膜片鉗的應(yīng)用：對(duì)藥物作用機(jī)制的研究：在通道電流記錄中，可分別于不同時(shí)間、不同部位（膜內(nèi)或膜外）施加各種濃度的藥物，研究它們對(duì)通道功能的可能影響，了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理。這是膜片鉗技術(shù)應(yīng)用較普遍的領(lǐng)域，既有對(duì)西藥藥物機(jī)制的探...

內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作用，由于傳統(tǒng)定量方法都是終點(diǎn)檢測(cè)，即PCR到達(dá)平臺(tái)期后進(jìn)行檢測(cè)，而PCR經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺(tái)期時(shí)，檢測(cè)重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果有很大差異，因此無(wú)法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：Ct...

膜片鉗操作實(shí)驗(yàn)：標(biāo)本制備根據(jù)研究目的的不同，可采用不同的細(xì)胞組織，如心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞等，現(xiàn)在幾乎可對(duì)各種細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗的研究。對(duì)所采用的細(xì)胞，必須滿足實(shí)驗(yàn)要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細(xì)胞培養(yǎng)法；另外，由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合，現(xiàn)在也運(yùn)用分子...

Real-time PCR與普通PCR的實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，所以?duì)引物的設(shè)計(jì)要求也不同。普通PCR的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹皇菫榱双@得目的基因產(chǎn)物，允許有非特異擴(kuò)增，只要目標(biāo)條帶清晰明亮，就可以通過(guò)切膠回收的方法回收目標(biāo)條帶，之后進(jìn)行后續(xù)的克隆、測(cè)序。但Real-time PCR...

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實(shí)現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有...

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法：為了測(cè)量在不同藥物對(duì)細(xì)胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中實(shí)施灌流。例如，需要檢驗(yàn)?zāi)撤N是否對(duì)某種離子通道的影響，則需要在細(xì)胞封接后記錄電流數(shù)據(jù)，然后通過(guò)在細(xì)胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對(duì)比數(shù)據(jù)判斷該對(duì)離子通道的...

膜片鉗電生理記錄技術(shù)：膜片鉗技術(shù)的基本原理：膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí)，因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位，測(cè)量單個(gè)離子通道開放產(chǎn)生的微小電流，這種...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：Ct...

膜片鉗實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞膜型：一個(gè)完整的細(xì)胞膜電學(xué)模型包含幾個(gè)基本組分：膜電容，膜電阻和膜電勢(shì)。這三個(gè)電學(xué)組分形成的原因各不相同：1、膜電容（membranecapacitance,Cm）的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層，對(duì)離子和其他水溶性物質(zhì)均不通透，遂使細(xì)胞膜成為...

Real-time PCR鏈反應(yīng)：嵌套聚合酶鏈反應(yīng):通過(guò)減少DNA非特異性擴(kuò)增的背景，提高DNA擴(kuò)增的特異性。兩組引物用于兩個(gè)連續(xù)的PCR。在個(gè)反應(yīng)中，一對(duì)引物用于產(chǎn)生DNA產(chǎn)物，除了預(yù)期的靶之外，該產(chǎn)物可能仍然由非特異性擴(kuò)增的DN段組成。然后用一組引物將產(chǎn)物...

為何血清會(huì)存在批間差？如何避免此影響？因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響，XP建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試，篩選合適的批號(hào)，備好庫(kù)存（血清未開封時(shí)，在-20℃下可保...

很好的胎牛血清：好的血清應(yīng)是透明清亮，土黃色或棕黃色，無(wú)沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性；若棕紅色，說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高，有溶血現(xiàn)象。胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說(shuō)明...

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)...

胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛，所以胎牛血清的采集工作，便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛（通常5-8個(gè)月胎齡），之后對(duì)未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血，完成的工作以后便再通過(guò)一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內(nèi)的小牛，而且...

胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)較為高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較...

熱滅活：一般是以56℃，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅清，對(duì)大多...

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？取血年齡不同：牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清指的是取自未出生，母牛剖腹得來(lái)的胎牛。國(guó)產(chǎn)胎牛血清（并無(wú)明確定義，但通常以此稱）的指的是出生4-6小時(shí)，且未進(jìn)行哺乳進(jìn)食的牛，有時(shí)還稱作國(guó)產(chǎn)新生牛。 新生牛血清指的是...

很好的胎牛血清：微生物，包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過(guò)0.1μm過(guò)濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入，又無(wú)法...

較為低血清試驗(yàn)的要求。內(nèi)有毒的檢測(cè)：內(nèi)有毒的，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細(xì)胞外膜。臨床上，內(nèi)有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動(dòng)物體內(nèi)，內(nèi)有毒的能夠?qū)е掳l(fā)熱或者誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)；細(xì)胞培養(yǎng)中，內(nèi)有毒的能夠誘導(dǎo)細(xì)胞反...

國(guó)內(nèi)科研人員購(gòu)買胎牛血清的現(xiàn)狀：難辨真假。 原因很多，一方面是國(guó)內(nèi)血清市場(chǎng)這幾年是愈發(fā)的混亂了，很多商家都盯上了這塊“蛋糕”，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)能見到的各種來(lái)源的血清品牌大于50種，使用者在不了解國(guó)家政策和相關(guān)知識(shí)的前提下很難去辨別和選擇安全、穩(wěn)定、合規(guī)的胎牛血清。...

血清的保存應(yīng)該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物明顯增多，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量，補(bǔ)體參與反...

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)？來(lái)源不同：胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同...

購(gòu)買回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),使用時(shí)需要融化,融化過(guò)程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會(huì)表現(xiàn)出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍。很多培養(yǎng)細(xì)胞的寶寶會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量...

除了對(duì)血清進(jìn)行檢測(cè)，有何更直觀的方式分辨血清質(zhì)量？目測(cè)法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進(jìn)行區(qū)分。顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進(jìn)口血清質(zhì)量較為好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質(zhì)量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當(dāng)?shù)?，由于血紅蛋...

胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)于研究細(xì)胞的科學(xué)人士來(lái)說(shuō)，血清都不會(huì)陌生，其中胎牛血清是實(shí)驗(yàn)操作的?？?。一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過(guò)一系列工藝處理獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)...

胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對(duì)于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)說(shuō)，選擇來(lái)源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品，胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞，新西蘭， 美國(guó)， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會(huì)根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況，...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染：這是PCR反應(yīng)中很主要很常見的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。還有一種容易忽視，很可能造成PCR產(chǎn)物污染的...

除了對(duì)血清進(jìn)行檢測(cè)，有何更直觀的方式分辨血清質(zhì)量？目測(cè)法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進(jìn)行區(qū)分。顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進(jìn)口血清質(zhì)量較為好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質(zhì)量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當(dāng)?shù)?，由于血紅蛋...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：Taq(水生棲熱菌)聚合酶耐熱DNA聚合酶的很好活性溫度約為75-80°C(167-176°F),盡管該酶通常使用72°C(162°F)的溫度。在該步驟中，DNA聚合酶通過(guò)從反應(yīng)混合物中添加在5’-至-3’方向上與模板互補(bǔ)的游離DNA鏈來(lái)合成與...