免疫沉淀實驗在解析細胞內復雜的生物化學過程中起著關鍵作用,它是我們窺探細胞微觀世界的重要窗口。實驗開始前,對實驗目的和預期結果的清晰規(guī)劃是必不可少的。例如,是要研究某個特定蛋白質的相互作用網絡,還是要探究其翻譯后修飾的情況。根據不同的研究目的,選擇合適的實驗方法和技術手段。在實驗進行中,嚴格的質量控制至關重要。從抗體的質量檢測到實驗操作的規(guī)范性,每一個環(huán)節(jié)都可能引入誤差。為了確保實驗結果的可重復性和可靠性,需要建立標準化的操作流程,并對每一批次的實驗進行嚴格的質量評估。免疫沉淀實驗的結果往往能為我們提供豐富的信息。它不僅能夠揭示蛋白質之間的直接相互作用,還能發(fā)現一些間接的關聯。這些信息如同拼圖...
通過離心等方法,可以將這些免疫復合物從樣本中分離出來,從而實現對目標蛋白質的純化。免疫沉淀在生命科學研究中有著廣泛的應用。在蛋白質組學研究中,它可以幫助科學家確定蛋白質之間的相互作用網絡。通過免疫沉淀一種已知的蛋白質,然后分析與之結合的其他蛋白質,就能夠揭示出細胞內復雜的蛋白質相互作用關系。此外,免疫沉淀還可以用于檢測蛋白質的表達水平、研究蛋白質的修飾狀態(tài)以及探索蛋白質在疾病發(fā)展中的作用。在醫(yī)學領域,免疫沉淀也發(fā)揮著重要的作用。免疫沉淀技術ChIP的優(yōu)缺點是什么?溫州RIP免疫沉淀選磁珠還是瓊脂糖珠例如,在疾病診斷中,可以通過檢測患者血液中的特定抗原或抗體,為疾病的診斷提供重要的依據。同時,免...
免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結構 (直徑 50-150 μm) 可以結合抗體 (繼而結合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構,這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸,具有更高的結合載量。 與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力,但每體積的磁珠數量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。 簡而言之,瓊脂糖珠的結合能力較強,而磁珠在得率,可重復性以...
免疫沉淀作為研究蛋白質功能的重要手段,為我們深入理解生命活動的內在機制提供了有力支持。它能夠幫助我們確定蛋白質在細胞內的定位。通過將細胞裂解,然后對特定的蛋白質進行免疫沉淀,結合顯微鏡觀察或其他分析方法,可以了解該蛋白質是位于細胞核、細胞質還是細胞膜等特定部位。這種定位信息對于理解蛋白質的功能至關重要,因為不同的定位往往意味著不同的功能和作用機制。免疫沉淀還可以用于研究蛋白質的周轉和降解。通過在不同時間點進行免疫沉淀,并檢測蛋白質的含量變化,可以了解其在細胞內的半衰期和降解途徑。這對于研究細胞如何調控蛋白質的水平,以及在疾病狀態(tài)下蛋白質代謝的異常具有重要意義。而且,免疫沉淀在研究蛋白質復合物的...
免疫沉淀是探索細胞內復雜分子互動網絡的重要方法。在細胞代謝的研究中,它幫助我們了解關鍵酶與其他調節(jié)蛋白之間的相互作用。例如,在糖代謝過程中,通過免疫沉淀特定的糖代謝酶,可以發(fā)現與之結合并調節(jié)其活性的蛋白質,從而揭示細胞如何精細調控代謝途徑以適應不同的生理需求。對于神經生物學的研究,免疫沉淀同樣具有重要價值。神經元之間的信號傳遞依賴于一系列蛋白質的協同作用,通過免疫沉淀相關的神經遞質受體或信號蛋白,可以揭示神經信號傳導過程中的分子機制,為理解神經系統(tǒng)的功能和疾病的發(fā)展提供深入的見解。而且,免疫沉淀在研究細胞應激反應中也發(fā)揮著關鍵作用。當細胞受到外界壓力,如氧化應激或熱休克時,會產生一系列應激蛋白...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)的實驗設計通常包括以下幾個關鍵步驟: 1. 目標蛋白質的選擇: 2. 抗體的選擇:選擇特異性強、親和力高的抗體來捕獲目標蛋白質 3. 樣本的準備:收集和準備細胞或組織樣本。 4. 蛋白質的裂解和釋放:選擇合適的裂解條件,如pH值、離子強度、去污劑等。 5. 蛋白質濃度的測定:確定裂解液中蛋白質的濃度,以便于后續(xù)步驟的標準化。 6. 免疫沉淀的操作:將特異性抗體與裂解液混合,并在適宜的條件下孵育,以形成抗體-抗原復合物。 7. 非特異性結合的減少:通過預純化步驟去除可能的非特異性...
免疫沉淀實驗是深入探究生物體內分子機制的強大工具,它為揭示生命的奧秘提供了關鍵的線索。實驗的準備工作需要嚴謹細致。首先要確保樣品的質量和純度,這是實驗成功的基礎。同時,選擇合適的抗體至關重要,其特異性和親和力直接影響到實驗結果的準確性和可靠性。在實驗操作過程中,每一個步驟都需要精確控制條件。孵育時間、溫度和溶液的離子強度等因素都會對抗體與目標分子的結合產生影響。稍有偏差,可能就會導致實驗結果的偏差甚至失敗。免疫沉淀實驗的一大優(yōu)勢在于其能夠在復雜的生物樣品中特異性地富集目標分子。這使得我們能夠從海量的信息中聚焦于關鍵的分子相互作用,如同在茫茫星空中找到特定的星座。通過對沉淀下來的復合物進行進一步...
免疫沉淀實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。 3. 抗體類型:單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應用驗證:選擇已經過驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。 5. 供應商信息:選擇信譽良好的抗體供應商,并查看供應商提供的技術數據和客戶評價,以幫助做出決策。 免疫沉淀...
胞內的移動軌跡,并分析與之相互作用的伴侶分子,從而揭示蛋白質的轉運機制和調控因素。對于膜蛋白的研究,免疫沉淀面臨著特殊的挑戰(zhàn),但也帶來了獨特的解決方案。膜蛋白由于其特殊的結構和環(huán)境,難以直接進行研究。然而,通過巧妙設計的免疫沉淀實驗,結合去垢劑處理和特殊的緩沖條件,可以有效地沉淀膜蛋白,并研究其與胞質蛋白的相互作用,為理解膜蛋白的功能和信號傳導機制提供了有力手段。此外,免疫沉淀在研究蛋白質的同源或異源多聚體形成方面具有重要價值。許多蛋白質通過形成多聚體來發(fā)揮功能,通過免疫沉淀特定的單體蛋白,可以同時沉淀與其結合的其他同源或異源亞基,進而解析多聚體的組成和結構,為深入理解蛋白質的協同作用和功能調...
首先,選擇合適的抗體是關鍵,抗體的特異性和親和力直接影響實驗結果的準確性。其次,免疫沉淀過程中可能存在非特異性結合和背景信號的問題,需要進行嚴格的洗滌步驟和對照實驗來排除這些干擾因素。此外,免疫沉淀技術對樣本的要求較高,需要足夠的蛋白質含量和純度??傊?,蛋白免疫沉淀是一種重要的實驗技術,廣泛應用于生物醫(yī)學研究中。通過選擇合適的抗體和優(yōu)化實驗條件,可以高效地富集目標蛋白質及其相互作用伙伴,揭示蛋白質的功能和調控機制。隨著技術的不斷發(fā)展,蛋白免疫沉淀將在生物醫(yī)學研究中發(fā)揮越來越重要的作用。免疫沉淀RIP技術選瓊脂糖珠還是磁珠?溫州ChIP免疫沉淀磁珠貨期免疫沉淀實驗是生物研究領域中一項極其重要的技...
免疫沉淀實驗在解析細胞內復雜的生物化學過程中起著關鍵作用,它是我們窺探細胞微觀世界的重要窗口。實驗開始前,對實驗目的和預期結果的清晰規(guī)劃是必不可少的。例如,是要研究某個特定蛋白質的相互作用網絡,還是要探究其翻譯后修飾的情況。根據不同的研究目的,選擇合適的實驗方法和技術手段。在實驗進行中,嚴格的質量控制至關重要。從抗體的質量檢測到實驗操作的規(guī)范性,每一個環(huán)節(jié)都可能引入誤差。為了確保實驗結果的可重復性和可靠性,需要建立標準化的操作流程,并對每一批次的實驗進行嚴格的質量評估。免疫沉淀實驗的結果往往能為我們提供豐富的信息。它不僅能夠揭示蛋白質之間的直接相互作用,還能發(fā)現一些間接的關聯。這些信息如同拼圖...
免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學技術,它利用抗體的特異性結合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質。這種技術是研究蛋白質表達、蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白質修飾和蛋白質功能的強大工具。免疫沉淀技術的優(yōu)缺點...
ChIP實驗的基本步驟包括: 1. 交聯(Crosslinking):細胞被甲醛等交聯劑處理,使得蛋白質和DNA之間的相互作用被固定,形成穩(wěn)定的蛋白質-DNA復合物。 2. 細胞裂解:裂解細胞,釋放染色質,同時保持蛋白質-DNA復合物的完整性。 3. 超聲或酶解:通過超聲或酶解將染色質切割成較小的片段,以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。 4. 免疫沉淀(Immunoprecipitation):加入針對特定組蛋白修飾或轉錄因子的抗體,這些抗體會特異性地結合到目標蛋白質上。 5. 捕獲復合物:使用蛋白A或蛋白G結合的珠子捕獲抗體-蛋白質-DNA復合物。 6. 洗...
蛋白免疫沉淀(proteinimmunoprecipitation)是一種常用的實驗技術,用于分離和富集特定蛋白質或蛋白質復合物。該技術基于抗體與目標蛋白質的特異性結合,通過沉淀和洗滌步驟將目標蛋白質從復雜的混合物中分離出來。蛋白免疫沉淀廣泛應用于生物醫(yī)學研究中,可以用于研究蛋白質的相互作用、鑒定蛋白質復合物的組成、研究蛋白質的修飾狀態(tài)等。蛋白免疫沉淀的基本原理是利用抗體與目標蛋白質的特異性結合。首先,需要選擇合適的抗體,該抗體可以特異性地結合目標蛋白質。免疫沉淀技術Co-IP的原理是什么?北京RIP免疫沉淀磁珠貨期沉淀劑與抗體結合,形成復合物,然后通過離心或磁力分離的方法將復合物從混合物中分...
免疫共沉淀分析(Co-IP)與IP十分類似,基本的技術都是采用目標抗原特異性的固相化抗體;但IP的目標是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結合的蛋白質或配體。 在Co-IP實驗中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復雜的伴侶蛋白、信號分子、結構蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間。 基本的Co-IP實驗方案與IP相同,實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時,需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。 免疫沉淀技術Co...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)的實驗方法通常包括以下步驟: 1. 樣本準備 2. 蛋白質濃度測定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。 3. 抗體預處理:如果使用預固定的抗體,需先將抗體固定在固相支持物上,如瓊脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反應:將裂解液與特異性抗體(固定或未固定)混合,并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜,以允許抗體與目標蛋白質充分結合。 5. 固相支持物的回收:對于未固定的抗體,加入與抗體特異性結合的蛋白A或蛋白G結合的固相支持物。 6. 洗滌:去除未結合的蛋白質和雜質,...
Co-IP(免疫共沉淀)技術主要用于研究蛋白質之間的相互作用,其應用場景如下: 1. 蛋白質相互作用網絡的鑒定:Co-IP可用于構建蛋白質相互作用網絡,發(fā)現目標蛋白的結合伙伴。 2. 信號傳導途徑的研究:通過Co-IP技術,科學家們發(fā)現了許多關鍵的細胞信號通路,如MAPK和PI3K/Akt通路等,為深入理解這些通路的功能和調控機制提供了重要線索。 3. 藥物靶點篩選:利用Co-IP技術,研究人員可以篩選潛在的藥物靶點。 疾病機制研究:通過分析疾病相關蛋白質的相互作用,Co-IP有助于揭示疾病的分子機制。 4. 抗體藥物開發(fā):Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標...
免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學技術,它利用抗體的特異性結合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質。這種技術是研究蛋白質表達、蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白質修飾和蛋白質功能的強大工具。免疫沉淀技術Co-I...
免疫沉淀技術作為現物學研究中的重要工具,為揭示細胞內復雜的生物分子相互作用提供了關鍵的方法。該技術的重點原理是基于抗原與抗體的特異性結合。通過使用特異性的抗體,能夠從細胞裂解液或復雜的生物樣本中捕獲目標蛋白質及其與之相互作用的分子復合物。這種特異性的捕獲使得我們能夠分離和研究那些在細胞內原本難以捉摸的蛋白質相互作用。在研究蛋白質-蛋白質相互作用方面,免疫沉淀技術發(fā)揮著不可替代的作用。它可以幫助確定在特定生理或病理條件下,哪些蛋白質會形成復合物共同發(fā)揮功能。這對于理解細胞信號轉導通路、基因表達調控以及疾病的發(fā)生機制具有重要意義。此外,免疫沉淀技術還能夠用于研究蛋白質的翻譯后修飾,如磷酸化、甲基化...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)是一種用于研究蛋白質相互作用和蛋白質特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點,但也存在一些局限性。 優(yōu)點: 1. 特異性強:IP技術利用特異性抗體對目標蛋白進行捕獲,因此具有很高的特異性。 2. 富集低豐度蛋白:可以從小量樣本中富集低豐度的目標蛋白,有助于研究稀有蛋白。 3. 研究蛋白質相互作用:通過Co-IP等變體技術,可以研究蛋白質之間的相互作用。 4. 操作簡便:IP實驗步驟相對簡單,容易在實驗室中實施。 缺點: 1. 對抗體質量依賴性高:需要高質量的特異性抗體,否則可能導致假...
免疫沉淀技術在探索蛋白質的功能方面猶如一把精密的鑰匙,為我們開啟了深入理解生命奧秘的大門。蛋白質是生命活動的主要執(zhí)行者,其功能的實現往往依賴于與其他分子的相互作用。免疫沉淀技術能夠特異性地捕獲目標蛋白質及其相關復合物,從而為研究蛋白質的功能提供直接的證據。通過對免疫沉淀得到的蛋白質進行分析,可以了解蛋白質在細胞內的定位、修飾狀態(tài)以及與其他蛋白質或核酸的結合情況。例如,若要研究某一特定轉錄因子的功能,可以利用針對該轉錄因子的抗體進行免疫沉淀,然后檢測與其結合的DNA片段,從而確定其調控的靶基因。此外,免疫沉淀技術還可用于研究蛋白質在不同生理或病理條件下的變化。比較正常細胞和病變細胞中特定蛋白質的...
ChIP(染色質免疫沉淀)實驗是一種強大的技術,用于研究蛋白質與DNA之間的相互作用,尤其是在轉錄調控、DNA修復、復制以及表觀遺傳學領域。然而,像所有實驗技術一樣,ChIP實驗也有其優(yōu)點和缺點。 ChIP實驗的優(yōu)點: 1. 體內反應的反映:ChIP提供了一種在體內研究蛋白質與DNA相互作用的方法,能夠真實、完整地反映結合在DNA序列上的靶蛋白的調控信息。 2. 全基因組覆蓋:ChIP技術可以覆蓋整個基因組,提供關于蛋白質-DNA相互作用的視圖。 3. 適用于多種蛋白質:ChIP可以用來研究組蛋白修飾、轉錄因子以及其他DNA結合蛋白。 ChIP實驗的缺點: ...
RIP技術的優(yōu)勢在于: 1. 特異性:利用特異性抗體,可以精確地捕獲目標RNA結合蛋白及其相互作用的RNA。 2. 應用場景多:適用于研究RNA結合蛋白、miRNA、lncRNA等非編碼RNA與蛋白質的相互作用。 3. 技術結合:RIP后的RNA可以用于多種下游分析,如qPCR、測序等,為研究RNA的功能和調控提供了重要信息。 RIP技術的限制包括: 1. 抗體質量:需要高質量的特異性抗體,否則可能得到假陽性或假陰性結果。 2. 非特異性結合:可能存在非特異性結合問題,需要仔細的實驗設計和對照來控制。 免疫沉淀ChIP技術選瓊脂糖珠還是磁珠?杭州免疫沉淀...
免疫沉淀技術在探索蛋白質的功能方面猶如一把精密的鑰匙,為我們開啟了深入理解生命奧秘的大門。蛋白質是生命活動的主要執(zhí)行者,其功能的實現往往依賴于與其他分子的相互作用。免疫沉淀技術能夠特異性地捕獲目標蛋白質及其相關復合物,從而為研究蛋白質的功能提供直接的證據。通過對免疫沉淀得到的蛋白質進行分析,可以了解蛋白質在細胞內的定位、修飾狀態(tài)以及與其他蛋白質或核酸的結合情況。例如,若要研究某一特定轉錄因子的功能,可以利用針對該轉錄因子的抗體進行免疫沉淀,然后檢測與其結合的DNA片段,從而確定其調控的靶基因。此外,免疫沉淀技術還可用于研究蛋白質在不同生理或病理條件下的變化。比較正常細胞和病變細胞中特定蛋白質的...
免疫沉淀實驗不同于WB實驗的樣品制備,對實驗樣品制備要求更高,除了要控制所有操作盡量在冰上完成外,關鍵的是裂解液的成分,裂解液成分直接決定了樣品質量。 主要影響: 1. 蛋白的釋放:許多目的蛋白定位在細胞器,質膜,細胞核,細胞骨架中,但通常這些亞細胞結構很難被裂解液有效溶解,所以很難將這些蛋白釋放出來。 2. 蛋白相互作用:不同去垢劑對不同性質的蛋白質間相互作用影響程度不同,一些互作較弱的蛋白對盡管在比較溫和的裂解液配方中仍然會被破壞。 免疫沉淀選瓊脂糖珠還是磁珠?溫州ChIP免疫沉淀外包公司 免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿...
免疫沉淀(ChIP)實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。 3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應用驗證:選擇已經過免疫沉淀(ChIP)或相關應用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的...
免疫共沉淀分析(Co-IP)與IP十分類似,基本的技術都是采用目標抗原特異性的固相化抗體;但IP的目標是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結合的蛋白質或配體。 在Co-IP實驗中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復雜的伴侶蛋白、信號分子、結構蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間。 基本的Co-IP實驗方案與IP相同,實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時,需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。 免疫沉淀技術是什...
免疫沉淀(IP)實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。 3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強的結合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應用驗證:選擇已經過免疫沉淀(IP)或相關應用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)是一種用于研究蛋白質相互作用和純化特定蛋白質的實驗方法。 優(yōu)點: 1. 特異性強:利用特異性抗體捕獲目標蛋白,可以有效地從復雜的生物樣本中分離出感興趣的蛋白質。 2. 靈敏度高:可以檢測到低豐度的蛋白質,包括瞬態(tài)或弱相互作用的蛋白質復合物。 3. 應用范圍廣:適用于多種生物樣本,如細胞裂解物、組織提取物和生物流體。 4. 生物學洞察深入:能夠揭示蛋白質之間的相互作用網絡,有助于理解細胞內的信號傳遞和調控機制。 5. 可與其他技術聯用:如與質譜(IP-MS)聯用,可以準確鑒定蛋白質及其相互作用伙...
“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的結合蛋白,進行小規(guī)模的蛋白質親和純化的實驗。更確切地說,IP是采用固定在微珠支持物(一般是瓊脂糖樹脂)上的特定抗體,從復雜的混合物中,純化單一抗原的實驗。固定化蛋白質復合物的組裝既可以分步進行,也可以一步完成。 常見的加樣順序:抗體和樣本(如細胞裂解物)一起孵育,然后加入親和微珠,用于捕獲抗體-抗原復合物。也可以將抗體和微珠(通過抗體結合蛋白,如蛋白A、G或A/G等,直接或間接結合抗體)先進行孵育,然后再加入含有抗原的樣本。當抗原、抗體和固相支持物產生結合以后,充分洗滌微珠,再采用適當的洗脫緩沖液從支持物上洗脫抗原。 免疫沉淀技術RIP的實驗設計...