn)基因片段，可以進(jìn)行多重dPCR檢測，提高分析效率。同時(shí)，dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究，一次可識別不同的轉(zhuǎn)基因區(qū)域。下面詳細(xì)進(jìn)行說明。上海全自動(dòng)多重?cái)?shù)字PCR價(jià)格通過數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系，用于同時(shí)檢測比如非小細(xì)胞中常見的MET和HER2耐藥擴(kuò)增。
數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個(gè)樣本分成幾到幾十萬份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增結(jié)束后，將有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例，計(jì)算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量：不再依賴于Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實(shí)現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數(shù)字PCR可實(shí)現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測、表達(dá)量微小差異鑒定、單細(xì)胞基因表達(dá)等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大的作用，數(shù)字PCR適用于生物標(biāo)志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達(dá)研究等，并對遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段，具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。
20世紀(jì)末，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digitalPCR，dPCR)的概念，通過將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元至少包含一個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后對各個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。PCR實(shí)際上是一個(gè)在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)，擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。楊雁峰博士堅(jiān)信數(shù)字PCR是可以應(yīng)用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的理想技術(shù)之一，這也是他2016年創(chuàng)立塔歌生物的初衷。
dPCR的測量結(jié)果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉(zhuǎn)基因質(zhì)量百分比，而QPCR結(jié)果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。目前市場上可購買到大多數(shù)轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以qPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當(dāng)量）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)來表示特性量；以dPCR定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會造成測量結(jié)果不可比。因此質(zhì)量分?jǐn)?shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關(guān)系需要轉(zhuǎn)化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉(zhuǎn)換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分?jǐn)?shù)。檢測結(jié)果部分為陽性，部分為陰性，之后進(jìn)行分子數(shù)統(tǒng)計(jì)，不需做標(biāo)曲。法國微滴式數(shù)字PCR
通過創(chuàng)新技術(shù)微流控芯片，讓數(shù)字PCR單反應(yīng)耗材價(jià)格進(jìn)入個(gè)位數(shù)，實(shí)現(xiàn)了新的進(jìn)步，也降低開發(fā)難度。廣東數(shù)字PCR系統(tǒng)
數(shù)字PCR產(chǎn)品的發(fā)展，為不同場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面，在 性疾病早期檢測、病癥的液體活檢、無創(chuàng)產(chǎn)前檢查等領(lǐng)域展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。實(shí)現(xiàn) 性疾病早期高效檢測——以病毒為例，有病毒檢測、和臨床樣本病毒載量評估He監(jiān)測環(huán)境病毒載量；二代熒光定量PCR檢測技術(shù)是目前病毒檢測的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但由于病毒探針結(jié)合位點(diǎn)突變、樣本病毒載量不足等原因，在臨床檢測過程中經(jīng)常出現(xiàn)假陰性結(jié)果，由于數(shù)字PCR具有更高的靈敏度、精細(xì)度，以及其適合痕量樣本檢測的特性，能夠檢測出熒光定量PCR檢測過程中錯(cuò)過的 ，可作為后者的補(bǔ)充。在人群篩查及臨床診療中，為科學(xué)選取采樣方式，需要評估不同臨床樣本病毒載量，如鼻咽拭子、血尿、糞便、肺泡灌洗液等，由于數(shù)字PCR可提供一定程度上量化指標(biāo)，為采樣方法的選取提供了參考，從而提高檢出率。在外防輸入的戰(zhàn)略要求下，環(huán)境病毒檢測工作尤為重要，數(shù)字PCR可對低核酸豐度樣本進(jìn)行有效檢測，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本，如病房、醫(yī)院衛(wèi)生間、實(shí)驗(yàn)室等等，在病情防控中起到了不可忽視的作用。此外，數(shù)字PCR的應(yīng)用場景還有病程不同階段的病毒載量評估、核酸參考品制備、抗病毒藥物研發(fā)等環(huán)節(jié)。廣東數(shù)字PCR系統(tǒng)
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