胎牛血清作為動物細胞培養(yǎng)基中的關(guān)鍵組分之一,在動物細胞培養(yǎng)中占據(jù)重要地位。胎牛血清是在封閉的屠宰機構(gòu)對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血而獲取的牛血清制品,牛血清制品隨著取血對象的年齡變化可分為胎牛血清,新生牛血清以及(成年)牛血清,血清的成分及含量會隨年齡變化。而胎牛血清由于血清采集時間早,其胎球蛋白較多,并富含多種生長因子。同時,由于未接觸外界環(huán)境,胎牛血清所含的內(nèi)有毒的、補體等細胞有害成分和抗體水平均是較低的。因此,胎牛血清從細胞培養(yǎng)的效果來看是較為很好的牛血清制品,在細胞培養(yǎng)的應(yīng)用較為較廣。胎牛血清的無菌檢驗:陰性;支原體檢驗: 陰性;細菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml)。鎮(zhèn)江賽業(yè)胎牛血清哪里有賣
血清的保存應(yīng)該注意:血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點"。經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染,一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量。南京賽業(yè)胎牛血清品牌血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚。
胎牛血清用于細胞培養(yǎng)不過百年歷史,但發(fā)展得相當快,每年的需求量也不斷上升。在胎牛血清和細胞培養(yǎng)技術(shù)的方面,國外起步較早,認識也較深入。應(yīng)該說,胎牛血清在細胞培養(yǎng)基方面,具有的優(yōu)勢。因為其營養(yǎng),所以幾乎適合所有類型的細胞生長,每種細胞都可以從中攝取自己所需的養(yǎng)分。而且,胎牛血清還含有適合細胞貼壁鋪展以及抗氧化和醫(yī)治的成分,這使得它成為天然通用的很好培養(yǎng)基。據(jù)研究,胎牛血清中含有至少四百多種成分,而且這些成分的含量在不同批次的血清中存在波動,有時甚至波動較大。因此,在持續(xù)使用胎牛血清時,要注意盡量同一批次的。通常,同一批次的血清數(shù)量有限,一次大約不超過2000升。因此,在更換批次時,要注意觀察細胞的生長和狀態(tài)。
胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清:出生12-24小時新生牛靜脈;又可細分為:a.高級新生牛血清:后靜置自然析出的血清;b.標準新生牛血清:c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清:融血或微融血的血清;小牛血清:出生三月齡小牛動脈分離血清;血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展,但仍存在一些問題。胎牛血清是品質(zhì)較為高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較為少。胎牛血清是品質(zhì)高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較為少。
血清的保存應(yīng)該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。胎牛血清支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長曲線(接種濃度)大增殖濃度≥2.5×106 個/ml。深圳不含外泌體血清哪家好
胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。鎮(zhèn)江賽業(yè)胎牛血清哪里有賣
避免產(chǎn)生沉淀物:請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。若血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。鎮(zhèn)江賽業(yè)胎牛血清哪里有賣