PCR的反應(yīng)條件:dNTP濃度過高會加快反應(yīng)速度,但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產(chǎn)物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產(chǎn)物擴增,低則合成產(chǎn)物量減少。TaqDNA聚合酶無校正功能,摻入錯誤率達2*E-4個核苷...
聚合酶鏈式反應(yīng)的常見問題:靶序列變異:如靶序列發(fā)生突變或缺失,影響引物與模板特異性結(jié)合,或因靶序列某 段缺失使引物與模板失去互補序列,其PCR擴增是不會成功的。假陽性:出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。引物設(shè)計不合適:選擇的...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細胞膜電流進...
在體光纖成像記錄分辨率和對比度是成像質(zhì)量的重要組成部分,分辨率指成像系統(tǒng)所能重現(xiàn)的被測物體細節(jié)的數(shù)量,對比度則是成像系統(tǒng)所產(chǎn)生的被測物體與其背景之間的灰度差別。攝像頭、鏡頭和燈光是決定分辨率和對比度的重要因素。成像系統(tǒng)所需較小像素分辨率可由下式計算:較小分辨率...
非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會存在很多的問題:疫區(qū)來源,無合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學(xué)污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導(dǎo)致采集的原血放置時間過長或操作不當(dāng)導(dǎo)致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多...
膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種...
血清的主要作用:對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被較廣用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成...
膜片鉗技術(shù)的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。上面是電阻反饋式膜片鉗放大器的電路示意圖。A1為一極高輸入阻抗、極低噪聲的場效應(yīng)管運算放大器,由于A1極高的開環(huán)增益使得兩個輸入端的電壓幾乎完全相等,使用膜片鉗全細胞記錄技...
由于光學(xué)相干斷層掃描采用了波長很短的光波作為探測手段,在體光纖成像記錄它可以達到很高的分辨率。首先將一束光波照在組織上,一小部分光被樣品表面反射,然后被收集起來。大部分的光線被樣品散射掉了,這些散射光失去了遠視的方向信息,因此無法形成圖像,只能形成耀斑。散射光...
在體光纖成像記錄成像原理熒光物質(zhì)被激發(fā)后所發(fā)射的熒光信號的強度在一定的范圍內(nèi)與熒光素的量成線性關(guān)系。熒光信號激發(fā)系統(tǒng)(激發(fā)光源、光路傳輸組件)、熒光信號收集組件、信號檢測以及放大系統(tǒng)。發(fā)射的熒光信號的波長范圍一般在可見到紅外區(qū)域的居多。因為光的波長越長對組織的...
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)的原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,而獲得目的基因或檢測基因表達。完整RNA 的提取和純化,是進行RNA 方面的研究...
在體光纖成像記錄是基于多模光纖的微弱熒光信號檢測和記錄系統(tǒng),該系統(tǒng)能夠長時間穩(wěn)定的激發(fā)熒光,并檢測熒光信號的微弱變化。用于在體記錄動物群體神經(jīng)元活動鈣信號的動態(tài)變化,在腦功能研究中具有較多的用途,其具體特點和應(yīng)用如下:1、儀器高度集成化,只需一臺儀器,配合光纖...
國內(nèi)科研人員購買胎牛血清的現(xiàn)狀:難辨真假。 原因很多,一方面是國內(nèi)血清市場這幾年是愈發(fā)的混亂了,很多商家都盯上了這塊“蛋糕”,現(xiàn)在國內(nèi)市場能見到的各種來源的血清品牌大于50種,使用者在不了解國家政策和相關(guān)知識的前提下很難去辨別和選擇安全、穩(wěn)定、合規(guī)的胎牛血清。...
industryTemplate胎牛血清中的物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。嘉興去外泌體胎牛血清廠家胎牛血清是細胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非...
在體光纖成像記錄在軟組織傳播而成像,由于無輻射、操作簡單、圖像直觀、價格便宜等優(yōu)勢在臨床上較多應(yīng)用。在小動物研究中,由于所達到組織深度的限制和成像的質(zhì)量容易受到骨或軟組織中的空氣的影響而產(chǎn)生假象。所以超聲不像其他動物成像技術(shù)那樣應(yīng)用較多,應(yīng)用主要集中在生理結(jié)構(gòu)...
聚合酶鏈式反應(yīng):Taq(水生棲熱菌)聚合酶耐熱DNA聚合酶的很好活性溫度約為75-80°C(167-176°F),盡管該酶通常使用72°C(162°F)的溫度。在該步驟中,DNA聚合酶通過從反應(yīng)混合物中添加在5’-至-3’方向上與模板互補的游離DNA鏈來合成與...
聚合酶鏈式反應(yīng)的常見問題:陰性:需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。引物:引物質(zhì)量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱,是PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散的常見原因。有些批號的引物合成質(zhì)量有問題,兩條引物一條濃度高,一條濃度低,造成低效率的不對稱擴增,對策...
很好的胎牛血清:免疫球蛋白,國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結(jié)果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出的時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。含量,...
在體光纖成像記錄藥物代謝相關(guān)研究,標記與藥物代謝有關(guān)的基因,研究不同藥物對該基因表達的影響,從而間接獲知相關(guān)藥物在體內(nèi)代謝的情況。在藥劑學(xué)研究方面,可通過把熒光素酶報告基因質(zhì)粒直接裝在載體中,觀察藥物載體的靶向臟器與體內(nèi)分布規(guī)律。在藥理學(xué)方面,可用熒光素酶基因...
industryTemplate用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程。無錫藥理學(xué)實用膜片鉗膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段,目前在科學(xué)研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中,總會遇到各種各樣的問題...
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉...
在體光纖成像記錄增大視場可以提高成像光譜儀的工作效率,大視場寬覆蓋是下一代成像光譜儀的發(fā)展趨勢。視場增大通常會導(dǎo)致遙感器質(zhì)量和體積的增加,如何在獲得大視場的同時具有小型化與輕量化的結(jié)構(gòu)是每個成像光譜儀設(shè)計者應(yīng)該權(quán)衡的問題。為了突破成像光譜儀質(zhì)量與體積對視場的限...
膜片鉗記錄的幾種形式:全細胞記錄構(gòu)型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內(nèi)細胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄...
膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接...
聚合酶鏈式反應(yīng)的步驟:標準的PCR過程分為三步:DNA變性:(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA;退火:(60℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈。延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,...
膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接...
胎牛血清作為動物細胞培養(yǎng)基中的關(guān)鍵組分之一,在動物細胞培養(yǎng)中占據(jù)重要地位。胎牛血清是在封閉的屠宰機構(gòu)對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血而獲取的牛血清制品,牛血清制品隨著取血對象的年齡變化可分為胎牛血清,新生牛血清以及(成年)牛血清,血清的成分及含量會隨年齡變化。...
膜片鉗操作實驗:膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心,它可用來作單通道或全細胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來說,膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結(jié)構(gòu),后者因用反饋電容取代了...
聚合酶鏈式反應(yīng):因為PCR擴增了目的DNA區(qū)域,所以PCR可以用于分析極少量的樣品。這對于法醫(yī)檢定法,當(dāng)時只有微量的DNA可作為證據(jù)。聚合酶鏈反應(yīng)也可用于分析古代DNA那已經(jīng)有數(shù)萬年的歷史了。這些基于聚合酶鏈反應(yīng)的技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于動物身上,例如四萬年前猛犸...
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉...