注意事項1、細(xì)胞密度：MTT要檢測的只是細(xì)胞的增殖能力，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，也因此細(xì)胞重懸很重要。每孔加入之前，都需要吹打混勻細(xì)胞，但即便如此也很難保證每個孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致。所以我們設(shè)置了6組實驗組，以便計算結(jié)果時可以有所取舍。2、對于MTT而言，預(yù)實驗很重要。預(yù)實驗要摸清楚兩點：a)細(xì)胞該如何稀釋；b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個數(shù)值才是**合適的，但我認(rèn)為只要保證每個孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右，且各個孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個數(shù)值，現(xiàn)實中，這一步需要多次摸索。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。北京cck8設(shè)計
1、種板數(shù)：這個要查文獻(xiàn)，看你所用細(xì)胞別人有無做過，把范圍大致找出。記住還要參考說明書，這個很重要。然后稀釋一系列濃度種板。首先你要觀察多長時間細(xì)胞可貼壁完全，一般貼壁生長24小時。然后還有在你的實驗時間內(nèi)，不同細(xì)胞數(shù)下孔內(nèi)生長情況。比如我擬定考察4天的時間，那么在4天內(nèi)，細(xì)胞是剛好鋪滿還是堆積生長？因為每塊板都會設(shè)置對照孔，也就是含有細(xì)胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個數(shù)值是板上的比較大數(shù)值，CCK8試驗比較好OD值在1.0附近，所以這個比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實驗經(jīng)驗是不要讓細(xì)胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了，對***能否順利進(jìn)入細(xì)胞有影響此為其一，其二生長不均勻易導(dǎo)致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大，而且OD值也很大。北京cck8設(shè)計生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。
***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項
CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測。
cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。
再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應(yīng)都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設(shè)置6個復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會省很多力氣，但是也會增大組內(nèi)誤差。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。
能力有限，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步，哈哈。 水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等。北京cck8設(shè)計
主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT；北京cck8設(shè)計
3、24小時后，吸出培養(yǎng)基，對照組和空白組每孔各加入100ul無血清培養(yǎng)基，實驗組每孔加入100ul基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的***，繼續(xù)作用12或24小時；4、***作用完畢后，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時；5、棄掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解；6、在酶聯(lián)免疫機(jī)器上測定吸光度，波長為550nm或490nm。7、細(xì)胞存活率=（實驗組吸光度值-空白組吸光度值）/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)***。北京cck8設(shè)計
上海儒安生物科技有限公司屬于醫(yī)藥健康的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。上海儒安生物科技是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，一直“以人為本，服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽(yù)，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊，具有細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體等多項業(yè)務(wù)。上海儒安生物科技順應(yīng)時代發(fā)展和市場需求，通過**技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體。