培養(yǎng)板對CCK8測定的影響:不同公司的培養(yǎng)板,以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實驗要一致。另外在培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā),從而能導致培養(yǎng)基的體積不一樣,增加誤差。如果有可能,**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外,注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數(shù)前,換個細胞液,再測定。這樣會有一定的影響,但是影響的是所有的,所以均一性還算比較好。CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗.江蘇cck8實驗目的 細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)...
用途: ***篩選、 細胞增殖測定、 細胞毒性測定、 **藥敏試驗等。 所需設備及儀器: 10ul,100-200ul及多通道移液器 酶標儀(帶有450nm濾光片) 96孔培養(yǎng)板 二氧化碳培養(yǎng)箱 培養(yǎng)0.5-4小時:細胞種類不同,形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話,可以繼續(xù)培養(yǎng),以確認比較好條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6小時)。 測定450nm吸光度:建議采用雙波長進行測定,檢測波長450-490nm,參比波長600-650nm。 靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好.上...
當使用標準96孔板時,貼壁細胞的**小接種量至少為1000 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2500 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。 注意事項CCK8可以檢測大腸桿菌,但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染,以免影響結果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年。當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測定孔用。在培...
CCK-8沒有具體規(guī)定反應時間的長短,以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣,所以一定要設置預實驗。預實驗中,可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后,可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況,或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長,OD值就越大,所以對于作用時間也不是越長久越好,要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內(nèi)不能有氣泡。靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好.江蘇cck8英文說明書CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候,當時用的***個盒子是Sigma的...
。一般情況下,**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,還應考慮***的吸收,可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話,將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難,一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。***篩選:在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,經(jīng)常會用到CCK-8。浙江cck8實驗步驟cck8試劑...
CCK-8沒有具體規(guī)定反應時間的長短,以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣,所以一定要設置預實驗。預實驗中,可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后,可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況,或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長,OD值就越大,所以對于作用時間也不是越長久越好,要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內(nèi)不能有氣泡。***篩選:在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,經(jīng)常會用到CCK-8。湖北cck8 ic50實驗原理:CellCountingKit-8(簡稱CCK-8)試...
酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。 · CCK8可以檢測大腸桿菌,但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染,以免影響結果。 · CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年。 · 當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,不作為測定孔用。 · 在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,還應考慮***的吸收,可在加入***的培養(yǎng)基中...
在做一些***毒性試驗時,比如做鐵死亡途徑時,我們加入一個***叫C1,這個時候就需要提前換液,其實我們試過,還是會有一些影響。所以這時我們用中性紅檢測。我們實驗室,通常會用20%的硫酸銅溶液放到細胞孵箱下層,預防******。理應說,硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子,是不會揮發(fā)的。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8,結果總是不好,我也不知道是什么原因。之前在我們實驗室有發(fā)生過這樣的事情,這種有深有淺的才是該有的結果。我想說的是在有能力選擇范圍內(nèi),盡量選擇好一點的試劑,免得浪費時間。酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾;北京cck8測細胞活性加的量 CCK-8的原理 ...
CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(37℃,5%CO2)。2、細胞處理(不同實驗處理方式不同)。3、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。CCK-8用途:***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗.上海cck8的r平方細胞增殖實驗就是對細...
注意事項1、細胞密度:MTT要檢測的只是細胞的增殖能力,所以不用保證孔內(nèi)細胞鋪板一定要均勻,只要保證孔與孔之間的細胞數(shù)量大致相同就可,也因此細胞重懸很重要。每孔加入之前,都需要吹打混勻細胞,但即便如此也很難保證每個孔的細胞數(shù)量大致一致。所以我們設置了6組實驗組,以便計算結果時可以有所取舍。2、對于MTT而言,預實驗很重要。預實驗要摸清楚兩點:a)細胞該如何稀釋;b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細胞數(shù)稀釋到某個數(shù)值才是**合適的,但我認為只要保證每個孔內(nèi)的細胞數(shù)在70%左右,且各個孔內(nèi)細胞數(shù)量大致相同就可,不需要強求一定要達到某個數(shù)值,現(xiàn)實中,這一步需要多次摸索。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基...
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。 ***率(%)= [(對照孔吸光度-實驗孔吸光度)/(對照孔吸光度-空白孔吸光度)]×100=IC50 注意事項 CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應,如果實驗處理條件中存在還原劑的影響,應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì),需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,可以忽略不計;但如果吸光度很大,則需要去除培養(yǎng)基,再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次,然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting ...