湖北個性化dMMR抗體檢測試劑值得推薦

    MSH2和MLH1分別與其同源錯配修復蛋白組成復合體發(fā)揮作用。MSH2分別與MSH6、MSH3組成復合體MutSα、MutSβ。MLH1則分別與PMS2、PMS1或MLH3形成復合體MutLα、MutLβ或MutLγ。MutSα或MutSβ識別了錯配堿基后，與DNA堿基結(jié)合，再與MutL結(jié)合，***ATP酶，水解錯配的堿基，同時***核酸內(nèi)切酶1，切除并修復錯配的堿基。微衛(wèi)星(microsatellite)***存在于原核及真核生物基因組中，具有較高的遺傳穩(wěn)定性，但在錯配修復基因功能發(fā)生異常時，子代細胞微衛(wèi)星的重復核苷酸數(shù)量可增多或減少，導致微衛(wèi)星的長度不再保持一致，這種現(xiàn)象稱MSI。錯配修復基因發(fā)生突變或啟動子甲基化可引起DNA錯配修復功能的降低，導致MSI。很多重要的生長調(diào)節(jié)相關(guān)基因如Ⅱ型TGF-β、IGF2R、PTEN、BAX等的編碼區(qū)或啟動子區(qū)含有微衛(wèi)星，錯配修復異常導致的MSI可引起這些基因在復制過程中發(fā)生錯義突變或移碼突變，這種復制錯誤不斷累積，**終造成liu的發(fā)生，而MSI則可作為經(jīng)此途徑發(fā)生的結(jié)直腸ai的分子標志物。人類基因組中的微衛(wèi)星位點很多，1998年MSI國際研究合作組織推薦對Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250五個位點進行檢測，根據(jù)微衛(wèi)星位點不穩(wěn)定的數(shù)量將結(jié)直腸ai分為高頻MSI(MSI-H。MLH1抗體試劑 蘇蘇械備20180519號.湖北個性化dMMR抗體檢測試劑值得推薦

    MSI屬于一種基因水平的變異現(xiàn)象，而背后的根源則是錯配修復蛋白功能缺失。故無論從蛋白水平檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2等分子，還是在基因水平檢測MSI狀態(tài)均有助于判斷該類病因?，F(xiàn)已證明二者的符合性達到。然而由于人們首先在結(jié)直腸ai中認識了微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，并且將結(jié)直腸ai被分為MSI-H（MSI高度不穩(wěn)定）型和MSS（微衛(wèi)星穩(wěn)定型）以區(qū)別其在預后與***方面的差異。早期的檢測方法為通過對Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250五個微衛(wèi)星位點的檢測，根據(jù)其存在MSI的數(shù)量將結(jié)直腸ai分為MSI-H（具有兩個和兩個以上的位點改變）、MSI-L（只有一個位點發(fā)生改變）和微衛(wèi)星穩(wěn)定型(MSS)。MSI-L型在臨床表現(xiàn)上與MSS**無明顯差別，通常被歸為MSS**。隨后當人們認識到為星星不穩(wěn)定現(xiàn)象源于錯配修復系統(tǒng)功能缺陷，并且對其機制研究透徹之后逐漸形成通過對錯配修復蛋白的檢測來確定MSI的方法，即錯配修復蛋白免疫組織化學檢測。免疫組織化學的方法具有方便、快捷、穩(wěn)定等優(yōu)點并且對Lynch綜合征的確診具有指向性，因此被***接收，目前已幾乎替代前者。上述MSI的傳統(tǒng)檢測方法不能用于對Lynch綜合征的確診，而免疫組織化學方法因直接檢測相關(guān)蛋白對Lynch綜合征具有***的指向性。湖北標準dMMR抗體檢測試劑技術(shù)指導邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學嚴格按照IS013485標準規(guī)定建立質(zhì)量體系。

    發(fā)明人還提供上述任一所述的抗msh6蛋白單克隆抗體，在msh6蛋白免疫檢測中的用途。進一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，上述技術(shù)方案依據(jù)msh6蛋白、抗原性、組成氨基酸的親疏水性以及二級結(jié)構(gòu)，選擇msh6蛋白第1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達,其dna編碼序列為seqid**,用大腸桿菌進行表達，得到免疫原。對小鼠進行免疫，經(jīng)細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗msh6蛋白單克隆抗體的單克隆細胞系abm58060-20a2-pu,以及由該細胞系所分泌的抗msh6蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達msh6蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測?；旧Y(jié)果圖(左為abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右為市售msh6)。具體實施方式實施例1重組msh6蛋白片段的制備一、抗原片段選擇依據(jù)uniprot中登錄號為p52701的蛋白質(zhì)序列進行序列和二級結(jié)構(gòu)分析，全長為1360個氨基酸長度的msh6蛋白含有muts超家族區(qū)域，其分子量約為152kda左右，依據(jù)通過在線服務(wù)器測的蛋白的二級結(jié)構(gòu)(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)參數(shù)，并通過對其抗原性指數(shù)(jamesonba,:(1):181-6.)的分析結(jié)果。

    atccnumbercrl-8287)以5:1比例混合，離心1500rpm，5min。棄上清后離心管放入37℃水浴中，在1分鐘內(nèi)緩慢加入1ml的peg1500(roche公司)，并攪動細胞。在溫水中靜置1min后，加入10ml無血清的imdm(sigma公司)，混勻，離心1000rpm，5min。棄上清后，加入10ml血清(paa公司)小心的將細胞吹打起來，并加入5ml混合10xhat(sigma公司)的胸腺細胞，混勻。再加入25ml含有％硝基纖維素(sigma公司)的半固體培養(yǎng)基充分混勻，然后均勻的倒入20個細胞培養(yǎng)皿中。將細胞培養(yǎng)皿放入到濕盒中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。三、克隆化及elisa篩選陽性雜交瘤細胞：融合后11天，克隆細胞團大小密度適中，在解剖鏡下，吸取圓、實、大的克隆團(10板×93個)打入事先準備好培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天后，細胞量大約占底面積2/3，取100μl上清進行elisa篩選。陽性克隆完全換液，加入200μl含飼養(yǎng)細胞和1％ht(sigma公司)的完全培養(yǎng)基。兩天后進行第二次elisa篩選，陽性克隆轉(zhuǎn)入事先準備好培養(yǎng)基(含飼養(yǎng)細胞和ht)的24孔板培養(yǎng)。五天后取100μl上清進行第三次elisa篩選，陽性克隆逐次轉(zhuǎn)入6孔板和細胞培養(yǎng)瓶擴大培養(yǎng)并凍存。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學針對藥物研發(fā)過程中靶點、適應(yīng)癥及PD研究中生物標志物等研究的進行方案開發(fā)設(shè)計。

    3）當樣本為MSH6或PMS2蛋白缺失的MSI-L時，可能是Lynch綜合征的罕見表型，建議進一步確診。由于所有MMR蛋白的核染容易識別，且周圍間質(zhì)組織就可作為內(nèi)對照；同時IHC檢測具有操作簡單、價格便宜和可以迅速拿到檢測結(jié)果等優(yōu)點，所以目前IHC檢測已經(jīng)替代PCR檢測成為林奇綜合征的初步篩選方法，或在PCR檢測之后找出缺失的MMR蛋白。MSI對結(jié)直腸ai化療和預后的預測意義結(jié)直腸ai的化療而言，有大量的研究表明MSI狀態(tài)對于決定結(jié)直腸ai患者是使用5-FU***還是伊立替康***很重要。一項林奇綜合征患者長期隨訪的回顧性研究，根據(jù)MSI狀態(tài)進行評價，證實5-FU輔助***可使MSI-L和MSS患者生存得到改善。然而，在MSI-H患者術(shù)后5-FU輔助***并沒有顯示出有統(tǒng)計學意義的效果，相反5年生存率低于那些*接受手術(shù)***的患者[11]。同時，MSI患者比起MSS患者對伊立替康的***更為敏感。根據(jù)上文所述，MSI的發(fā)生，與MMR基因缺失有關(guān)，因此NCCN結(jié)直腸ai小組建議計劃單獨使用5-FU進行輔助***的Ⅱ期結(jié)直腸ai患者需進行MSI檢測。結(jié)直腸ai的預后而言，一項匯集32項研究的薈萃分析表明：MSI患者生存期更長、病死率更低(不易發(fā)生liu復發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)[12]。鑒于MMR基因在結(jié)直腸ai***和預后方面的***影響。邁杰與大學，研究院所，醫(yī)院的科研人員進行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學研究及臨床應(yīng)用研究等。福建一體化dMMR抗體檢測試劑推薦咨詢

方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋，適于臨床推廣。湖北個性化dMMR抗體檢測試劑值得推薦

MSI和dMMR檢測的臨床應(yīng)用

?實體瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的選擇

?2017年5月23日，美國FDA批準了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）應(yīng)用于高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）或錯配修復缺陷（dMMR）的實體liu患者

?2017年8月1日，F(xiàn)DA批準百時美施貴寶的Opdivo（nivolumab）可應(yīng)用于***氟嘧啶，奧沙利鉑和伊立替康***后疾病進展的MSI-H或dMMR的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸liu患者

?MSI和dMMR的傳統(tǒng)臨床應(yīng)用

?用于結(jié)直腸liu和子宮內(nèi)膜liu患者林奇綜合征（HNPCC）的篩查（98%美國臨床實驗室）

?用于結(jié)直腸liu患者的預后指標，MSI-H患者預后較好（美國臨床實驗室占48%）

?作為結(jié)直腸liu患者輔助化療(5-FU和Irinotecan)的用藥指導 湖北個性化dMMR抗體檢測試劑值得推薦