無錫醫(yī)學電生理膜片鉗原理及步驟

來源: 發(fā)布時間:2023-07-08

膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性(1)光能應用于懸浮細胞的紀錄,因此大部分的紀錄對象為化細胞,而對于需要貼壁生長的大多數(shù)正常細胞,現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)就無法紀錄;(2)在紀錄對象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀錄胞膜形狀平整飽滿的細胞,大部分是工具細胞如化細胞,此類細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作,而許多具有研究價值的細胞(例如元代培養(yǎng)的神經(jīng)元)胞膜較弱容易破裂,且胞體表面不規(guī)整,現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場。因此,迫切需要一種新型的全自動膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)來解決以上問題。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電壓鉗技術只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。無錫醫(yī)學電生理膜片鉗原理及步驟

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膜片鉗電生理技術:神經(jīng)元細胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細胞,從而調節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學特性的極為有用的技術被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經(jīng)科學家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過膜的流動。嘉興全自動膜片鉗成像應用膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作。

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膜片鉗技術及其應用:它是作者在\"膜片鉗技術及其應用\"領域所進行的研究工作的總結,同時也吸取了國際上的先進技術和新近的研究成果。內容包括:細胞電生理與膜片鉗技術,膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設計,單通道和全細胞電流記錄技術,數(shù)據(jù)采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術和安培測量技術,細胞內鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術,心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。

膜片鉗的應用:與藥物作用有關的心肌離子通道:心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展,使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+介導現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內就出現(xiàn)Ca2+超載,導致神經(jīng)元及細胞膜損害,膜轉運功能障礙,嚴重的可使神經(jīng)元壞死。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:信號準確,噪聲少,使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。

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膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,很適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。膜片鉗使用操作注意:拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。廣州全自動膜片鉗全細胞記錄設計公司

膜片鉗技術是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。無錫醫(yī)學電生理膜片鉗原理及步驟

全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術相似,但有所不同:首先,全細胞電壓鉗記錄只使用單根電極,但在電學效果上同時實現(xiàn)了電壓鉗制和電流記錄。其次,電壓鉗記錄的電極不細胞,對細胞造成的損傷較小,因而能用于小細胞如神經(jīng)元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質上也是電壓鉗位,它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較,然后將這個差動輸出施加到放大器前級的倒相端,通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等,無論電極電流是否為零,都能從輸出電壓得到膜電位的準確數(shù)值。無錫醫(yī)學電生理膜片鉗原理及步驟

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