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其中擴(kuò)增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標(biāo)準(zhǔn)品2800m,用超純水稀釋,獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。3、以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板,分別采用引物混合物1和引物混合物2進(jìn)行pcr擴(kuò)增,得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。每條引物在反應(yīng)體系的濃度均為μm。4、同實(shí)施例2步驟一中3。5、同實(shí)施例2步驟一中4。6、同實(shí)施例2步驟一中5。檢測(cè)結(jié)果見表6。結(jié)果表明,實(shí)施例1制備的試劑盒中的引物被替換后,部分基因座被抑制且引物混合物1和引物混合物2的抑制情況不同。表6注:n與其后數(shù)字表示一段堿基序列,其后數(shù)字表示序列的堿基數(shù)目;“-”表示未獲得基因型。上述結(jié)果表明,實(shí)施例1制備的試劑盒中引物具有不可替換性,本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)摸索,才獲得了試劑盒中的引物組合及引物濃度。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)圍繞生物標(biāo)志物研究、伴隨診斷開發(fā),建立了完善的核酸組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)技術(shù)平臺(tái)。黑龍江專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)推薦咨詢
目前***使用的用于蛋白質(zhì)鑒定的質(zhì)譜分析主要使用兩種類型質(zhì)譜:一種是MALDI-TOF直接對(duì)分子量進(jìn)行測(cè)量;另一種是使用ESI-MS高分辨率質(zhì)譜分析電噴霧得到的多電荷信號(hào),然后對(duì)信號(hào)進(jìn)行去卷積分析,獲得精確分子量數(shù)值。這兩種方法各有其優(yōu)點(diǎn)及適用的領(lǐng)域。百泰派克生物同時(shí)配備了這兩種質(zhì)譜分析系統(tǒng),可用于各類蛋白質(zhì)樣品分子量測(cè)定,滿足包括肽指紋圖譜分析及蛋白質(zhì)鑒定在內(nèi)的多種蛋白質(zhì)分子量分析需求。ESI電離噴霧測(cè)定分子量案例分析:1大于10KDa分子量的某蛋白藥物精確分子量測(cè)定百泰派克通過online反相色譜分離后,直接用QExactive質(zhì)譜儀對(duì)原始信號(hào)進(jìn)行采集。然后使用ProMassforXcaliburTM對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行deconvolution計(jì)算,得到樣品精確分子量。進(jìn)入質(zhì)譜之前的反相色譜分離過程中連接了紫外檢測(cè)器(如下圖所示),在實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品分離的同時(shí),還會(huì)對(duì)樣品的純度進(jìn)行評(píng)估;色譜分離的過程也降低了在精確分子量檢測(cè)過程中對(duì)樣品純度的要求。利用軟件對(duì)質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí),可以根據(jù)TIC(總離子流圖)分別對(duì)樣品中的主要成分和次要成分的分子量進(jìn)行選擇和分析。例如我們對(duì)上圖中紅框標(biāo)注的主要成分進(jìn)行分子量分析,我們只需要找到該時(shí)刻得到質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)(如下圖所示)。安徽專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)誠(chéng)信合作邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)--伴隨診斷整體解決方案提供者,檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)全涵蓋.
然后對(duì)上述原始數(shù)據(jù)進(jìn)行去卷積處理,得到該蛋白樣品中主要成分的精確分子質(zhì)量(如下圖所示)。2小于10KDa分子量的某肽段藥物精確分子量測(cè)定百泰派克生物科技通過online反相色譜分離后,直接用QExactive質(zhì)譜儀對(duì)原始信號(hào)進(jìn)行采集,然后利用經(jīng)典的計(jì)算分子量的方法對(duì)原始數(shù)據(jù)直接進(jìn)行計(jì)算,得到樣品精確分子量。進(jìn)入質(zhì)譜之前的反相色譜分離過程中連接了紫外檢測(cè)器(如下圖所示),在實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品分離的同時(shí),還會(huì)對(duì)樣品的純度進(jìn)行評(píng)估;色譜分離的過程同樣也降低了在肽段精確分子量檢測(cè)過程中對(duì)樣品純度的要求。在進(jìn)行肽段精確分子量計(jì)算的過程中,我們只需要找到肽段洗脫時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)(如下圖所示)按照經(jīng)典的計(jì)算分子質(zhì)量的方法,同時(shí)對(duì)帶有兩個(gè)以上電荷的分子進(jìn)行分子量計(jì)算,得到該肽段樣品的精確分子質(zhì)量。同時(shí)我們還會(huì)給高豐度的帶電離子質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)供您參考(如下圖所示)。MALDI與ESI的優(yōu)缺點(diǎn)比較:進(jìn)入質(zhì)譜之前的反相色譜分離過程中連接了紫外檢測(cè)器在技術(shù)報(bào)告中,百泰派克會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語版技術(shù)報(bào)告,報(bào)告包括:1.實(shí)驗(yàn)步驟(中英文)2.相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)。
反應(yīng)體系為20μl,由10μl2×mastermix(德國(guó)qiagen公司)、1μl標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液、引物混合物和無核酶水組成。該反應(yīng)體系中,各個(gè)引物的濃度見表1中第5列。反應(yīng)程序:95℃5min;95℃30s,60℃2min,72℃2min,28個(gè)循環(huán);72℃5min;4℃保存。3、純化和定量(1)取pcr擴(kuò)增產(chǎn)物,按照pcrpurificationkit的說明書步驟進(jìn)行純化,得到pcr純化產(chǎn)物。(2)將pcr純化產(chǎn)物按照qubittmdsdnahsassaykit說明書,采用,得到pcr純化產(chǎn)物的濃度。4、文庫(kù)制備取pcr純化產(chǎn)物,按照truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit的說明書操作步驟依次進(jìn)行末端修復(fù)、末端修復(fù)產(chǎn)物純化、連接a-tail、連接adapter和連接產(chǎn)物的純化,然后按照kapalibraryquantificationkit的說明書步驟進(jìn)行文庫(kù)定量及文庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)化,完成文庫(kù)制備。5、上樣測(cè)試取步驟4制備的文庫(kù),使用miseqreagentkitv3-600cycles測(cè)序試劑于miseqfgx二代測(cè)序儀上進(jìn)行測(cè)序。6、數(shù)據(jù)分析測(cè)序結(jié)束后儀器自動(dòng)生成fastq文件,使用。運(yùn)行,在notepad中錄入68個(gè)基因座基因配置文件?;蜃蚺渲梦募缦拢孩倩蜃Q,②y,③正向引物后12個(gè)堿基,④反向引物前12個(gè)堿基的反向互補(bǔ)序列,⑤該基因座**序列的兩個(gè)重復(fù)單元,⑥一個(gè)重復(fù)單元的堿基數(shù)。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)針對(duì)藥物研發(fā)過程中靶點(diǎn)、適應(yīng)癥及PD研究中生物標(biāo)志物等研究的進(jìn)行方案開發(fā)設(shè)計(jì)。
panFGFxpanel的優(yōu)勢(shì)在于:針對(duì)性強(qiáng)——panel“小而精”,集中研究FGFR及上下游信號(hào)通路關(guān)鍵基因;應(yīng)用性廣——panel小,成本低;搭配酶切建庫(kù)法、快速雜交法,縮短TAT;靈活性強(qiáng)——探針可實(shí)現(xiàn)物理上模塊區(qū)分,隨時(shí)滿足伴隨診斷產(chǎn)品開發(fā)需求。??方案3:IHC法檢測(cè)FGF-19過表達(dá)當(dāng)前針對(duì)肝*及乳腺*的FGFR4抑制劑開發(fā)速度很快,多個(gè)藥物進(jìn)入臨床II期的研究。FGFR4-FGF19信號(hào)通路在肝細(xì)胞*(HCC)的發(fā)***展過程中發(fā)揮重要的作用。有研究顯示,在骨骼肌中過表達(dá)FGF19的轉(zhuǎn)基因小鼠在其生命早期會(huì)發(fā)生多發(fā)性HCC,而其他組織則不會(huì)受到影響,初步推斷FGF19通過***FGFR4增加肝細(xì)胞增殖而誘導(dǎo)肝*(圖6)。
圖6高表達(dá)FGF19-FGFR4靶向晚期肝*[10]FGFR4高選擇性抑制劑在FGF-19過表達(dá)的HCC荷瘤小鼠病理模型上呈現(xiàn)了***的抗**藥效。FGF-19擴(kuò)增和過表達(dá)有望成為FGFR4選擇性抑制劑***HCC的重要生物標(biāo)志物。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的病理平臺(tái)已經(jīng)建立并系統(tǒng)驗(yàn)證了FGF-19IHC檢測(cè)方法,迄今已為國(guó)內(nèi)眾多創(chuàng)新藥企的臨床研究提供了檢測(cè)支持服務(wù)(圖7)。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)嚴(yán)格按照IS013485標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定建立質(zhì)量體系。福建多靶點(diǎn)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)值得推薦
邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為全球合作伙伴提供包括生物標(biāo)記物挖掘、藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證、伴隨診斷開發(fā)等一體化解決方案。黑龍江專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)推薦咨詢
h1)str分型;(h2)y-str分型;(h3)個(gè)體識(shí)別;(h4)親權(quán)鑒定;(h5)種族推斷。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述引物組合或上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系的應(yīng)用,可為(h1)-(h5)中的至少一種:(h1)str分型;(h2)y-str分型;(h3)個(gè)體識(shí)別;(h4)親權(quán)鑒定;(h5)種族推斷。上述任一所述68個(gè)基因座具體可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4組成。其中,amelogenin為性別決定基因座。dyf399s1包含三個(gè)分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含兩個(gè)分型片段。本發(fā)明提供的試劑盒可以檢測(cè)68個(gè)基因座。黑龍江專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)推薦咨詢