紹興神經(jīng)生物學(xué)腦片膜片鉗

膜片鉗技術(shù)操作方法：開始封接:調(diào)低微操步進速度，使電極尖銳端慢慢向細胞靠近，如發(fā)現(xiàn)基線方波突然變小，封接電阻上升時，即停止電極下降，通過注射器給電極負壓，封接成功的可見方波很快變小，電阻升至G歐。此時，調(diào)節(jié)快電容補償按鈕，將快電容電流補償?shù)簦绶饨臃€(wěn)定后，準備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時，漏電流<20pA，給予比較大的負壓(也可根據(jù)情況使用ZAP電破方式破膜)，將要破時可見基線上下浮動，破后，可見基線前后有兩個較大的慢電容電流。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：操作簡單，全過程可自動化。紹興神經(jīng)生物學(xué)腦片膜片鉗

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理：1.內(nèi)面向外式膜片細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對膜外表面的作用,多用于研究細胞膜外側(cè)受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過第二信使系統(tǒng)。因細胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須充以低鈣液。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。金華細胞生物學(xué)膜片鉗實驗方案全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：藥液交換非常迅速，作用時間快。

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點：又由于玻璃微電極管徑很小，其下膜面積光約1μm2，在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少，一般只有一個或幾個通道，經(jīng)這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細胞來講很少，可以忽略，也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內(nèi)電位不變，則電極下的一小片細胞膜兩側(cè)的電位差就不變，從而實現(xiàn)電位固定另外，高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲，從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率，如時間分辨率可達10μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12A。記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎(chǔ)上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率。

在進行細胞吸附式膜片鉗記錄時，一般來說，我們通過電壓鉗（voltageclamp,VC）模式將細胞膜電位維持在-60mV（大多數(shù)脊椎動物神經(jīng)元的靜息膜電位），從而保證通過電極尖銳端的電流即為跨膜離子流。一般來說，細胞吸附式膜片鉗可以作為對照來驗證其他單通道記錄構(gòu)型下通道活動的改變情況，也可以用來檢測化學(xué)物質(zhì)引起的通道的和活動/對通道活動的影響是否經(jīng)過胞內(nèi)信使的介導(dǎo)。這里有一點需要注意，每個待研究細胞的Em都會有輕微的差異，因此我們在分析cell-attached的數(shù)據(jù)的時候，需要拿出事先記錄好的Em，一般有三種方法:用胞內(nèi)記錄或全細胞記錄的方法，獲得一個平均Em；在實驗結(jié)束時，patch破裂，在電流為0的情況下記錄到的電勢就為Em;結(jié)合離子通道的其他數(shù)據(jù)來反向推算Em。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。

膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的優(yōu)點：與傳統(tǒng)的細胞內(nèi)記錄相比，全細胞記錄也有很多好處，比如電極尖銳端開口較大，電阻只2~20MΩ，易于進行電壓/電流鉗制，噪聲很大程度下降，電極電壓降也變得很小，補償非常容易。與單通道記錄相比，單通道記錄無法獲得整個細胞的功能變化信息，而全細胞記錄（尤其是腦片或在體記錄）所獲信息則能反映細胞功能（甚至細胞之間信息傳遞）的改變，加之易于更換細胞外液，所以，全細胞記錄更適用于對離子通道的藥理學(xué)研究，即加各種通道blocker啦，激動劑啦之類的。膜片鉗使用操作注意：電腦里面的軟件不得隨意刪改。杭州醫(yī)學(xué)實用膜片鉗原理

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡。紹興神經(jīng)生物學(xué)腦片膜片鉗

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值。紹興神經(jīng)生物學(xué)腦片膜片鉗

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