Recombinant Cynomolgus FGL1 Protein

酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F（PNGaseF）是一種酰胺水解酶，具有以下特點(diǎn)：1.**高效性**：PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法。它能夠在幾分鐘內(nèi)快速且無(wú)偏倚地釋放所有的N-糖鏈，適合后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析。2.**重組酶**：該酶是重組的酰胺酶，能夠從高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖中切割內(nèi)GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接。3.**純度**：純度達(dá)到95%以上，通過(guò)SDS-PAGE和完整ESI-MS進(jìn)行確定。4.**儲(chǔ)存穩(wěn)定性**：在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中，好的活性和穩(wěn)定性可維持長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月。5.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對(duì)于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。6.**比活性**：具有高達(dá)100000U/mL的比活性。7.**His標(biāo)簽**：產(chǎn)品帶有His標(biāo)簽，常用于抗體及其相關(guān)蛋白的完全去糖基化。8.儲(chǔ)存條件：-25~-15℃保存，有效期1年。9.**無(wú)甘油版本**：還提供了無(wú)甘油版本的PNGaseF，這有助于在HPLC和質(zhì)譜分析中獲得結(jié)果。10.**酶活定義**：1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量。這些特點(diǎn)使得酵母重組表達(dá)的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的重要工具。Multiplex Probe qPCR Mix 已預(yù)混了低濃度ROX參比染料，適用于需要低濃度ROX校正的熒光定量PCR儀 。Recombinant Cynomolgus FGL1 Protein,hFc Tag

使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割后，可以采用以下方法來(lái)提高產(chǎn)品的純度：1.**親和層析**：利用GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽等進(jìn)行一步或多步親和層析，以高純度分離目的蛋白。2.**離子交換層析**：根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性，使用陽(yáng)離子或陰離子交換層析進(jìn)一步純化蛋白質(zhì)。3.**凝膠滲透層析**：通過(guò)分子大小的排阻，去除分子量較大或較小的雜質(zhì)。4.**反向?qū)游?*：使用反相高效液相色譜（HPLC）技術(shù)，根據(jù)蛋白質(zhì)與固定相的疏水相互作用進(jìn)行分離。5.**超濾/透析**：使用超濾膜或透析袋去除低分子量的雜質(zhì)，如鹽分、緩沖液成分或小分子蛋白質(zhì)。6.**二次親和層析**：在初次親和層析后，可以進(jìn)行二次親和層析以進(jìn)一步提高純度。7.**蛋白質(zhì)純化柱**：使用商業(yè)化的蛋白質(zhì)純化柱，如GST-Sepharose或Ni-NTA柱，進(jìn)行快速純化。8.**等電聚焦電泳**：通過(guò)等電聚焦電泳（IEF）分離具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)。9.**SDS-PAGE**：使用SDS-PAGE凝膠電泳分析蛋白質(zhì)的純度，并可通過(guò)凝膠切片回收相對(duì)純凈的蛋白質(zhì)條帶。10.**質(zhì)譜分析**：利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)的確切質(zhì)量和序列來(lái)確保蛋白質(zhì)的純度和正確性。Recombinant Human TNFRSF19 Protein,His Tag蛋白在表達(dá)過(guò)程中形成包涵體，需要通過(guò)復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊。

熒光光譜分析是一種強(qiáng)大的技術(shù)，可以用來(lái)優(yōu)化重組EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）的熒光特性。以下是通過(guò)熒光光譜分析來(lái)優(yōu)化EGFP熒光特性的步驟：1.**確定激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)**：-使用熒光光譜儀測(cè)量EGFP的激發(fā)和發(fā)射光譜，以確定其比較大激發(fā)波長(zhǎng)和比較大發(fā)射波長(zhǎng)。-這些波長(zhǎng)是EGFP熒光特性的關(guān)鍵參數(shù)，可以用于后續(xù)的成像和檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。2.**優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射濾光片**：-根據(jù)EGFP的激發(fā)和發(fā)射光譜，選擇合適的濾光片以比較大化熒光信號(hào)并減少背景噪聲。3.**評(píng)估熒光量子產(chǎn)率**：-熒光量子產(chǎn)率是衡量熒光效率的一個(gè)重要參數(shù)，它表示激發(fā)態(tài)分子產(chǎn)生熒光的概率。-通過(guò)比較EGFP與其他標(biāo)準(zhǔn)熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，可以評(píng)估其量子產(chǎn)率。4.**熒光緩沖液的優(yōu)化**：-某些緩沖液成分可能會(huì)影響EGFP的熒光特性，如pH值、離子強(qiáng)度和抗氧化劑的存在。-通過(guò)改變緩沖液條件，可以優(yōu)化EGFP的熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性。5.**溫度和氧濃度的影響**：-溫度和氧濃度會(huì)影響EGFP的熒光特性，包括熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性。-在熒光光譜分析中，可以通過(guò)改變溫度和氧濃度來(lái)評(píng)估這些因素對(duì)EGFP熒光特性的影響。

PreScissionProtease（PSP）是一種在蛋白質(zhì)純化和分析中使用的酶，具有以下特點(diǎn)：1.**特異性識(shí)別**：PSP能在低溫（4°C）下特異性識(shí)別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly之間進(jìn)行酶切。2.**應(yīng)用**：PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標(biāo)簽，有助于純化目的蛋白。3.**純度高**：PSP的純度達(dá)到95%以上，確保了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。4.**穩(wěn)定性好**：PSP在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中，-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存，有效期2年；小量分裝-20℃保存，有效期6個(gè)月。5.**酶活定義**：在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí)，能夠切割100μg的GST標(biāo)簽蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。6.**兼容性強(qiáng)**：PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40，10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項(xiàng)**：某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會(huì)抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優(yōu)化酶切效率**：建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索實(shí)驗(yàn)濃度，實(shí)際操作中，建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。Recombinant Biotinylated Human MAGE-A3 (HLA-A*24:02) Protein, His-Avi Tag 是一種通過(guò)重組DNA技術(shù)。

IdeSProtease的分子改造技術(shù)主要通過(guò)以下幾個(gè)方面提高其穩(wěn)定性和比活性：1.**定向進(jìn)化**：利用定向進(jìn)化方法，通過(guò)多輪的突變和篩選，獲得具有改善特性的酶變體。定向進(jìn)化不依賴于大規(guī)模突變文庫(kù)的構(gòu)建，而是通過(guò)定點(diǎn)突變操作，顯著提高酶分子的穩(wěn)定性。2.**半理性設(shè)計(jì)與理性設(shè)計(jì)**：結(jié)合半理性設(shè)計(jì)和理性設(shè)計(jì)的方法，通過(guò)計(jì)算模擬和結(jié)構(gòu)分析，對(duì)酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，以提高其在各種環(huán)境條件下的穩(wěn)定性。3.**糖基化修飾**：作為一種新的酶分子穩(wěn)定性改造技術(shù)，糖基化可以提高酶的穩(wěn)定性，防止酶在逆境中的失活，從而提高其在實(shí)際應(yīng)用中的催化活性。4.**消除蛋白質(zhì)中的不穩(wěn)定性弱點(diǎn)**：通過(guò)分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的穩(wěn)定性弱點(diǎn)，進(jìn)行定點(diǎn)突變，以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的整體穩(wěn)定性。5.**提高比活性**：通過(guò)分子改造，提高IdeSProtease的比活性，使其在更低的濃度下就能有效地催化反應(yīng)，從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**：改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外，還對(duì)小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。

泛素連接酶E3識(shí)別特定的靶蛋白，并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上，形成泛素化標(biāo)記。Recombinant Cynomolgus FGL1 Protein,hFc Tag

通過(guò)SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）和Westernblot（西方印跡）可以有效地檢測(cè)帶有His標(biāo)簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進(jìn)行這些檢測(cè)的步驟：###SDS-PAGE步驟：1.**樣品準(zhǔn)備**：-將重組泛素蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，通常含有還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質(zhì)。2.**凝膠準(zhǔn)備**：-根據(jù)需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度（例如，12%或15%凝膠用于檢測(cè)20-100kDa的蛋白質(zhì)）。3.**上樣**：-將變性后的樣品加入到凝膠的相應(yīng)孔中，同時(shí)加入分子量標(biāo)記物作為參照。4.**電泳**：-在恒定電壓或恒定電流下進(jìn)行電泳，直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**：-使用考馬斯亮藍(lán)或其他蛋白質(zhì)染色劑對(duì)凝膠進(jìn)行染色，以可視化蛋白質(zhì)條帶。6.**分析**：-通過(guò)比較樣品條帶與分子量標(biāo)記物，評(píng)估蛋白質(zhì)的分子量和純度。###Westernblot步驟：1.**轉(zhuǎn)膜**：-將SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**：-使用封閉液（如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液）封閉膜上未被蛋白占據(jù)的部分，以減少非特異性結(jié)合。3.**一抗孵育**：-使用特異性識(shí)別His標(biāo)簽的抗體（一抗）與膜上的蛋白質(zhì)孵育，通常在4°C過(guò)夜。Recombinant Cynomolgus FGL1 Protein,hFc Tag