北京咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司

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通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。

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細(xì)胞增殖分析是細(xì)胞生長(zhǎng)和分化研究的關(guān)鍵，在藥物開發(fā)階段常用來評(píng)估化學(xué)藥物的毒性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的控制作用。通常根據(jù)平均DNA含量或細(xì)胞代謝參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)，此類分析可以報(bào)告出總細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞數(shù)目，或者測(cè)定出單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的DNA合成情況。細(xì)胞增殖染料稀釋分析主要基于細(xì)胞膜通透性，熒光團(tuán)分子、染料進(jìn)入細(xì)胞后，將會(huì)共價(jià)結(jié)合到蛋白質(zhì)上的氨基基團(tuán)上，從而使染料能夠長(zhǎng)時(shí)間停留在細(xì)胞中。經(jīng)過之后的細(xì)胞分裂階段，各個(gè)子代細(xì)胞會(huì)從母細(xì)胞中接收到大約一半的熒光染料。采用流式細(xì)胞儀對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析，即可測(cè)定出自標(biāo)記結(jié)合起，單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群所經(jīng)歷的傳代數(shù)目。北京咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司

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