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    免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)已基于客戶(hù)需求建立了完整的病理學(xué)檢測(cè)平臺(tái)，可提供一站式病理學(xué)解決方案。甘肅提供dMMR抗體檢測(cè)試劑

    可能是由于蛋白的不穩(wěn)定造成的。目前，其用途主要為：聯(lián)合檢測(cè)msh2、msh6、pms2、mlh1可用于lynchsyndrome(遺傳性非息肉性結(jié)腸ai)的篩查。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明人提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別是。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列分別是。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體特異性識(shí)別msh6蛋白。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體由保藏號(hào)為cgmcc**7492的雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系abm58060-20a2-pu，分類(lèi)命名為：小鼠雜交瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞系已于2019年04月3日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。進(jìn)一步地，所述抗msh6蛋白為小鼠igg2b亞型單克隆抗體。發(fā)明人還提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為seqid**所示核苷酸序列編碼，經(jīng)由大腸桿菌重組表達(dá)的重組蛋白。發(fā)明人還提供了一株分泌抗msh6蛋白的雜交瘤細(xì)胞系，所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系abm58060-20a2-pu，所述細(xì)胞系保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為：cgmcc**7492。廣西專(zhuān)業(yè)dMMR抗體檢測(cè)試劑值得推薦邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)病理檢測(cè)平臺(tái)配備有Roche/Leica/Dako等多種全自動(dòng)檢測(cè)儀器，有病理醫(yī)生進(jìn)行精確的判讀。

    5MSI在結(jié)直腸ai診斷及預(yù)后中的應(yīng)用MSI在林奇綜合征中篩查診斷中的應(yīng)用由于如Amsterdam標(biāo)準(zhǔn)、Bethesda標(biāo)準(zhǔn)等鑒定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)林奇綜合征診斷缺乏穩(wěn)定性和敏感性[9]，目前公認(rèn)的**準(zhǔn)確、可靠地診斷林奇綜合征的方法是MMR基因測(cè)序。又因MMR基因測(cè)序的費(fèi)用昂貴，因此在進(jìn)行基因測(cè)序前先進(jìn)行初步篩查。目前較為公認(rèn)的林奇綜合征相關(guān)的初步篩查檢測(cè)包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和免疫組化（IHC）。當(dāng)樣本確定為MSS時(shí)，患者不可能患林奇綜合征；當(dāng)樣本確定為MSI-L時(shí)，絕大部分患者不可能患林奇綜合征；當(dāng)樣本確定為MSI-H時(shí)，患者患有林奇綜合征的可能性極高，需進(jìn)一步進(jìn)行林奇綜合征的篩查診斷。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：PCR的結(jié)果判讀本文不做討論。IHC檢測(cè)注意事項(xiàng)：（1）可能會(huì)出現(xiàn)MMR蛋白在liu細(xì)胞核著色不完整或著色極微弱（并伴隨細(xì)胞質(zhì)著色）現(xiàn)象，有文獻(xiàn)指出該現(xiàn)象可能是MMR基因突變（如錯(cuò)義突變）或MMR蛋白特點(diǎn)（該現(xiàn)象常見(jiàn)于MSH6蛋白）而造成的，建議進(jìn)行PCR檢測(cè)。（2）大約有ai患者其IHC檢測(cè)MLH1蛋白表達(dá)缺失。這種缺失同遺傳性無(wú)關(guān)，是MLH1啟動(dòng)子雙等位基因的異常甲基化而造成的，為避免誤診，需加做BRAFV600E突變檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，可排除Lynch綜合征[10]。。

    使MSI檢測(cè)的靈敏性、特異性和檢測(cè)的便利度都有了明顯進(jìn)步。3．錯(cuò)配修復(fù)蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)與PCR-MSI檢測(cè)的優(yōu)缺點(diǎn)：文獻(xiàn)報(bào)道錯(cuò)配修復(fù)蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)與PCR-MSI檢測(cè)結(jié)果的符合率非常高，達(dá)％，因此采用任何一種方法作為MSI-Hliu的篩查方法均可接受。相比之下，免疫組織化學(xué)法：(1)簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快捷、穩(wěn)定，符合病理科日常工作流程，多數(shù)基層病理科均可開(kāi)展；(2)所需組織量少，活檢標(biāo)本亦可檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果與切除標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果一致；(3)可直接提示發(fā)生缺陷的錯(cuò)配修復(fù)蛋白類(lèi)型，對(duì)于后續(xù)進(jìn)行錯(cuò)配修復(fù)基因胚系突變檢測(cè)以確診Lynch綜合征有明確的指向性；(4)少數(shù)MSH6胚系突變病例的liu由于錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能冗余作用可不表現(xiàn)為MSI，但免疫組織化學(xué)可檢出蛋白表達(dá)缺失，因而可彌補(bǔ)PCR-MSI檢測(cè)方法的局限性。PCR-MSI檢測(cè)雖然相對(duì)復(fù)雜，費(fèi)用相對(duì)較高，但優(yōu)點(diǎn)是直接反映liu的MSI狀態(tài)，而且對(duì)于少數(shù)錯(cuò)義突變導(dǎo)致蛋白功能異常但并不影響蛋白的轉(zhuǎn)錄和抗原性時(shí)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)可出現(xiàn)假陽(yáng)性，而PCR-MSI檢測(cè)正好可以彌補(bǔ)。四、***檢測(cè)MSI結(jié)直腸ai的必要性及推薦檢測(cè)流程區(qū)分MSI結(jié)直腸ai的臨床意義包括以下三個(gè)方面。1．提示預(yù)后：臨床研究發(fā)現(xiàn)，在Ⅱ期結(jié)直腸ai中。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有3D HISTECH Pannoramic MIDI數(shù)字化病理掃描儀及91360遠(yuǎn)程病理系統(tǒng)。

    將培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)接到500mllb液體培養(yǎng)基混合，37℃，200rpm，培養(yǎng)至od＝，iptg()低溫過(guò)夜誘導(dǎo)。400ml大離心筒，6000rpm，離心5min收集菌體，棄上清。沉淀用20-30ml10mmtris-hcl()和終濃度為，超聲破碎菌體。12000rpm離心20分鐘，取離心上清上樣到ni-nta鎳柱(qiagen)進(jìn)行純化，之后分別用含15mm咪唑、60mm咪唑、300mm咪唑的10mmtris-hcl()(含)溶液洗脫，分別收集蛋白峰，電泳檢測(cè)，備用；所制備的重組蛋白，蛋白濃度為，純度為80％。圖1為純化后重組msh6蛋白的電泳結(jié)果圖,其中m：分子量標(biāo)記、1：：、實(shí)施例2abm58060-20a2-pu雜交瘤細(xì)胞系的建立一、免疫將實(shí)施例1中的重組蛋白用弗氏完全佐劑(sigma公司，f5881)乳化，免疫icr小鼠(購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6點(diǎn)，劑量為60μg/只。每14天加強(qiáng)免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐劑(sigma公司，f5506)乳化，劑量為30μg/只。第3次加強(qiáng)免疫后7天，msh6-1蛋白，2ug/ml，4℃包被過(guò)夜，elisa檢測(cè)小鼠血清中抗免疫原的多抗效價(jià)，效價(jià)比較高的小鼠以尾靜脈注射沖擊免疫，抗原用生理鹽水混勻，劑量為50μg/只。二、細(xì)胞融合：無(wú)菌制備免疫達(dá)標(biāo)的小鼠脾細(xì)胞懸液，與小鼠骨髓瘤細(xì)胞sp2/0。邁杰中心實(shí)驗(yàn)室設(shè)有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀及數(shù)字PCR儀！廣西專(zhuān)業(yè)dMMR抗體檢測(cè)試劑值得推薦

方法簡(jiǎn)單易行，醫(yī)保覆蓋，適于臨床推廣。甘肅提供dMMR抗體檢測(cè)試劑

    RAF***對(duì)多種**的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要影響，RAF突變以BRAF常見(jiàn)，BRAF是RAS-RAF-MAPK信號(hào)通路的重要基因，BRAF突變常見(jiàn)于V600E位點(diǎn)，其在結(jié)腸ai的突變率為。BRAF突變的ai癥患者中右半結(jié)腸ai占95%，在BRAF野生型的ai癥患者中右半結(jié)腸ai患者占48%。研究發(fā)現(xiàn)在右半結(jié)腸aiBRAF突變率為，左半結(jié)腸ai、直腸ai的突變率分別為、。BRAF突變與右半結(jié)腸ai相關(guān)，并且BRAF基因突變和位置有***的線性相關(guān)關(guān)系，隨著**位置由升結(jié)腸移至直腸，BRAF的突變率由40%降至不到。2.預(yù)測(cè)EGFR***作用NicolantonioF等人對(duì)113例Cetuximab耐藥的轉(zhuǎn)移性結(jié)腸ai患者進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)這兩種藥物耐受的患者，有30%~40%存在KRAS突變，而野生型的KRAS患者中有14%發(fā)生BRAFV600E突變。BRAF突變者對(duì)這兩種藥存在耐藥，且生存率較其它患者明顯降低。但一項(xiàng)關(guān)于CRYSTAL和OPUS試驗(yàn)的meta分析發(fā)現(xiàn)BRAF突變似乎不影響西妥昔單抗的療效，**是一個(gè)重要的預(yù)后指標(biāo)。3.預(yù)測(cè)預(yù)后無(wú)論是早期還是晚期轉(zhuǎn)移CRC，BRAF突變狀態(tài)都是較強(qiáng)的生存預(yù)測(cè)因素，與KRAS基因突變相比，BRAF基因突變常見(jiàn)于尚未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)腸ai，以Ⅱ、Ⅲ期CRC患者多見(jiàn)，BRAF突變型CRC的惡性程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和局部晚期發(fā)生率高。甘肅提供dMMR抗體檢測(cè)試劑