微生物高通量測序平臺

來源: 發(fā)布時間:2022-08-31

細胞質檢時染料染色的原理:臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不被染色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使死細胞染成淡藍色。AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一種小分子染料,可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現紅色熒光,通過標記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細胞和死細胞,這種特異性染色的方法也可以排除無核細胞、雜質、碎片等的干擾。如果你的樣品是質?;蛘呤蔷海菫槭裁床辉囋囄覀兊腒BSeq呢?微生物高通量測序平臺

使用顯微鏡進行懸液質檢操作時應注意:1.使用血球計數板時,可以提前鏡檢觀察每小格計數室內是否潔凈無雜質。若有雜質灰層,則需要多次清洗,直至計數室潔凈無瑕;2.質檢前將懸液輕微震蕩或使用擴口gun頭吹打混勻;3.臺盼藍染色后需要盡快完成細胞計數,一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細胞數目過多,難以數清,應當對細胞懸液進行稀釋以便于計數;5.對于壓在方格界線上的細胞應當計數同側相鄰兩邊上的細胞數,一般可采取“數上線不數下線,數左線不數右線”的原則處理,另兩邊不計數。微生物高通量測序平臺在運輸前將所有樣品管集中放于大包裝中。

臺盼藍染色原理:臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不被染色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使死細胞染成淡藍色。

通過顯微鏡使用血球計數板質檢得到質檢結果:明場(細胞未染色):主要可以觀察懸液背景質量(背景干凈,無雜質碎片,無細胞團塊);臺盼藍場(細胞與臺盼藍染色后):主要可以觀察活性(主要為活細胞,未染色藍色的為活細胞);通過臺盼藍場計算活率:90%>80%;細胞濃度:710cells/μl;等結果來看,血球計數板質檢結果的展示可以看出所有指標均符合上機標準,屬于高質量單細胞懸液。

轉錄組測序,項目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測序技術的轉錄組學研究方法:首先提取生物樣品的全部轉錄的 RNA 并進行 mRNA 富集,然后反轉錄為 cDNA 后進行新一代高通量測序,在此基礎上進行短片段拼接組裝,從而獲得一個個單獨轉錄本,進而可以對該生物樣品當前狀態(tài)的基因表達狀況有全局了解。對不同階段或部位生物樣品的轉錄組進行 比較分析,則可以在轉錄層面得到基因表達水平的變化,針對關鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構建。請注意選擇無RNA酶的容器盛放樣本,盡量避免RNA降解。

對于細胞樣品,送樣量需達到 5 × 106(5乘10的6次方)數量級。富集后置于 2 ml Ep管中,用 1 ml TRIzol 重懸,注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強烈建議細胞樣品先做細胞鑒定及支原體/衣原體污染之后,再送出來。對于血液樣本,只接收未凍存過的抗凝血新鮮樣本??鼓齽┎豢墒褂酶嗡剽c,可用EDTA或ACD抗凝劑,取血后以冰袋保存,切記不能使血液凍結,從取血之時開始計算,須在48小時之內送達生工上海總部高通量測序部。如果不能提供新鮮樣本,則請?zhí)峁难褐刑崛〉目俁NA樣本。備樣要求詳見B、RNA 樣品。請?zhí)峁╇娪灸z圖,濃度>20 ng/μl,總量一般1~2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA,可冰袋運輸,不超過3天。lncRNA高通量測序項目

現在也有學者為了區(qū)分傳統(tǒng)測序和單細胞測序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱為批量測序。微生物高通量測序平臺

使用顯微鏡進行懸液質檢操作時應注意:1.使用血球計數板時,可以提前鏡檢觀察每小格計數室內是否潔凈無雜質。若有雜質灰層,則需要多次清洗,直至計數室潔凈無瑕;2.質檢前將懸液輕微震蕩或使用擴口***頭吹打混勻;3.臺盼藍染色后需要盡快完成細胞計數,一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細胞數目過多,難以數清,應當對細胞懸液進行稀釋以便于計數;5.對于壓在方格界線上的細胞應當計數同側相鄰兩邊上的細胞數,一般可采取“數上線不數下線,數左線不數右線”的原則處理,另兩邊不計數。微生物高通量測序平臺

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