PCR熒光探針法

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）的作用下，由一對特異性引物經熱變性-退火-延伸反應，三個不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴增到多量的一種體外DNA擴增技術。在反應體系內，以一對人工合成的寡核苷酸作為擴增引物，第一步，模板DNA變性，以構成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經過80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經PCR擴增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補配對。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應原料半保留復制合成一條新的模板DNA鏈。這三個步驟為一個循環(huán)，2-4分鐘即可完成一個循環(huán)，2-3小時就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復制到幾百萬倍，從而實現對靶DNA的放大。由于擴增堿基序列按照靶DNA復制，因此PCR反應具有高度特異性。巧亦捷核酸一體機靈敏度高，可以做到早期診斷，實現及時診療，減少患病動物痛苦，獲得更好的療效。PCR熒光探針法

市面上現有PCR儀器都有以下幾個弊端：1.由于PCR靈敏度極高，實際應用中污染較嚴重，一旦有少量外源性污染就可出現假陽性結果。2.條件控制不當會造成各種產物突變，從而降低特異性和靈敏度。3.PCR技術需要以已知DNA模板作為擴充模板，必須知道引物的結合部位序列才能合成特異性引物，局限性較大。巧亦捷核酸一體機采用薄膜微流控技術，檢測過程為全封閉且自動進行核酸提取及PCR擴增，無需高標準的檢測環(huán)境，可很大程度上降低污染。結果快速、準確且穩(wěn)定。PCR熒光探針法巧亦捷核酸檢測一體機可以為寵物PCR檢測提供嚴謹的準確結果，為檢測人員提供信心保證。

現如今，大多數寵物醫(yī)院還是使用膠體金方法對寵物疾病病原體進行檢測，而此種檢測方法準確性低，靈敏度不高，通常出現檢測結果不準確而導致寵物誤診。如果是誤診，寵物則無法得到很好的診療，甚至會死亡。巧亦捷在寵物病原體核酸檢測試劑系列中應用了PCR-熒光探針法，在PCR反應體系中加入特異的熒光探針，在實驗條件下對寵物病原體特異性基因片段進行擴增，根據熒光強度的變化進行檢測，并針對各種樣品進行了反應體系的優(yōu)化，靈敏度可達1000個拷貝，具防污染功能，特別適合在寵物醫(yī)院使用。本產品操作簡便，簡單培訓即可掌握操作方法。

目前市面上有很多PCR儀器，一時間讓獸醫(yī)師無從選擇，但大多數都是PCR擴增儀，即需要人工進行核酸提取和純化。他們都有以下痛點：1、核酸提取和純化的操作麻煩并且需要專業(yè)的技術人員和場地，有些還需要配置高速離心機，人工核酸提取需要30~40分鐘并容易導致污染。2、人工反復開蓋加入或倒出試劑，容易導致人為和氣溶膠污染，導致結果不準確。因此針對寵物醫(yī)院來說，需要一臺集核酸提取、純化和擴增為一體的全自動核酸檢測儀。能更好的控制人工成本及試劑成本。傳染病是由某些具有致病性的微生物，如細菌、病毒等引起的，能夠在某種動物或多種動物之間傳播的一些疾病。

巧亦捷核酸一體機采用的探針法熒光PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標記），該探針根據需要擴增的靶序列設計因此只能與待檢測序列結合，與染料法相比提高了實驗的特異性。目前市場上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應用寬泛。TaqMan探針的結構：長度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標記有一個熒光基團，5’的熒光基團稱為報告基團（Report），3’的熒光基團稱為淬滅基團（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結構完整的情況下用特定的波長激發(fā)報告基團，由于報告基團與淬滅基團的空間位置很近，因此報告基團能夠通過FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉移到淬滅基團，使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量，而報告基團并不發(fā)射特定波長的熒光信號。PCR在常見傳染病、**、遺傳病、寄生蟲病、優(yōu)生優(yōu)育、法醫(yī)學等領域中有相當高的實際應用價值。蘇州熒光PCR儀器

巧亦捷希望能更好的去為每一只動物提供專業(yè)的檢測服務。PCR熒光探針法

美國批發(fā)產業(yè)與中國有所不同，和美國相比，中國的產業(yè)仍處于初創(chuàng)期。在經濟新常態(tài)下，中國大批發(fā)產業(yè)憑借獨特資源和市場優(yōu)勢，一舉成為資本角逐的重點領域之一。有關機構預測，中國批發(fā)產業(yè)規(guī)模未來5年年均復合增長率約為27.26%。國外的谷歌、蘋果等公司，國內的阿里巴巴、騰訊、萬科、保利、平安人壽、萬達等企業(yè)都根據自身優(yōu)勢扎根大健康領域。拋開生產型的公共服務屬性，在市場環(huán)境中，企業(yè)競爭的秘訣是要創(chuàng)造稀缺，結合消費者高、中、低不同等級的需求，并成為難以替代的產品。醫(yī)藥健康上下游未整體規(guī)劃，醫(yī)用物流公司十分分散，許多下游需求店鋪及用戶因物流體系不完善而放棄該種醫(yī)藥的引入和使用。由于醫(yī)用藥保存條件要求十分高，存儲倉庫與冷藏運輸車等的建設與運行成本便居高不下，使得醫(yī)藥冷鏈物流從建設到運營中的成本都遠超于傳統物流成本。首先，完善促進薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發(fā)光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢發(fā)展的相關政策，優(yōu)化產業(yè)發(fā)展環(huán)境。第二，加大對大健康前沿領域支持，技術帶領健康科技發(fā)展。第三，消滅體制機制障礙，催生更多薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發(fā)光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢發(fā)展模式。第四，大力發(fā)展與薄膜微流控核酸檢測一體機，動物核酸診斷試劑，薄化學發(fā)光免疫分析一體機，貓呼吸道5聯檢相適應的高等教育事業(yè)。PCR熒光探針法

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