青海凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

當(dāng)在完整狀態(tài)下進(jìn)行分析時(shí)，EPO的聚糖異質(zhì)性導(dǎo)致了非常復(fù)雜的質(zhì)譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時(shí)，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如對應(yīng)于未修飾蛋白質(zhì)的單個(gè)峰所示。EPO上殘留了少量用乙?；僖核嵝揎椀腛-聚糖，因?yàn)镺mniGLYZOR對這種結(jié)構(gòu)的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議（在37°C下進(jìn)行O/N孵育），兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理，并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面，N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上。這導(dǎo)致某些 N-糖基化位點(diǎn)難以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài)，就根本無法接近。因此，這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖結(jié)構(gòu)表征。青海凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

Genovis的PNGase F Automation 含有以自動(dòng)化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量 N-糖去除，從而簡化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干，用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動(dòng)水解。1. 實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量樣品處理；2. 可同時(shí)消解多達(dá) 96 個(gè)樣品；3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽（包括唾液酸化O-聚糖）的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2.以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。

FucosEXO中的酶在大腸桿菌中表達(dá)，帶有His標(biāo)簽，分子量為87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然條件下水解糖蛋白上的巖藻糖，在6至8的pH值范圍內(nèi)顯示出高活性，無需輔助因子或添加劑。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集：GlycOCATCH還可用于從復(fù)雜的樣品混合物（如人血清）中選擇性富集O-糖基化蛋白。簡而言之，用Genovis的SialEXO處理血清并應(yīng)用于GlycOCATCH樹脂。洗滌樹脂，用8M尿素洗脫O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化樣品并使用 RP-LC-MS/MS 進(jìn)行分析，并使用 Swiss Prot 數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)列表。O-糖基化蛋白以黃色表示。

蛋白質(zhì)的N-糖基化特征是一個(gè)關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。它會影響生物制藥的安全性和有效性，因此需要在開發(fā)和生產(chǎn)過程中進(jìn)行表征和監(jiān)測。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖，然后用熒光標(biāo)記物（如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?（沃特世公司））標(biāo)記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細(xì)管電泳分離標(biāo)記的聚糖，以表征和定量不同的聚糖結(jié)構(gòu)。 在這里，使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時(shí)，而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此，在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前，用RapiGest? SF表面活性劑（沃特世公司）和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標(biāo)記所得游離的聚糖，并通過HILIC UPLC-FLD-MS進(jìn)行分析。OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶，可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖；

對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產(chǎn)生了相似的糖肽，但預(yù)期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異，因?yàn)槊糠N肽都檢測到多種聚糖結(jié)構(gòu)。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)，這與依那西普的預(yù)期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預(yù)處理樣品均產(chǎn)生具有裸核1結(jié)構(gòu)的肽，但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預(yù)處理，然后用 ImpaRATOR 消化，得到含有 Tn 抗原的肽?？傊?，這些數(shù)據(jù)證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如，OpeRATOR在兩個(gè)O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱（數(shù)據(jù)未顯示）。水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶SialEXO 2-3，裝在500個(gè)單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。云南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶

PNGase F 以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。青海凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

在抗體藥物及核酸藥物領(lǐng)域，倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程，主要用——RNA轉(zhuǎn)染試劑、生物活性物質(zhì)純化分離用填料產(chǎn)品、ADC的payload抗體（如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等）、動(dòng)物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品、抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等，品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產(chǎn)品牌都具有國內(nèi)自研、自產(chǎn)能力，批次生產(chǎn)穩(wěn)定可靠、品質(zhì)可控，為行業(yè)發(fā)展提供更多國產(chǎn)選擇。青海凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究