德國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR熒光通道

來源: 發(fā)布時間:2023-01-15

數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個樣本分成幾到幾十萬份,分配到不同的反應(yīng)單元,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板),在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增;擴增結(jié)束后,將有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,終根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例,計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量:不再依賴于Ct值和標準曲線,直接給出靶序列的起始濃度,實現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性:數(shù)字PCR可實現(xiàn)萬分之一稀有樣本的定量,可用于極微量核酸樣本檢測、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大的作用,數(shù)字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測、轉(zhuǎn)基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等,并對遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段,具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。通過數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重熒光體系,用于同時檢測比如非小細胞中常見的MET和HER2耐藥擴增。德國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR熒光通道

相比于qPCR,dPCR在轉(zhuǎn)基因檢測中具有以下優(yōu)勢:(1)檢測靈敏度高:理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝,而實際應(yīng)用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數(shù)值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數(shù)下得到精確的結(jié)果;通常轉(zhuǎn)基因比參考基因(內(nèi)源基因)濃度低很多;(2)前處理簡單且受基質(zhì)成分干擾較?。篸PCR反應(yīng)效率和精密度受到食品基質(zhì)成分干擾影響較小,可應(yīng)用于混合基質(zhì)樣品中低豐度DNA的檢測;(3)dPCR對抑制劑的敏感性較低:由于dPCR結(jié)果表示為“有熒光“或“無熒光”,即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光;(4)適合多重轉(zhuǎn)基因檢測:食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉(zhuǎn)基因片段,可以進行多重dPCR檢測,提高分析效率。同時,dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉(zhuǎn)基因標準物質(zhì)研究,一次可識別不同的轉(zhuǎn)基因區(qū)域。下面詳細進行說明。廣東全自動多重數(shù)字PCR試劑盒目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學顯微鏡觀測為主。

現(xiàn)有dPCR分析方法采用熒光探針和基于光的檢測方法來鑒定擴增產(chǎn)物。這些方法要求足夠的靶分子擴增以產(chǎn)生足以被檢測到的信號,但可能會導致額外的錯誤或偏差,因此,希望能夠提供一種改進的、用于檢測樣品內(nèi)感興趣的核酸的方法,其采用替代性分析方法,具有提高的準確度和精確度,并且其具有可以與基于dPCR的方法關(guān)聯(lián)使用的靈敏度。dPCR還在樣品內(nèi)進行單一反應(yīng),但是所述樣品被分離成大量的分區(qū)(partition),并且所述反應(yīng)在每個分區(qū)中單獨進行。這種分離允許對核酸量進行靈敏的測量。DPCR已被證明可有效用于研究基因序列中的變異,例如拷貝數(shù)變異或點突變。

二項式分布是一個離散概率分布,它給出了m次試驗中k次成功的可能性,每次試驗的概率為p,例如當擲骰子時,二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中,投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區(qū)中,當目標落在選定的分區(qū)中時,就是成功。如果有n個分區(qū),并且分區(qū)過程是完全隨機的,則目標出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗重復(fù)m次,樣品中的每個分子一次。更多關(guān)于PCR的相關(guān)信息,歡迎咨詢廣州雙螺旋科學儀器有限公司。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量。

目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度??梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量,根據(jù)泊松分布的原理,反應(yīng)體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算,從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。dPCR被稱作第三代PCR技術(shù),但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。華南地區(qū)臻準數(shù)字PCR品牌

數(shù)字PCR技術(shù)min檢測下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。德國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR熒光通道

精細化學品品種多,同一種中間體產(chǎn)品經(jīng)不同的工藝流程可延伸出幾種甚至幾十種不同用途的衍生品,生產(chǎn)工藝復(fù)雜多變,技術(shù)復(fù)雜。精細化工各種產(chǎn)品均需要經(jīng)過實驗室開發(fā)、小試、中試再到規(guī)?;a(chǎn),還需要根據(jù)下游客戶的需求變化及時更新或改進,對產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性要求較高,需要企業(yè)在生產(chǎn)的過程中不斷改進工藝,積累經(jīng)驗。因此,有限責任公司(自然)企業(yè)對細分領(lǐng)域精細化工產(chǎn)品衍生開發(fā)、對生產(chǎn)工藝的經(jīng)驗積累及創(chuàng)新能力是一個精細化工企業(yè)的重點競爭力。精細化學品是指能增進或賦予一種(類)產(chǎn)品以特定功能或本身擁有特定功能的小批量制造和應(yīng)用的、技術(shù)密度高、附加值高,純度高的化學品,是基礎(chǔ)化學品進一步深加工的產(chǎn)物。國際上精細化學品已有40-50個門類,10萬多個品種。精細化學品應(yīng)用于日常生活的方方面面,如醫(yī)藥、染料、農(nóng)藥、涂料、日化用品、電子材料、造紙化學品、油墨、食品添加劑、飼料添加劑、水處理等,還在航空航天、信息技術(shù)、新材料、新能源技術(shù)、環(huán)保等高新技術(shù)方面普遍應(yīng)用。在未來的發(fā)展中,精細化工的生產(chǎn)技術(shù)的加入會與研發(fā)技術(shù)的加入相當,甚至占有更大的比重。生產(chǎn)技術(shù)是使技術(shù)研究和設(shè)想變成可能的渠道,是數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀等產(chǎn)品能否產(chǎn)出的關(guān)鍵,所以生產(chǎn)技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用具有不可忽視的作用。德國醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR熒光通道

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