嘉定區(qū)有什么即用型培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

來源: 發(fā)布時間:2020-09-08

    且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1.提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質(zhì)。2.提供***和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)***(氫化可的松、**)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3.提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。4.提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。5.對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被***用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。嘉定區(qū)有什么即用型培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

    調(diào)整pH值到6。分裝,滅菌,備用。該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。***的培養(yǎng)基在植物組織培養(yǎng)時,通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽。CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入·L-1的BA8mL,·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用·L-1的NaOH和mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至。加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。******葉片愈傷組織誘導(dǎo)取一無菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周。金山區(qū)現(xiàn)代即用型培養(yǎng)基質(zhì)量保證包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號。

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至,若pH值超過,則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時期細菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當***素,一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養(yǎng)過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。

    應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基,應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,**后必須加以補足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進行pH的初步調(diào)正,因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養(yǎng)基的**終pH,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。培養(yǎng)基注意事項編輯語音培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進行驗證,確保滅菌和除菌效果。記錄其來源。培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄。

    培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基脫水培養(yǎng)基又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基,指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。培養(yǎng)基微生物分類編輯語音選擇性培養(yǎng)基:一類根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基,具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能,***用于菌種篩選等領(lǐng)域。鑒別培養(yǎng)基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如,伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基(EMB)。培養(yǎng)基常見培養(yǎng)基編輯語音細菌培養(yǎng)基牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏,蛋白胨,氯化鈉,瓊脂,水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基細菌培養(yǎng)基取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,煮沸。pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份。靜安區(qū)常見即用型培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂。嘉定區(qū)有什么即用型培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

    然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶)。觀察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率。***分化及植株再生培養(yǎng)將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22℃條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況***愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示。6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不相同。其中,在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為,在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為。由于實驗過程中,外植體即***葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整個實驗的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小。動物細胞培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基是一個全營養(yǎng)型培養(yǎng)基,***應(yīng)用于哺乳動物細胞和雜交瘤細胞的培養(yǎng),如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞。**初設(shè)計用于懸浮細胞培養(yǎng)和人白血病細胞的單層細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基編輯語音選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。嘉定區(qū)有什么即用型培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

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