在PCR進(jìn)行的過程中，首先是引物和探針分別結(jié)合，然后開始擴(kuò)增。如果一個(gè)微滴當(dāng)中有目標(biāo)基因的片段，Taqman探針就會(huì)被酶切碎，熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離。在后面的檢測過程中，熒光基團(tuán)被激發(fā)光路激發(fā)之后就會(huì)發(fā)熒光。如果沒有，Taqman探針就不會(huì)被切碎，在后面的檢測過程中，熒光基團(tuán)吸收到激發(fā)光的能量，就會(huì)被淬滅基團(tuán)給淬滅，那么儀器就檢測不到這個(gè)微滴的信號(hào)。檢測的過程中，并不是說一個(gè)樣本中檢測到了幾個(gè)亮點(diǎn)，這個(gè)反應(yīng)當(dāng)中就有幾個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因?yàn)槟繕?biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進(jìn)不進(jìn)的概率相等，并且相互獨(dú)立）。所以，一個(gè)發(fā)光的微滴中，可能有一個(gè)或者三個(gè)四個(gè)，甚至更多個(gè)目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對一的對應(yīng)關(guān)系。我國數(shù)字PCR市場的整體規(guī)模、公司影響力、行業(yè)話語權(quán)等也將迎來進(jìn)一步提升，從而助推行業(yè)高質(zhì)量創(chuàng)新發(fā)展。蘇州進(jìn)口數(shù)字PCR分析應(yīng)用
數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量，其結(jié)果基于統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行定量，增加反應(yīng)單元數(shù)量（統(tǒng)計(jì)樣本量），可以增加其檢測的容量和動(dòng)態(tài)檢測線性范圍達(dá)到和qPCR相近的動(dòng)態(tài)范圍，同時(shí)減小一個(gè)反應(yīng)單元中包含多個(gè)分子所造成的誤差，達(dá)到提高靈敏度和準(zhǔn)確度。影響dPCR定量結(jié)果的因素包括：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定，分散體積和結(jié)果表達(dá)方式需要實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)過程中優(yōu)化得到。德國微滴式數(shù)字PCR儀器數(shù)字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子定量技術(shù)。
Drop-off實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)針對相同擴(kuò)增子的TaqMan探針：與野生型序列互補(bǔ)而與突變位點(diǎn)不發(fā)生互補(bǔ)的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補(bǔ)的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交，產(chǎn)生雙重陽性信號(hào)（如圖1B，藍(lán)色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個(gè)核苷酸的突變也會(huì)阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標(biāo)基因進(jìn)行退火，從而得到一個(gè)陽性信號(hào)。
數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測以外，也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測。
對于檢測需要高靈敏度以及技術(shù)確認(rèn)的情況下，數(shù)字PCR技術(shù)也可以發(fā)揮重要作用。技術(shù)數(shù)據(jù)表明，數(shù)字PCR技術(shù)對的比較低檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。經(jīng)測試，數(shù)字PCR在檢測和診斷的某些方面優(yōu)于金標(biāo)準(zhǔn)qPCR，尤其是在低病毒載量樣本中，相比起qPCR，數(shù)字PCR特異性、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測限受影響更小。因此，未來預(yù)計(jì)數(shù)字PCR技術(shù)也將在類疾病中得到更加廣的應(yīng)用。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測以外，也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測。通過數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系，用于同時(shí)檢測比如非小細(xì)胞肺中常見的MET和HER2耐藥擴(kuò)增。有研究報(bào)道，使用數(shù)字PCR技術(shù)對436例非小細(xì)胞肺樣品進(jìn)行檢測，并挑選樣本驗(yàn)證了數(shù)字PCR與RNA fish的檢測一致性。結(jié)果表明，該數(shù)字PCR技術(shù)在保證了基因擴(kuò)增檢測準(zhǔn)確性的同時(shí)，還節(jié)約了檢測時(shí)間。Drop-off數(shù)字PCR檢測方法的**主要優(yōu)勢是能夠能夠在一個(gè)反應(yīng)中檢測到基因組序列范圍短的同源基因突變。德國臻準(zhǔn)數(shù)字PCR解決方案
無創(chuàng)產(chǎn)前篩查有望成為數(shù)字PCR在臨床快速落地的應(yīng)用。蘇州進(jìn)口數(shù)字PCR分析應(yīng)用
企業(yè)宗旨：成為數(shù)字PCR的，更好地服務(wù)于體外診斷行業(yè)，讓檢測更簡單！企業(yè)價(jià)值觀：用戶，質(zhì)量為本；潛力而為，主動(dòng)開拓；高效執(zhí)行，負(fù)責(zé)到底。發(fā)展歷程：2016年，企業(yè)成立2017年，數(shù)字PCR系統(tǒng)研制成功2018年，產(chǎn)品線成熟2019年，生產(chǎn)線建成“讓檢測，更簡單”。臻準(zhǔn)生物誠摯邀請您蒞臨展會(huì)現(xiàn)場，洽談合作、共贏未來！作為華南地區(qū)備受舉薦的專業(yè)平臺(tái)，BTE始終以昂首積極的姿態(tài)迎接數(shù)萬專業(yè)人士，攜手生物技術(shù)行業(yè)從業(yè)者共同探討行業(yè)發(fā)展新機(jī)遇。多年來，BTE始終時(shí)刻探索業(yè)界風(fēng)向，吸納行業(yè)前沿資源，不忘宗旨，銳意開拓，正圍繞粵港澳大灣區(qū)生物行業(yè)產(chǎn)業(yè)群的協(xié)同發(fā)展交流與融合打造一個(gè)高水平科技創(chuàng)新載體和平臺(tái)。蘇州進(jìn)口數(shù)字PCR分析應(yīng)用
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