Recombinant Human CEACAM-7 Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-08

    Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease)高度特異性地作用于5'端磷酸化的雙鏈DNA主要通過(guò)以下幾個(gè)方面實(shí)現(xiàn):1.**結(jié)構(gòu)特異性識(shí)別**:Lambda核酸外切酶具有識(shí)別特定DNA結(jié)構(gòu)的能力,特別是5'端磷酸化的雙鏈DNA。這種識(shí)別能力通常由酶的活性位點(diǎn)結(jié)構(gòu)決定,能夠與5'-磷酸基團(tuán)形成特定的相互作用。2.**酶活性位點(diǎn)**:酶的活性位點(diǎn)含有氨基酸殘基,這些殘基能夠與5'-磷酸基團(tuán)形成氫鍵或其他非共價(jià)相互作用,從而穩(wěn)定酶與DNA的結(jié)合。3.**切割機(jī)制**:Lambda核酸外切酶通過(guò)水解5'-磷酸二酯鍵來(lái)降解DNA鏈。它從5'端開(kāi)始,逐個(gè)移除核苷酸,直到遇到非5'-磷酸化的末端或遇到結(jié)構(gòu)上的障礙。4.**低活性對(duì)非特異性底物**:對(duì)于5'-羥基(OH)末端的DNA或單鏈DNA,Lambda核酸外切酶的活性降低,因?yàn)檫@些底物缺乏與酶活性位點(diǎn)結(jié)合所需的特異性相互作用。5.**酶動(dòng)力學(xué)**:Lambda核酸外切酶對(duì)5'-磷酸化雙鏈DNA的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)(如Km和Vmax)與對(duì)非特異性底物的參數(shù)有差異,這反映了其對(duì)特異性底物的高親和力和高催化效率。6.**過(guò)程性(Processivity)**:一旦Lambda核酸外切酶結(jié)合到特異性底物上,它可以連續(xù)移除多個(gè)核苷酸,而不需要頻繁地與底物解離和重新結(jié)合,這增加了酶的效率。Taq DNA Polymerase 能夠在相對(duì)較高的溫度下保持穩(wěn)定,其適催化溫度在75-80°C。Recombinant Human CEACAM-7 Protein,His Tag

Recombinant Human CEACAM-7 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

T4UvsX重組酶是一種來(lái)源于T4噬菌體的酶,屬于RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復(fù)以及復(fù)制叉重新啟動(dòng)的過(guò)程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結(jié)合蛋白或輔助因子協(xié)同作用,與單鏈DNA形成核酸蛋白復(fù)合物。該復(fù)合物通過(guò)尋找與目標(biāo)DNA互補(bǔ)的區(qū)域進(jìn)行雜交,以完成鏈置換反應(yīng),且此酶本身不具有核酸酶活性。產(chǎn)品應(yīng)用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)。它在實(shí)驗(yàn)中與T4UvsY重組酶、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,以?xún)?yōu)化RPA擴(kuò)增反應(yīng)。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,或者-20℃儲(chǔ)存有效期為2年,避免反復(fù)凍融。其儲(chǔ)存液通常包含Tris-HCl、KCl、DTT、EDTA和甘油等成分,以保持酶的穩(wěn)定性和活性。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時(shí),需要注意其保存液中甘油含量較高,建議單獨(dú)分裝保存,并且在操作時(shí)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套,以確保安全。此外,該產(chǎn)品供科研使用,不應(yīng)用于臨床診斷。DL100Pfu DNA Polymerase 具有3'-5'外切酶活性,能夠識(shí)別并切除錯(cuò)配的核苷酸,進(jìn)一步提高擴(kuò)增的準(zhǔn)確性。

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磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中快速、高效地回收DNA片段的實(shí)驗(yàn)工具。它通常包含特異性吸附核酸分子的納米磁珠和相應(yīng)的緩沖液系統(tǒng),能夠去除雜質(zhì),得到高質(zhì)量的DNA回收產(chǎn)物。這種試劑盒適用于從TAE和TBE瓊脂糖凝膠中回收大小在100bp到30kb之間的DNA片段,回收效率通??蛇_(dá)70%左右。使用磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)包括:1.操作簡(jiǎn)便快速,整個(gè)回收過(guò)程大約只需30分鐘。2.無(wú)需離心,方便實(shí)現(xiàn)高通量和自動(dòng)化的DNA回收。3.與柱式法相比,磁珠法對(duì)于長(zhǎng)片段DNA的回收效率更高,可高出約20%。4.純化得到的DNA可以直接用于酶切、連接、測(cè)序等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。磁珠法的操作過(guò)程通常包括以下步驟:1.將瓊脂糖凝膠在融膠液中迅速融解,使DNA充分釋放。2.DNA與磁珠特異性結(jié)合,通過(guò)磁分離快速高效地分離磁珠與溶液。3.經(jīng)過(guò)洗滌去除雜質(zhì)。4.使用洗脫液將DNA從磁珠上洗脫,獲得高純度的DNA樣品。此外,一些試劑盒的說(shuō)明書(shū)還會(huì)提供具體的操作步驟和所需材料的清單,包括磁珠、融膠液、洗滌液、洗脫液等組分,以及可能需要自備的無(wú)水乙醇和磁分離裝置。在使用過(guò)程中,需要注意產(chǎn)品的保存條件和有效期,以及操作時(shí)的個(gè)人安全防護(hù)措施。

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過(guò)特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測(cè)序的DNA文庫(kù),通過(guò)其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測(cè)序接頭,簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)DNA測(cè)序建庫(kù)的多步過(guò)程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測(cè)序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過(guò)轉(zhuǎn)座酶在沒(méi)有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測(cè)序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)**:有研究開(kāi)發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡(jiǎn)化了建庫(kù)過(guò)程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,提高了樣本的利用率和測(cè)序速度。

由于其高活性,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶允許從極少量的細(xì)胞中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如單細(xì)胞水平的研究。

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磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒通過(guò)一系列優(yōu)化的步驟來(lái)確保從細(xì)菌細(xì)胞中提取高質(zhì)量和高純度的質(zhì)粒DNA。以下是這一過(guò)程的一般步驟:1.**細(xì)胞培養(yǎng)**:-首先,將含有質(zhì)粒的大腸桿菌在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至適宜密度(通常是OD600約0.6-1.2)。2.**裂解細(xì)胞**:-使用試劑盒提供的裂解液(含有SDS和可能的其他裂解成分)破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和膜,釋放出細(xì)胞內(nèi)容物。3.**吸附磁珠**:-將磁珠加入裂解后的混合物中,磁珠表面修飾有能夠特異性結(jié)合核酸的配體,使得質(zhì)粒DNA吸附于磁珠表面。4.**磁分離**:-利用磁力架將吸附有質(zhì)粒DNA的磁珠從溶液中分離出來(lái),去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞碎片。5.**洗滌雜質(zhì)**:-經(jīng)過(guò)幾次洗滌步驟,使用試劑盒提供的洗滌液去除吸附在磁珠表面的蛋白質(zhì)、RNA和其他雜質(zhì)。6.**去除洗滌液**:-磁分離后,小心地移除洗滌液,避免磁珠干燥或吸入磁珠,以確保純度。7.**洗脫質(zhì)粒**:-使用試劑盒提供的洗脫液(通常是低鹽或高pH的緩沖液)將質(zhì)粒DNA從磁珠上洗脫下來(lái)。8.**收集質(zhì)粒**:-洗脫后的質(zhì)粒DNA通常在室溫或4°C下保存,避免多次凍融,以維持DNA的完整性。

利用牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的連接原理,可以在無(wú)需DNA連接酶的情況下,快速高效地連接DNA片段,實(shí)現(xiàn)克隆。Recombinant Biotinylated Human B7-1/CD80 Protein,His-Avi Tag

與Taq DNA Polymerase不同,Pfu DNA Polymerase產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端,無(wú)3'端"A"突出。Recombinant Human CEACAM-7 Protein,His Tag

Benzonase核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒的組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化,以確保高靈敏度、高重復(fù)性和高準(zhǔn)確性的檢測(cè)結(jié)果。以下是該試劑盒優(yōu)化的組分:1.**2×BenzDetectionSolution**:這是檢測(cè)中的關(guān)鍵組分,用于提供反應(yīng)所需的緩沖環(huán)境,規(guī)格為1mL。2.**標(biāo)準(zhǔn)品**:試劑盒中包含多個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,包括25ng/ml、12.5ng/ml、6.3ng/ml、3.1ng/ml和1.5ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品,各100μL。這些標(biāo)準(zhǔn)品用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而準(zhǔn)確計(jì)算出樣品中的Benzonase殘留量。3.**樣品稀釋液**:提供1.5mL的樣品稀釋液,用于適當(dāng)稀釋待檢測(cè)樣品,以適應(yīng)檢測(cè)范圍。4.**反應(yīng)緩沖液(10XReactionBuffer)**:用于調(diào)整反應(yīng)體系的pH值和離子強(qiáng)度,保證酶活的正常發(fā)揮。5.**Benzonase底物(5XBenzonaseSubstrate)**:這是含有熒光標(biāo)記的DNA探針,用于檢測(cè)Benzonase的活性。當(dāng)?shù)孜锉籅enzonase切割后,熒光信號(hào)增強(qiáng),從而可以檢測(cè)到Benzonase的存在。6.**無(wú)核酸酶水(Nuclease-freeWater)**:確保在稀釋和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中不會(huì)引入額外的核酸酶污染。Recombinant Human CEACAM-7 Protein,His Tag