腸道微生物多樣性測序上哪找

來源: 發(fā)布時間:2021-10-19

病毒宏基因組測序可直接對樣本中的核酸進(jìn)行高通量測序,鑒定樣本中可能存在的病原菌,輔助臨床決策。覆蓋細(xì)菌、病毒、寄生蟲、衣原體、立克次氏體、螺旋體等13396種微生物;同時進(jìn)行耐藥基因檢測,涵蓋266種耐藥菌,2984種抗性基因。宏基因組測序在新發(fā)腹瀉病毒鑒定中的應(yīng)用:發(fā)現(xiàn)和鑒定新病毒以及確定新病毒與疾病的關(guān)系是預(yù)防、診斷和新發(fā)病毒性傳染病的首要任務(wù)。高通量測序技術(shù)突破了傳統(tǒng)技術(shù)方法的局限,可以直接以標(biāo)本中所有的遺傳物質(zhì)為研究對象,從而能夠快速地鑒定出標(biāo)本中存在的病毒,形成了一門研究特定環(huán)境中病毒群落的新興學(xué)科:病毒宏基因組學(xué)(宏病毒組)。病毒宏基因組測序,樣本都會伴隨基因組數(shù)倍于病毒的細(xì)菌和宿主細(xì)胞。腸道微生物多樣性測序上哪找

病毒宏基因組學(xué)的研究過程包括以下幾個步驟:樣品的處理、病毒宏基因組學(xué)文庫構(gòu)建和數(shù)據(jù)分析與處理。樣品的制備較關(guān)鍵的是樣品的處理、遺傳物質(zhì)的分離和富集。樣品的制備關(guān)鍵應(yīng)做到提取能夠表示該環(huán)境的高純度樣本,并除去非病毒核酸細(xì)胞和遺傳物質(zhì)的干擾。富集微生物及去除非目的性的細(xì)胞和遺傳物質(zhì)是分離高質(zhì)量的遺傳物質(zhì)的前提,提取高純度的表示特定環(huán)境中的遺傳物質(zhì)是宏基因組學(xué)研究過程中的難題。正切流過濾系統(tǒng)、差異過濾、梯度離心、空心纖維過濾、DNA酶和RNA酶處理、序列非依賴的單引物擴(kuò)增(Sequence-independentsingleprimeramplification,SISPA)等技術(shù)可用于樣品的制備,而SYBR金染色法可用于實(shí)時監(jiān)測處理樣品中病毒顆粒的數(shù)量。武漢水體微生物測序檢測通過對樣本進(jìn)行宏病毒組測序,我們可以了解單個樣本里有什么病毒。

宏基因組測序技術(shù)注意事項(xiàng):傳統(tǒng)微生物檢測由于時間長、陽性率低、檢測目標(biāo)單一,限制了傳染疾病的診治。宏基因組測序技術(shù)不依賴于微生物的分離培養(yǎng),克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制,為研究和開發(fā)利用占微生物種類99%以上的未可培養(yǎng)的微生物提供了一種新的途徑和良好的策略。宏基因組測序以無需純化培養(yǎng)、能夠快速全方面的展示序列信息的優(yōu)勢,逐步在臨床上得到了普遍應(yīng)用。病原宏基因組測序檢測出病原體并報告相應(yīng)被檢測出的序列數(shù),再依據(jù)大數(shù)據(jù)庫判定是否為致病病原體。然而不同的測序平臺采用不同的數(shù)據(jù)庫,再由不同的研發(fā)、臨床和檢驗(yàn)**解讀,缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果也會出現(xiàn)差異。因此仍需將病原宏基因組測序檢測數(shù)據(jù)和臨床更好的結(jié)合,從而更準(zhǔn)確鑒定致病病原體。

宏基因組測序的挑戰(zhàn):背景干擾,病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi),臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復(fù)雜樣本,大量宿主信號掩蓋了微量病原信號,致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因?yàn)镽NA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測序,因此病原宏基因組測序技術(shù)對RNA病原體檢出率比DNA病毒更低??梢钥紤]對核酸樣本進(jìn)行特殊的處理,對病毒序列進(jìn)行特異性富集,再進(jìn)行建庫測序。質(zhì)量控制:病原宏基因組測序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作過程,例如文庫構(gòu)建涉及到基因組打斷,測序接頭鏈接,全基因組擴(kuò)增等多個步驟,每一步驟的目標(biāo)是要每個分子都以相同的效率執(zhí)行每個步驟,打斷有損失,連接有差別,擴(kuò)增有偏好,都會帶來檢測誤差。通過對樣本進(jìn)行宏病毒組測序,我們可以了解單個樣本里百度的相對含量是多少,優(yōu)勢物種是什么。

目前技術(shù)的進(jìn)一步成熟,未來二代測序病原體檢測應(yīng)進(jìn)一步在成本下降、診斷標(biāo)準(zhǔn)完善、質(zhì)量控制提升等方面進(jìn)行完善。同時應(yīng)進(jìn)一步增加大樣本量的研究,以建立中國傳染病原體宏基因組學(xué)檢測的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。對于懷疑神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染的患者,如有條件,推薦在抽取腦脊液時同步留取2mL腦脊液標(biāo)本保存于-16~20℃冰箱。在完成常規(guī)生物化學(xué)檢查和培養(yǎng)之后,若3d內(nèi)未獲得明確的病原學(xué)依據(jù)且經(jīng)驗(yàn)性抗傳染無效,推薦對留存的腦脊液標(biāo)本進(jìn)行二代測序檢測。若未留存標(biāo)本,可重新采集標(biāo)本(A,Ⅱ)。所謂宏基因組學(xué)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對象。武漢水體微生物測序檢測

科學(xué)家通過對病毒進(jìn)行全基因組測序,能了解病毒不同傳播階段的變異情況。腸道微生物多樣性測序上哪找

病毒宏基因組測序相關(guān)知識:在未知傳染病的病原體檢測方面,傳統(tǒng)的體液培養(yǎng)等檢測方式整體效率、陽性率低下,PCR檢測也局限于已知的病原微生物基因序列,能夠準(zhǔn)確分析病原體并能夠高通量測序的mNGS具有強(qiáng)大的優(yōu)勢。mNGS的這兩大優(yōu)勢也令其在這次的病毒檢測中發(fā)揮出色。宏基因組測序在一年多的時間里也受到了資本市場的普遍關(guān)注,病情發(fā)生之后,全球宏基因組測序市場又有多家公司在本季度獲得投資。全自動設(shè)備處理標(biāo)本,該設(shè)備可以從血漿中分離微生物無細(xì)胞核酸(mcfDNA),使用特有工藝去除不必要的人類DNA,然后對樣本進(jìn)行測序,并使用機(jī)器學(xué)習(xí)等手段對數(shù)十種實(shí)時數(shù)百萬個數(shù)據(jù)點(diǎn)來識別匹配項(xiàng)。這種核酸是病原微生物在血液中留下的「痕跡」,通過對這些痕跡進(jìn)行測序,便可以分析出傳染的病原情況。該技術(shù)可以識別和量化1250種臨床相關(guān)的病原菌,包括細(xì)菌、寄生蟲等。腸道微生物多樣性測序上哪找

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