湖南溶瘤病毒檢測(cè)創(chuàng)新服務(wù)

    “BestofCell2017”），再次證明了溶瘤病毒良好的聯(lián)用前景。目前T-vec有8個(gè)與免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)合用藥的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行。：變廢為寶的韓國(guó)生物技術(shù)新秀SillaJen是一家韓國(guó)生物技術(shù)公司，于2014年收購(gòu)美國(guó)舊金山Jennerex并將溶瘤病毒產(chǎn)品收入其自有研發(fā)管線中。在被收購(gòu)之前，Jennerex研發(fā)的Pexa-Vec（JX594）就已分別獲得歐盟EMA和美國(guó)FDA作為***專項(xiàng)攻克肝*的孤兒藥認(rèn)定。2016年P(guān)exa-Vec（JX594）3期臨床開(kāi)始，并在2017年通過(guò)CFDA批準(zhǔn)在中國(guó)進(jìn)行3期臨床試驗(yàn)。同年SillaJen與美國(guó)國(guó)家*癥研究所和Regeneron達(dá)成合作，共同開(kāi)發(fā)Pexa-Vec（JX594）與PD1抑制劑聯(lián)合用藥。公司明星產(chǎn)品Pexa-Vec(JX-594)由牛痘病毒改造而來(lái)。該產(chǎn)品在以下三個(gè)方面發(fā)揮作用：1.選擇性*****細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制導(dǎo)致其溶解；2.通過(guò)*****管脈系統(tǒng)細(xì)胞，減少**血液供應(yīng)；3.通過(guò)***人體自身的免疫系統(tǒng)識(shí)別并殺死**細(xì)胞。具體在病毒設(shè)計(jì)方面，Pexa-vec的復(fù)制和傳播依賴于**細(xì)胞***的EGFR/Raf/Ras信號(hào)通路。以及，Pexa-vec中胸苷激酶(TK)基因被敲除，而在增殖能力強(qiáng)的*細(xì)胞中胸苷激酶高表達(dá)，在正常細(xì)胞中胸苷激酶低表達(dá)，因此Pexa-vec只能選擇性的在*細(xì)胞中復(fù)制。此外，Pexa-vec設(shè)計(jì)表達(dá)集落刺激因子。覆蓋多個(gè)主流IHC自動(dòng)染色平臺(tái)，適用范圍廣。湖南溶瘤病毒檢測(cè)創(chuàng)新服務(wù)

    溫敏性水凝膠的用量為500-1000μl，**類***培養(yǎng)液的用量為2000-3000μl；將**類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)時(shí)，溶瘤病毒的用量為；步驟b中還包括將**類***進(jìn)行第二預(yù)培養(yǎng)的步驟，然后再將第二預(yù)培養(yǎng)后的**類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)；所述第二預(yù)培養(yǎng)包括：將**類***與溫敏性水凝膠、**類***培養(yǎng)液混合，培養(yǎng)12-96h，其中，相對(duì)于300-1000個(gè)**類***中的**細(xì)胞，溫敏性水凝膠的用量為30-80μl，**類***培養(yǎng)液的用量為100-150μl；將**類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)時(shí)，溶瘤病毒的用量為；步驟c中，所述將溶瘤病毒、免疫細(xì)胞和**類***混合培養(yǎng)，包括：c1、將含有免疫細(xì)胞和**類***的細(xì)胞懸液接種在培養(yǎng)皿中，加入**類***培養(yǎng)液培養(yǎng)2-8h，得到混合培養(yǎng)液，其中所述細(xì)胞懸液中免疫細(xì)胞和**細(xì)胞的濃度為×107個(gè)/ml，免疫細(xì)胞：**類***細(xì)胞＝(2-8)：1，相對(duì)于，所述**類***培養(yǎng)液的用量為2-3ml；c2、將所述混合培養(yǎng)液與溶瘤病毒混合培養(yǎng)3-5h，所述溶瘤病毒的用量為1-100moi?？蛇x地，步驟a中，所述檢測(cè)所述***培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平，包括：a1、獲取所述***培養(yǎng)物中的溶瘤病毒，得到待測(cè)病毒；a2、將所述待測(cè)病毒與所述溶瘤病毒的宿主細(xì)胞混合培養(yǎng)12-96h。湖南溶瘤病毒檢測(cè)創(chuàng)新服務(wù)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)有多年的藥企服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，緊跟藥物研發(fā)趨勢(shì)，熟悉新藥研發(fā)動(dòng)向。

    溶瘤病毒是一種可編程的“活藥”溶瘤病毒是一種可編程的“活藥”，可以通過(guò)多種路徑來(lái)殺傷**，有效避免耐藥性。目前認(rèn)為溶瘤病毒殺傷**主要有三方面作用機(jī)制：（1）在**細(xì)胞中特異繁殖，直接裂解*細(xì)胞。一直到2000年左右，科研人員還大多以為這是病毒殺傷**的主要方式，溶瘤病毒被認(rèn)為是一種單純的病毒療法，相關(guān)工作也都集中在提高病毒裂解效率和**細(xì)胞選擇性上。（2）2000年后，科研人員才逐漸發(fā)現(xiàn)，病毒可以通過(guò)多種途徑（增加**抗原暴露、調(diào)節(jié)**微環(huán)境、增加**微環(huán)境免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、活化免疫細(xì)胞、通過(guò)攜帶的免疫調(diào)節(jié)因子刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)等）來(lái)誘導(dǎo)全身系統(tǒng)的抗**免疫反應(yīng)來(lái)殺傷**。因此，溶瘤病毒療法已經(jīng)從一種單純的**病毒療法歸類為一種新型的**免疫***藥物，基因改造思路也發(fā)生變化，比如，開(kāi)始在溶瘤病毒基因組中加入一些免疫調(diào)節(jié)因子的基因（如T-vec的GM-CSF）。（3）另外，還有報(bào)道表明，有些病毒可以通過(guò)*****相關(guān)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，阻止**血管生成，導(dǎo)致**細(xì)胞壞死而間接殺死**細(xì)胞。此外，溶瘤病毒還可以做多種改造，作為載體插入***性基因，通過(guò)多種途徑協(xié)同作用殺傷**細(xì)胞，可以有效避免目前單一靶點(diǎn)抗*藥物普遍存在的耐藥性問(wèn)題。

    該方法包括：a、將溶瘤病毒與**類***混合培養(yǎng)12-96h，得到***培養(yǎng)物，檢測(cè)所述***培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平；b、將所述溶瘤病毒與**類***混合培養(yǎng)12-96h，得到第二培養(yǎng)物，檢測(cè)所述第二培養(yǎng)物中溶瘤病毒對(duì)**細(xì)胞的殺傷率；c、將所述溶瘤病毒、免疫細(xì)胞和**類***混合培養(yǎng)2-8h，得到第三培養(yǎng)物，檢測(cè)所述第三培養(yǎng)物中的細(xì)胞因子水平并計(jì)算所述溶瘤病毒的細(xì)胞因子促表達(dá)能力，所述細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素-2和/或γ-干擾素；如果待測(cè)溶瘤病毒的復(fù)制水平、對(duì)**細(xì)胞的殺傷率和細(xì)胞因子促表達(dá)能力均高于參比溶瘤病毒，則指示所述待測(cè)溶瘤病毒的有效性高于所述參比溶瘤病毒。本公開(kāi)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的溶瘤病毒有效性檢測(cè)方法檢測(cè)得到的溶瘤病毒有效性數(shù)據(jù)與臨床研究階段得到的溶瘤病毒有效性數(shù)據(jù)存在較大差異的可能原因在于：現(xiàn)有的溶瘤病毒有效性檢測(cè)方法中采用的**細(xì)胞模型無(wú)法真實(shí)模擬患者體內(nèi)的**組織的生物學(xué)特性，導(dǎo)致現(xiàn)有的溶瘤病毒有效性檢測(cè)過(guò)程無(wú)法真實(shí)模擬溶瘤病毒在患者體內(nèi)的作用過(guò)程，例如，現(xiàn)有溶瘤病毒有效性檢測(cè)方法中采用的由**細(xì)胞經(jīng)2d培養(yǎng)得到的單層細(xì)胞系，其無(wú)法體現(xiàn)**異質(zhì)性，也無(wú)法模擬患者體內(nèi)的微環(huán)境，而且隨著常規(guī)**細(xì)胞系傳代代次的增加。邁杰擁有StarLIMS實(shí)驗(yàn)室信息化管理系統(tǒng)，中心實(shí)驗(yàn)室獲得了中國(guó)CNAS ISO 17025實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可、美國(guó)CAP認(rèn)證。

    并分別加入96孔板的每列，每個(gè)稀釋梯度的病毒8個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)37℃培養(yǎng)5～7天后觀察病變，計(jì)算病毒滴度，滴度用reed-muench兩氏法精確算出。測(cè)試結(jié)果如表1。3、檢測(cè)溶瘤病毒對(duì)**類***中**細(xì)胞的殺傷率在96孔板中接種**類***細(xì)胞懸液，以使每孔中含有400-700個(gè)**細(xì)胞，其中，每孔含40μlcosmo溫敏性水凝膠及150μl類***培養(yǎng)液；將接種后的96孔板放入培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)96小時(shí)后取出，使用(將新城疫病毒ndv溶瘤病毒作為待測(cè)溶瘤病毒，將腺病毒prostatak溶瘤病毒作為參比溶瘤病毒)分別*****類***24，48和72小時(shí)；用cck8試劑盒(cellcountingkit8)檢測(cè)細(xì)胞活力，分別在培養(yǎng)的第23、47和71小時(shí)，向每孔加入10μl的cck8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)，用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處吸光度，計(jì)算溶瘤病毒對(duì)**細(xì)胞的殺傷率(％)。測(cè)試結(jié)果如表2。4、檢測(cè)溶瘤病毒誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗**免疫作用的能力取新抽取的患者外周血，于800×g/min的離心條件下離心10min，取上層血漿滅活后離心并吸取上清，轉(zhuǎn)移至離心管中備用；向血液下層沉淀中加入生理鹽水，形成生理鹽水血樣混合液；取等體積的淋巴細(xì)胞分離液于新的離心管中，將上述生理鹽水血樣混合液緩慢加入至淋巴分離液上層。經(jīng)多平臺(tái)平行驗(yàn)證（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特異性好.四川溶瘤病毒檢測(cè)技術(shù)指導(dǎo)

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有專業(yè)的病理醫(yī)生提供相應(yīng)的閱片或遠(yuǎn)程病理閱片服務(wù)。湖南溶瘤病毒檢測(cè)創(chuàng)新服務(wù)

    并引起**組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)（標(biāo)志***機(jī)體抗**免疫）。正在進(jìn)行的OCTAVE和EVOLVE試驗(yàn)也已經(jīng)取得階段性結(jié)果。目前與Bristol-MyersSquibb合作開(kāi)展的與PD-1抑制劑-Opdivo（nivolumab）聯(lián)合用藥的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行，目前沒(méi)有具體數(shù)據(jù)公布。其他幾款在研靜脈注射給***式的溶瘤病毒產(chǎn)品介紹見(jiàn)附錄。4國(guó)際巨頭紛紛布局溶瘤病毒產(chǎn)品上世紀(jì)90年代后，隨著現(xiàn)代規(guī)范的溶瘤病毒臨床試驗(yàn)不斷增多，溶瘤病毒臨床療效和作用機(jī)制逐漸明確。尤其在安進(jìn)（Amgen）溶瘤病毒產(chǎn)品T-vec（Talimogenelaherparepvec,Imlygic）的獲批之后，全球各大制藥公司不斷通過(guò)并購(gòu)等方式引進(jìn)溶瘤病毒產(chǎn)品豐富自己的產(chǎn)品線（如Merck、JNJ等），而有潛力的溶瘤病毒原研企業(yè)也逐漸獲得資本市場(chǎng)認(rèn)可，開(kāi)始通過(guò)上市等方式融資（如OncolyticsBiotech等）。以下是四家重點(diǎn)溶瘤病毒產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的公司介紹：（Amgen）：生物藥巨頭，上市***溶瘤病毒美國(guó)Amgen公司成立于上世紀(jì)80年代，以基因克隆技術(shù)起家研發(fā)了當(dāng)時(shí)轟動(dòng)整個(gè)行業(yè)的抗貧血產(chǎn)品Epogen，也因此奠定了公司在整個(gè)血液疾病領(lǐng)域的重要地位。經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，Amgen開(kāi)始以收購(gòu)和風(fēng)投等形式不斷的開(kāi)疆辟土，在短短的十多年內(nèi)拿下了6家制藥公司。湖南溶瘤病毒檢測(cè)創(chuàng)新服務(wù)