激光掃描共聚焦顯微鏡是目前生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用和圖像分辨率比較高的實驗儀器它是在熒光顯微鏡成像基礎(chǔ)上加裝了激光掃描裝置,利用計算機(jī)進(jìn)行圖像處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細(xì)胞或**內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像 已成為形態(tài)學(xué)、分子細(xì)胞生物學(xué)、材料科學(xué)等諸多領(lǐng)域中有力的研究工具。激光掃描共聚焦顯微鏡主要由 1、光學(xué)顯微鏡部分 2、激光發(fā)射器 本院的LSCM使用三個激光器氬離子激光器 488nm 氦氖綠激光器543nm 氦氖紅激光器 633nm 這三個激光器可做三通道熒光標(biāo)記 可使用絕大多數(shù)常見的綠、紅或遠(yuǎn)紅外激發(fā) 3、掃描裝置 檢測***光柵、分光鏡...

通常來說國產(chǎn)顯微鏡與進(jìn)口顯微鏡有如下不同之處： 1、 價格， 國產(chǎn)顯微鏡價格低廉， 一般從幾千到幾萬價格不等， 比較適合檢驗要求不高， 設(shè)備資金有限的中小企業(yè)。 進(jìn)口顯微鏡通常是從幾萬到幾十萬， 因廠家和型號的不同價格變 化較大， 主要使用于檢驗要求較高采購資金比較充裕的中大型企業(yè)。 2、 產(chǎn)品質(zhì)量， 雖然國產(chǎn)設(shè)備還在發(fā)展進(jìn)步， 但真實的講產(chǎn)品質(zhì)量和技術(shù)方面與國外進(jìn) 口的差距還是很大的， 個人認(rèn)為短期內(nèi)是無法追趕上了。 3、 光學(xué)系統(tǒng)： 國產(chǎn)顯微鏡大多數(shù)采用的是有限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 因此產(chǎn)品的功能都比較簡 單， 部分**產(chǎn)品采用的是無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 但...

掃描探針顯微鏡是除了場離子顯微鏡和**辨率透射電子顯微鏡之后的第三種以原子尺 度觀察物質(zhì)結(jié)構(gòu)的顯微鏡。 以 STM 為例， 其橫向分辨率為 0.1~0.2nm， 縱向深度分辨率則為 0.01nm， 這樣的分辨率可以清楚地觀測到分布在樣品表面的單個原子或分子。 同時， SPM 還可以在空氣， 其他氣體或液體環(huán)境下進(jìn)行觀察研究。 掃描探針顯微鏡擁有原子分辨、 原子搬運、 納米微加工等特點， 但是由于細(xì)部各種掃描 顯微鏡的工作原理不同， 它們得到的結(jié)果所反映的樣品表面信息是很不同的。 STM 測量的是 樣品表面的電子臺分布信息， 具有原子級別的分辨率但...

雙色激發(fā)比雙光子激發(fā)的優(yōu)勢并不在于較高的分辨率，而是在于小目標(biāo)物經(jīng)過較大散射媒質(zhì)后更容易觀察。事實上，與雙光子激發(fā)比較，雙色激發(fā)在焦點內(nèi)熒光散射增加，而干擾背景熒光只有很小增加。結(jié)合多光子熒光技術(shù)，多光子共聚焦顯微鏡（MultiphotonExcitation－MPE）的發(fā)展成功的解決了傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡（單光子共聚焦顯微鏡）所存在的問題，MPE的激光源是超快激光器（多為鈦寶石激光器，可以達(dá)到皮秒或者飛秒級的掃描速度），具有非常高的峰值功率和較低的平均功率，從而可以減小或者消除光漂白和光毒作用。多光子的吸收現(xiàn)象是非線性效應(yīng)，只發(fā)生在聚焦焦點處，不需要共聚焦孔徑光闌濾光，從而提高成像亮...

超分辨光學(xué)顯微鏡NANOPSISM采用了新一代超分辨辨技術(shù)，即固態(tài)半球超級透鏡成像技術(shù)，突破傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的光學(xué)衍射分辨率極限，使顯微鏡的橫向分辨率達(dá)到50nm。通過該成像技術(shù)，用戶能夠得到超分辨辨率彩圖像并保留光學(xué)顯微鏡所有優(yōu)勢-快速、簡單、無損、完整、真實顏色。在100X浸水物鏡上加裝固態(tài)半球超級透鏡裝置，在水平分辨率上可以從原來的200nm提高到50nm，等同于400X物鏡的實際效果。生物醫(yī)學(xué)成像技術(shù)是基礎(chǔ)生物學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)**重要的工具之一?；仡櫄v史，已有多位科學(xué)家憑借在成像技術(shù)方面的突破獲得諾貝爾獎。其中，Ｒoentgen因發(fā)現(xiàn)X射線獲得1901年諾貝爾物理學(xué)獎;Zern...

細(xì)胞膜流動性測定細(xì)胞膜熒光探針受到極化光線激發(fā)后,其發(fā)射光極性依賴于熒光分子的旋轉(zhuǎn),而這種有序的運動自由度依賴于熒光分子周圍的膜流動性,因此極性測量可間接反應(yīng)膜的流動性。這種膜流動性測定在膜的磷脂酸組成分析、作用位點、溫度反應(yīng)測定和物種比較等方面有重要作用。細(xì)胞的物理化學(xué)動態(tài)監(jiān)測CLSM可對細(xì)胞形狀、周長、面積、平均熒光強(qiáng)度及細(xì)胞內(nèi)顆粒數(shù)等參數(shù)進(jìn)行自動測定,能對細(xì)胞的溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞骨架、結(jié)構(gòu)性蛋白質(zhì)、DNA、RNA、酶和受體分子等細(xì)胞內(nèi)特異結(jié)構(gòu)的含量、組分及分布進(jìn)行定量、定性、定時及定位測定。光活化技術(shù)生物體內(nèi)許多重要的活性物質(zhì)和化合物均可形成籠鎖化合物,在處于籠鎖狀...

顯微鏡技術(shù)經(jīng)過長期發(fā)展，加之近年來物理學(xué)界接二連三出現(xiàn)的重大科研進(jìn)展，終于，在2008年，顯微鏡發(fā)展史上的新成果——超分辨率熒光顯微鏡為科學(xué)家所研制出。人們預(yù)言，它定會成為生物學(xué)家的好幫手。超分辨光學(xué)顯微鏡采用了新一代超分辨技術(shù)，即固態(tài)半球超級透鏡成像技術(shù)，突破傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的光學(xué)衍射分辨率極限，使顯微鏡的橫向分辨率達(dá)到50nm。通過該成像技術(shù)，用戶能夠得到超分辨率彩圖像并保留光學(xué)顯微鏡所有優(yōu)勢-快速、簡單、無損、完整、真實顏色。在100X浸水物鏡上加裝固態(tài)半球超級透鏡裝置，在水平分辨率上可以從原來的200nm提高到50nm，等同于400X物鏡的實際效果。它采用結(jié)構(gòu)照明顯微成像技術(shù)...

實際上，衍射極限是一種遠(yuǎn)場(far-field)效應(yīng)，在近場(near-field)條件下無效。因此早期的一些嘗試突破光學(xué)衍射極限的努力都是基于近場光學(xué)成像的。像這次諾貝爾獎得主EricBetzig就早在1993年發(fā)展了掃描近場光學(xué)顯微鏡，實現(xiàn)了室溫下的單分子超分辨率成像。然而，近場光學(xué)顯微鏡無法用于細(xì)胞內(nèi)部的成像，因此在生物領(lǐng)域的應(yīng)用一直沒有發(fā)展起來。后期的各種“突破”光學(xué)衍射極限的努力都是在遠(yuǎn)場條件下發(fā)展起來的。超分辨率顯微成像一般指在遠(yuǎn)場條件下基于熒光的、“突破”衍射極限的光學(xué)顯微成像技術(shù)。熒光是物質(zhì)吸收光照后發(fā)出的一類光。物質(zhì)分子中的電子分布在不同的能級上。當(dāng)一束光打到分子...

通常來說國產(chǎn)顯微鏡與進(jìn)口顯微鏡有如下不同之處： 1、 價格， 國產(chǎn)顯微鏡價格低廉， 一般從幾千到幾萬價格不等， 比較適合檢驗要求不高， 設(shè)備資金有限的中小企業(yè)。 進(jìn)口顯微鏡通常是從幾萬到幾十萬， 因廠家和型號的不同價格變 化較大， 主要使用于檢驗要求較高采購資金比較充裕的中大型企業(yè)。 2、 產(chǎn)品質(zhì)量， 雖然國產(chǎn)設(shè)備還在發(fā)展進(jìn)步， 但真實的講產(chǎn)品質(zhì)量和技術(shù)方面與國外進(jìn) 口的差距還是很大的， 個人認(rèn)為短期內(nèi)是無法追趕上了。 3、 光學(xué)系統(tǒng)： 國產(chǎn)顯微鏡大多數(shù)采用的是有限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 因此產(chǎn)品的功能都比較簡 單， 部分**產(chǎn)品采用的是無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)， 但...

激光掃描共聚焦顯微鏡（LaserScanningCon-focalMicroscope，LSCM）是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種新型高精度顯微鏡。它在普通熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用可激發(fā)的熒光探針，采用敏感的光電倍增管作為檢測器，利用計算機(jī)控制掃描反射鏡并進(jìn)行圖像采集、處理和分析。激光掃描共聚焦顯微技術(shù)不僅可用于觀察各種固定的細(xì)胞和結(jié)構(gòu)，還可對活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和離子的變化進(jìn)行實時動態(tài)觀察和測定。目前，這種技術(shù)已用于細(xì)胞形態(tài)定位、三維結(jié)構(gòu)重建、細(xì)胞內(nèi)離子動態(tài)變化過程等研究，并與定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段和技術(shù)相結(jié)合，在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等分...

STM所具有的獨特優(yōu)點 （l） 具有原子級的**辨率。 STM在平行和 垂直樣品表面方向的分辨率分別可達(dá)0.1nm 和0.01nm， 即可以分辨出單個原子。 2 （2） 可實時地得到在實空間中表面的準(zhǔn)三維 圖象， 可用于具有周期性或不具備周期性的 表面結(jié)構(gòu)研究。 （3） 可以觀察單個原子層的局部表面結(jié)構(gòu)， 而不是體相或整個表面的平均性質(zhì)。 4） 可在真空、 大氣、 常溫等不同環(huán)境下工作， 甚至可將樣品浸在水和其它溶液中， 不需要特別 的制樣技術(shù)， 且探測過程對樣品無損傷。 （ 5） 配合掃描隧道譜...

由探針及金屬表面電流來探測其間距等情況這個原理制作的顯微鏡雖然放大倍數(shù)極高， 但是有著物理性的局限性， 這類顯微鏡要求被測的樣品必須是導(dǎo)電的導(dǎo)體或者半導(dǎo)體， 對于 絕緣的被測樣品則沒有實際的應(yīng)用。 由此， 1984 年， 蘇黎世研究所利用實心石英棒制成的納米透光小孔研制出了掃描近場 光學(xué)顯微鏡， 突破了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的衍射極限， 分辨率達(dá)到光波長的二十分之一。 而在 1985 年， G.Binning、 C.F.Qoate 和 Ch.Gerber 在 STM 的理論基礎(chǔ)上研制出了 原子力顯微鏡（AFM）。 雙光子顯微鏡在哪里可以買到？天津新型...

定性定量定位熒光分析CLSM可對單、雙或三色標(biāo)記的細(xì)胞及標(biāo)本的熒光進(jìn)行定性定量定位分析,還可測定膜電位和配體結(jié)合等生化反應(yīng)程度。此外,還適用于高靈敏度的快速免疫熒光測定,可以準(zhǔn)確檢測抗原表達(dá)、熒光原位雜交斑點及細(xì)胞結(jié)合和殺傷的形態(tài)學(xué)特性并作定量分析,以揭示諸如**相關(guān)抗原表達(dá)的準(zhǔn)確定位及定量信息。3·2系列光學(xué)切片及三維圖像重建共聚焦成像利用光源與檢測共軛這一特性,可有效同一焦平面上非測量點的雜散熒光及來自標(biāo)本中非焦平面的熒光,因而具有深度識別能力及縱向分辨率,可看到較厚生物標(biāo)本的細(xì)節(jié),得到完整活的或固定的細(xì)胞,從而得到各層面的信息,所以也被形象地稱為“顯微CT”。標(biāo)本的各層光學(xué)切...

所以， 雙光子顯微鏡比單光子顯微鏡更適合用來觀察厚標(biāo)本、 更適合 用來觀察活細(xì)胞、 或用來進(jìn)行定點光漂白實驗。 利用雙光子顯微鏡， 我們可以對腦科學(xué)的幾個前沿領(lǐng)域進(jìn)行更加 深入的研究。 利用雙光子顯微鏡的光遺傳學(xué)操作能力， 我們可以對某 類神經(jīng)元和失活進(jìn)行高精度的操作， 對這些神經(jīng)元的特殊功能的進(jìn) 行研究。 我們可以對皮層在清醒、 靜息狀態(tài)下就存在有組 織的腦功能活動進(jìn)行觀察， 從而加深我們對大腦在內(nèi)外環(huán)境的監(jiān)測、 情節(jié) 記憶及自我意識方面的理解。 利用雙光子顯微鏡的多點光能力， 我們可以研究多個神經(jīng)細(xì)胞之間的連接和控制， 來更好的了解神經(jīng)...

所以， 雙光子顯微鏡比單光子顯微鏡更適合用來觀察厚標(biāo)本、 更適合 用來觀察活細(xì)胞、 或用來進(jìn)行定點光漂白實驗。 利用雙光子顯微鏡， 我們可以對腦科學(xué)的幾個前沿領(lǐng)域進(jìn)行更加 深入的研究。 利用雙光子顯微鏡的光遺傳學(xué)操作能力， 我們可以對某 類神經(jīng)元和失活進(jìn)行高精度的操作， 對這些神經(jīng)元的特殊功能的進(jìn) 行研究。 我們可以對皮層在清醒、 靜息狀態(tài)下就存在有組 織的腦功能活動進(jìn)行觀察， 從而加深我們對大腦在內(nèi)外環(huán)境的監(jiān)測、 情節(jié) 記憶及自我意識方面的理解。 利用雙光子顯微鏡的多點光能力， 我們可以研究多個神經(jīng)細(xì)胞之間的連接和控制， 來更好的了解神經(jīng)...

超分辨光學(xué)顯微鏡NANOPSISM采用了新一代超分辨辨技術(shù)，即固態(tài)半球超級透鏡成像技術(shù)，突破傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的光學(xué)衍射分辨率極限，使顯微鏡的橫向分辨率達(dá)到50nm。通過該成像技術(shù)，用戶能夠得到超分辨辨率彩圖像并保留光學(xué)顯微鏡所有優(yōu)勢-快速、簡單、無損、完整、真實顏色。在100X浸水物鏡上加裝固態(tài)半球超級透鏡裝置，在水平分辨率上可以從原來的200nm提高到50nm，等同于400X物鏡的實際效果。生物醫(yī)學(xué)成像技術(shù)是基礎(chǔ)生物學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)**重要的工具之一?；仡櫄v史，已有多位科學(xué)家憑借在成像技術(shù)方面的突破獲得諾貝爾獎。其中，Ｒoentgen因發(fā)現(xiàn)X射線獲得1901年諾貝爾物理學(xué)獎;Zern...

雙光子顯微鏡激光共聚焦顯微鏡在進(jìn)行生物樣品研究工作中還存在很多局限和問題：一是標(biāo)記染料的光漂白現(xiàn)象。因為共焦孔徑光闌必須足夠小以獲得較分辨率的圖像，而孔徑小又會擋掉很大部分從樣品發(fā)出的熒光，包括從焦平面發(fā)出的熒光，相應(yīng)的，激發(fā)光必須足夠強(qiáng)以獲得足夠的信噪比；而**度的激光會使熒光染料在連續(xù)掃描過程中迅速褪色，熒光信號會隨著掃描進(jìn)程度進(jìn)行變得越來越弱。光毒作用是另外一個問題，在激光照射下，許多熒光染料分子會產(chǎn)生諸如單態(tài)氧或自由基等細(xì)胞，所以實驗中要限制掃描時間和激發(fā)光的光功率密度以保持樣品的活性。在針對活性樣品的研究中，尤其是活性樣品生長、發(fā)育過程的各個階段，光漂白和光毒現(xiàn)象使這些研...

在空氣的環(huán)境下， 用壓電晶體微懸臂的共振頻率或接近這一頻率 來振蕩懸臂， 從而實現(xiàn)了 輕敲模式的成像原理。 當(dāng)針尖未與表面接觸 時， 壓電的運動產(chǎn)生了 懸臂大振幅的振蕩。 。 振蕩的針尖朝向樣品表面 運動直到針尖開始輕輕地接觸到樣品或敲擊到表面。 微懸臂的振蕩就 會由于針尖與表面接觸引起的能量的損失而必然地下降。 這種振幅交 替下降用于檢測并測量表面形貌。 檢測器測量到這些交替變化的振幅值, , 再通過反饋回路, , 調(diào)整針尖 與樣品之間的距離， 保證振幅恒定在某一個恒定值, , 這樣針尖在掃描 過程中的運動軌跡就反映了 樣品的表面形 貌 激...

3． 雙光子顯微鏡的激光器有何特別之處？ 雙光子吸收幾率依賴于兩個入射光子在空間和時間上的重合程度（兩個光子必須在 10－18 秒內(nèi)到達(dá)） 。 雙 光子吸收截面很小， 只有在具有很大光子流量的區(qū)域的熒光團(tuán)才會被激發(fā)。 因此所用激光器多為鈦寶石激 光器， 可以達(dá)到皮秒或者飛秒級的掃描速度， 且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率， 從而可以減小 或者消除光漂白和光毒作用。 **主要的是在一個很小的范圍提供非常高密度的光子， 可以保證雙光子的同 時激發(fā)。 激光掃描共聚焦顯微鏡哪個牌子的好？云南掃描探針顯微鏡 1、動態(tài)連續(xù)掃描及三維圖像重組 LSCM可以對對活...

在傳統(tǒng)熒光顯微鏡中， 一個熒光團(tuán)吸收一個光子， 該光子能量對應(yīng)于 熒光團(tuán)基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差。 通過一個較短壽命的虛態(tài)， 也可以通過同 時吸收兩個較低能量（即更高的波長） 的光子激發(fā)熒光。 例如， 吸收兩個 紅色波長的光子， 可以激發(fā)一個吸收紫外的分子。 雙光子激發(fā)是一個非線 性過程， 對激發(fā)光強(qiáng)度有平方依賴關(guān)系。 使用單激發(fā)光源， 雙光子具有相同的波長， 該技術(shù)被稱為雙光子激發(fā) 熒光顯微術(shù)。 如果兩個光子具有不同的波長， 就稱作雙色激發(fā)熒光顯微術(shù)。 雙光子吸收幾率依賴于兩個入射光子在空間和時間上的重合程度（兩 個光子必須在 10－18 秒內(nèi)...

細(xì)胞分選CLSM進(jìn)行細(xì)胞分選有兩種方式:①激光消除法,在特制的培養(yǎng)皿上有兩類細(xì)胞,一類是未作熒光染色的細(xì)胞群,另一類是作熒光染色的細(xì)胞群,基于細(xì)胞形態(tài)及熒光特性,利用高能激光把染色的細(xì)胞群殺死,而將未染色的完整細(xì)胞亞群保留并繼續(xù)培養(yǎng),該方式適用于數(shù)量較多細(xì)胞的分選;②Coolie-Cut-terTT法,利用高能激光于底部帶膜的特制培養(yǎng)皿上在預(yù)選細(xì)胞四周割成八角形,而非選細(xì)胞則在該形狀之外被除去,此方式適用于數(shù)量較少的突變細(xì)胞、轉(zhuǎn)移細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞,即使百萬分之一幾率也非常理想。激光顯微細(xì)胞外科技術(shù)CLSM可將激光作為“光子刀”使用,完成諸如細(xì)胞膜瞬間穿孔,線粒體、溶酶體等細(xì)胞器燒灼...

激光掃描共聚焦顯微鏡(confocallaserscanningmi-croscopy,CLSM)是一種新型高精度的激光源加共聚焦顯微鏡,是利用激光作為光源,在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機(jī)對所觀察分析對象進(jìn)行數(shù)字圖像處理的一套觀察和分析系統(tǒng)其比較大特點是對標(biāo)本進(jìn)行無損傷性的實時觀察分析,得到細(xì)胞或結(jié)構(gòu)內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像,以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號以及細(xì)胞形態(tài)的變化,對生物標(biāo)本進(jìn)行定性、定量、定時和定位研究,具有極大的優(yōu)越性[1]。主要構(gòu)件一個完整的CLSM系統(tǒng)由幾個主要的硬件和一些成像分析軟件組成。硬件包括表面熒光顯...