廣西熒光染料合成

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關性，此熒光染料被應用于檢測細胞內的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進行調整?！咀⒁狻浚簩τ诩毎麑嶒?，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準備細胞。細胞數(shù)目應為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞，用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細胞（洗滌細胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡稱ICG）是一種廣泛應用于醫(yī)學和生物領域的熒光染料。廣西熒光染料合成

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。廣西熒光染料合成南京星葉生物熒光染料標記蛋白。

    小動物***熒光成像技術是現(xiàn)***物醫(yī)學研究領域的一項重要技術，因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點，已廣泛應用于生命科學、醫(yī)學研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學領域得到廣泛應用，旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學面臨的各種醫(yī)學挑戰(zhàn)，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點，比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環(huán)時間長等。納米材料在生物醫(yī)學中起著關鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點，如特定的***、組織甚至細胞。光學成像主要包括生物發(fā)光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標記細胞或ＤＮＡ，其表達產物與莖火蟲素類底物反應產生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機熒光染料、熒光上轉換納米粒子、量子點等的應用。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應用，作為抗體和其他探針標記，用熒光顯微鏡，流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產率和良好的水溶性，是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標記之一。**常用的熒光素包括用于標記蛋白質（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對細胞標記和檢測優(yōu)化的特性的質量iFluor?熒光標記染料。吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應用。

3.粘壁細胞的染色（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。（4）在37℃培養(yǎng)細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細胞可以分別用經典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。 Super Flour 系列熒光探針，具有更強的熒光強度，更廣的pH應用范圍（pH 4～10）, 更好的抗淬滅性。廣西熒光染料合成

Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。廣西熒光染料合成

使用螢火蟲熒光素酶（Fluc）作為報告基因和 D-熒光素作為底物的生物發(fā)光成像（BLI）是目前應用*****的技術。將總信號強度相對于 D-熒光素注射后的時間進行繪制，以生成時間-強度曲線。除了峰值信號外，還確定注射 D-熒光素后固定時間點（5、10、15 和 20 分鐘）的信號作為峰值信號的替代。給定時間-強度曲線中的信號針對曲線中的峰值信號進行歸一化，以表示 D-熒光素注射后時間變化的模式[3]。每克體重注射 10 μL D-熒光素（腹膜內或靜脈注射）儲備液：對于 20 g 小鼠，標準 150 mg/kg 注射通常約為 200 μL。在室溫下解凍 D-熒光素（鉀鹽或鈉鹽）并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中，**終濃度為 15 mg/mL。通過吸取 5-10 mL 無菌水來預濕 0.22 μm 過濾器。廣西熒光染料合成