為何血清會存在批間差？如何避免此影響？因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對細(xì)胞的影響，XP建議先進行批號測試，篩選合適的批號，備好庫存（血清未開封時，在-20℃下可保...

聚合酶鏈反應(yīng)：等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng):基于單核苷酸變異的診斷或克隆技術(shù)(snv不要與 SNPs 混淆)(患者的單堿基差異)。它需要事先知道DNA序列，包括等位基因之間的差異，并使用3’端包含SNV的引物(通常包含SNV周圍的堿基對緩沖液)。在模板和引物不匹...

胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來說，選擇來源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品，胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞，新西蘭， 美國， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況，...

聚合酶鏈反應(yīng)：嵌套聚合酶鏈反應(yīng):通過減少DNA非特異性擴增的背景，提高DNA擴增的特異性。兩組引物用于兩個連續(xù)的PCR。在個反應(yīng)中，一對引物用于產(chǎn)生DNA產(chǎn)物，除了預(yù)期的靶之外，該產(chǎn)物可能仍然由非特異性擴增的DN段組成。然后用一組引物將產(chǎn)物用于第二次聚合酶鏈反...

在體光纖成像記錄直接標(biāo)記法不涉及細(xì)胞的遺傳修飾，標(biāo)價能夠在體外培養(yǎng)時主動與細(xì)胞結(jié)合，也可以將標(biāo)記直接注射到動物體內(nèi)，間接標(biāo)記法，將報告基因引入細(xì)胞，并翻譯成酶、受體、熒光或生物發(fā)光蛋白如果報告基因的表達是穩(wěn)定的，標(biāo)記的細(xì)胞可以在整個細(xì)胞的生命周期中被觀察到。由...

PCR的反應(yīng)條件：dNTP濃度過高會加快反應(yīng)速度，但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產(chǎn)物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產(chǎn)物擴增，低則合成產(chǎn)物量減少。TaqDNA聚合酶無校正功能，摻入錯誤率達2*E-4個核苷...

在體光纖成像記錄應(yīng)用：1、在體光纖成像記錄通過光學(xué)記錄特定細(xì)胞類型在自然狀態(tài)下的神經(jīng)活動；2、實時觀測動物在進行復(fù)雜行為時的神經(jīng)投射活動；3、闡明特殊的神經(jīng)環(huán)路在動物行為中的作用；4、通過直接觀測和投射相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路的動態(tài)活動模式，整機一體化，輕巧便攜，集成信...

在體光纖成像記錄的工作原理是將光源入射的光束經(jīng)由光纖送入調(diào)制器，在調(diào)制器內(nèi)與外界被測參數(shù)的相互作用， 使光的光學(xué)性質(zhì)如光的強度、波長、頻率、相位、偏振態(tài)等發(fā)生變化，成為被調(diào)制的光信號，再經(jīng)過光纖送入光電器件、經(jīng)解調(diào)器后獲得被測參數(shù)。整個過程中，光束經(jīng)由光纖導(dǎo)入...

在體光纖成像記錄的優(yōu)點及應(yīng)用：低能量、無輻射、對信號檢測靈敏度高、實時監(jiān)測標(biāo)記的生物體內(nèi)細(xì)胞活動和基因行為被較多應(yīng)用于監(jiān)控轉(zhuǎn)基因的表達、基因療于、染上的進展、壞掉的的生長和轉(zhuǎn)移、系統(tǒng)移植、毒理學(xué)、病毒染上和藥學(xué)研究中。可見光成像的主要缺點：二維平面成像、不能對...

很好的胎牛血清：微生物，包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1μm過濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法...

小動物在體光纖成像記錄具有靈敏度高、直觀、操作簡單、能同時觀測多個實驗標(biāo)本，相比 PET、SPECT 無放射損害等優(yōu)點，但也有其自身的缺陷，例如動物組織對光子吸收、空間分辨率較低等問題，因而仍需不斷地完善和改進。小動物活的物體成像按成像性質(zhì)屬于功能成像，如何能...

在體光纖成像記錄人類大量的復(fù)雜行為主要取決于上千億個神經(jīng)元組成的精確神經(jīng)環(huán)路，而神經(jīng)環(huán)路的建立依賴于神經(jīng)元之間突觸連接的形成。突觸是神經(jīng)元交流的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，只有通過突觸連接，神經(jīng)元之間以及神經(jīng)元和靶向細(xì)胞（包括肌肉，腺體分析的細(xì)胞）才能有效的傳遞信號，因此突觸連...

胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；新生牛血清：出生12-24小時新生牛靜脈;又可細(xì)分為：a.高級新生牛血清：后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；小牛血清：出生三月齡小牛動脈分離血清；血清是血漿...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發(fā)生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據(jù)需要必須做不同的選擇。模板即擴增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個原則，純度必須較高...

聚合酶鏈反應(yīng)允許快速生產(chǎn)短DN段，即使已知的引物序列不超過兩個。聚合酶鏈反應(yīng)的這種能力增強了許多方法，例如生成雜交 探針用于 Southern 或northern blot 雜交。聚合酶鏈反應(yīng)為這些技術(shù)提供了大量的純DNA，有時是單鏈的，甚至可以從非常少量的起...

聚合酶鏈反應(yīng)：在檢測病原體方面,病原體培養(yǎng)是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn) .但是對于一些苛養(yǎng)菌 生長緩慢的細(xì)菌或難以培養(yǎng)的病原體等培養(yǎng)的陽性檢出率不高.檢測時間過長 無法滿足臨床早期快速診斷以指導(dǎo)醫(yī)治的需要[3]。當(dāng)前 PCR 技術(shù)是在傳統(tǒng) PCR 技術(shù)應(yīng)用的基礎(chǔ)上進行的...

血清為何要熱滅活，有必要對所有血清都滅活嗎？如何正確的進行滅活？加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅清。實驗顯...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見問題：出現(xiàn)非特異性擴增帶：PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，...

在體監(jiān)測基因療于中的基因表達，隨著 后基因組時代的到來和人們對疾病發(fā)生的發(fā)展機制的深入了解, 在基因水平上療于壞掉的、 心血管疾病、 和分子遺傳病等惡性疾病已經(jīng)得到國內(nèi)外研究人員越來越 較多的關(guān)注。如何客觀地檢測基因療于的臨床療效判斷終點, 有效監(jiān)測轉(zhuǎn)基因在生...

聚合酶鏈反應(yīng)注意事項：在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂；為了防止非特異性擴增，必須設(shè)陰性對照；內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Acti...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解...

血清的保存應(yīng)該注意：血清中的沉淀物、絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量，可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理，顯微鏡下"小黑點"。經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會明顯增多。有些沉淀物在顯微...

細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果...

絕大多數(shù)聚合酶鏈反應(yīng)方法依賴于熱循環(huán)。熱循環(huán)將反應(yīng)物暴露于加熱和冷卻的重復(fù)循環(huán)中，以允許不同的溫度依賴性反應(yīng)——具體地說，脫氧核糖核酸融化和酶-驅(qū)動DNA復(fù)制。聚合酶鏈反應(yīng)使用兩種主要試劑-引物(引物是短的單鏈DN段，稱為寡核苷酸，是目標(biāo)DNA區(qū)域的互補序列)...

為何血清會存在批間差？如何避免此影響？因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對細(xì)胞的影響，XP建議先進行批號測試，篩選合適的批號，備好庫存（血清未開封時，在-20℃下可保...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見問題：Mg2+濃度：Mg2+離子濃度對PCR擴增效率影響很大，濃度過高可降低PCR擴增的特 異性，濃度過低則影響PCR擴增產(chǎn)量甚至使PCR擴增失敗而不出擴增條帶。反應(yīng)體積的改變：通常進行PCR擴增采用的體積為20ul、30ul、50ul。或...

對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。主要是：血清的成份可能有幾百種之多，對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認(rèn)識，這給研究工作帶來許多困難；血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清...

聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗的一部分組織分型，對移植至關(guān)重要。截至2008年，甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測試來研究這些突變，醫(yī)治方案有時可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合...

在體光纖成像記錄系統(tǒng)在成像速度和分辨率方面還存很多不足。在成像系統(tǒng)的傳輸矩陣測試階段，必須采用SLM 實現(xiàn)相位調(diào)制，而SLM 器件的響應(yīng)速度比較低，幀率只能達到幾百赫茲，一些特殊的器件可以達到20 kHz，但對于像素為100pixel×100pixel的成像區(qū)...

聚合酶鏈反應(yīng)的常見問題分析與解決方法：無擴增條帶：酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的...