目前技術的進一步成熟,未來二代測序病原體檢測應進一步在成本下降、診斷標準完善、質量控制提升等方面進行完善。同時應進一步增加大樣本量的研究,以建立中國傳染病原體宏基因組學檢測的標準規(guī)范。對于懷疑神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染的患者,如有條件,推薦在抽取腦脊液時同步留取2mL腦脊液標本保存于-16~20℃冰箱。在完成常規(guī)生物化學檢查和培養(yǎng)之后,若3d內未獲得明確的病原學依據(jù)且經(jīng)驗性抗傳染無效,推薦對留存的腦脊液標本進行二代測序檢測。若未留存標本,可重新采集標本(A,Ⅱ)??茖W家通過對病毒進行全基因組測序,能了解病毒不同傳播階段的變異情況。鄭州水體微生物多樣性分析服務
宏基因組是指特定環(huán)境中全部微生物遺傳物質的總和,宏基因組測序以特定環(huán)境中的整個微生物群落作為研究的對象,不需對微生物進行分離培養(yǎng),而是提取環(huán)境微生物總DNA進行研究。其擺脫了傳統(tǒng)研究中微生物分離培養(yǎng)的技術限制,在基因組水平解讀微生物群體的多樣性和豐度,探索微生物與環(huán)境及宿主之間的關系。目前,第二代高通量測序技術在宏基因組的研究上已被普遍應用。第二代高通量測序平臺具有通量高、準確性高、速度快、信息全等特點,加快了宏基因組測序在鑒定低豐度的微生物群落,挖掘更多基因資源方面的應用。腸道微生物多樣性測序分析找哪家病毒宏基因組測序可直接對樣本中的核酸進行高通量測序。
宏病毒組學是宏基因組學的一個分支,但與傳統(tǒng)的宏基因組學概念不同,它是在宏基因組學概念的基礎上,結合病毒自身的特點,將宏基因組學方法應用到病毒學領域而形成的。2002年,Breitbart等(BreitbartM,etal,2002)將宏基因組學方法應用于海洋病毒群落的研究,發(fā)現(xiàn)噬菌體為海水中主要病毒組,這一研究標志著宏病毒組學正式應用于科學研究。簡而言之,宏病毒組學就是應用特殊方法把特定環(huán)境中所有病毒與其他微生物分開,然后提取的病毒核酸,用高通量技術進行病毒核酸測序,依托現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫進行相應的比對工作,并運用軟件分析處理后得到研究樣品中病毒群落的組成信息。
宏基因組學或元基因組(metagenomics),其定義為“Thecollectivegenomesofsoilmicroflora”。該學科可追溯到第1次提出環(huán)境基因組學的概念,在對太平洋浮游生物進行系統(tǒng)分類時構建了第1個噬菌體文庫,并發(fā)現(xiàn)了15種全新的細菌序列。宏基因組學概念是“土壤中所有微生物基因組的總和”命名為土壤宏基因組,系統(tǒng)給出了宏基因組的概念,提出針對特定環(huán)境樣品中遺傳物質總和進行非培養(yǎng)研究。對宏基因組進一步概括為“應用現(xiàn)代的分子生物學技術直接從環(huán)境中獲取的目的微生物群落基因組,叫宏基因組”。宏基因組測序技術,克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術限制。
宏基因組測序的挑戰(zhàn):背景干擾,病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內,臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復雜樣本,大量宿主信號掩蓋了微量病原信號,致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因為RNA病毒需先轉化為互補DNA(cDNA)再進行測序,因此病原宏基因組測序技術對RNA病原體檢出率比DNA病毒更低。可以考慮對核酸樣本進行特殊的處理,對病毒序列進行特異性富集,再進行建庫測序。質量控制:病原宏基因組測序技術涉及一系列繁瑣的實驗操作過程,例如文庫構建涉及到基因組打斷,測序接頭鏈接,全基因組擴增等多個步驟,每一步驟的目標是要每個分子都以相同的效率執(zhí)行每個步驟,打斷有損失,連接有差別,擴增有偏好,都會帶來檢測誤差。隨著數(shù)據(jù)庫日趨完善,對樣本進行宏病毒組測序以后,我們將獲得越來越豐富的信。鄭州水體微生物多樣性分析服務
對樣本進行宏病毒組測序于臨床,能輔助臨床醫(yī)生進行微生物侵染類疾病診斷并在一定程度提供用藥指導。鄭州水體微生物多樣性分析服務
病毒宏基因組測序可直接對樣本中的核酸進行高通量測序,鑒定樣本中可能存在的病原菌,輔助臨床決策。覆蓋細菌、病毒、寄生蟲、衣原體、立克次氏體、螺旋體等13396種微生物;同時進行耐藥基因檢測,涵蓋266種耐藥菌,2984種抗性基因。宏基因組測序在新發(fā)腹瀉病毒鑒定中的應用:發(fā)現(xiàn)和鑒定新病毒以及確定新病毒與疾病的關系是預防、診斷和新發(fā)病毒性傳染病的首要任務。高通量測序技術突破了傳統(tǒng)技術方法的局限,可以直接以標本中所有的遺傳物質為研究對象,從而能夠快速地鑒定出標本中存在的病毒,形成了一門研究特定環(huán)境中病毒群落的新興學科:病毒宏基因組學(宏病毒組)。鄭州水體微生物多樣性分析服務
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