對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用,℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在,℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產(chǎn)生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養(yǎng)基時,常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑,避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養(yǎng)基pH會發(fā)生改變(一般使pH降低),可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求,在培養(yǎng)基滅菌前后加以調整。在配制培養(yǎng)基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生,或適當提高滅菌溫度?;蚣尤胙趸瘎?,從而增加F值;靜安區(qū)特色干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務
其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌,從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基葡萄糖5%,尿素,硫化銨,磷酸二氫鉀,磷酸氫二鈉,七水合硫酸鎂,七水合硫酸鐵,酵母膏,孟加拉紅,Ashby無氮培養(yǎng)基富集好氧自生固氮菌甘露醇1%,磷酸二氫鉀,七水合硫酸鎂,氯化鈉,二水合硫酸鈣,碳酸鈣培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基編輯語音EMB培養(yǎng)基常用于鑒別蛋白胨10g,乳糖5g,蔗糖5g,磷酸氫二鉀2g,伊紅,美藍,蒸餾水1000g,2216E培養(yǎng)基配方分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方蛋白胨5g,酵母膏1g,磷酸高鐵,瓊脂15-20g,陳海水1000ml,煮沸氫氧化鈉(5%)的溶液調pH值伊紅美藍培養(yǎng)基可用于檢測水中大腸桿菌的含量首先按以下組成配制基礎培養(yǎng)基。蛋白胨10g,NaCl5g瓊脂15-20g將上述物質溶解后,用蒸餾水定容至1000mL,調節(jié)pH為。滅菌后,冷卻至60℃左右,再按下面的比例,在無菌操作條件下加入滅菌的乳糖溶液、伊紅水溶液以及美藍水溶液。搖勻后,立即倒平板。溶液中的乳糖在高溫下會破壞,因此一般使用壓力為70kPa、溫度為115℃的條件滅菌20分鐘。基礎培養(yǎng)基100mL,20%乳糖溶液2mL2%伊紅水溶液2mL,培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基編輯語音天然培養(yǎng)基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基。浦東新區(qū)推廣干粉培養(yǎng)基及配套試劑建筑常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)。
二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至,若pH值超過,則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時期細菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當***素,一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養(yǎng)過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA***的細胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。
如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術建立早期,體外培養(yǎng)細胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因:來源充足、制備技術成熟、經(jīng)過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量**大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質**高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。
然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶)。觀察愈傷組織誘導結果,統(tǒng)計愈傷組織誘導率。***分化及植株再生培養(yǎng)將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22℃條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導的總體情況***愈傷組織誘導培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示。6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)生污染,但誘導率幾乎各不相同。其中,在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為,在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為。由于實驗過程中,外植體即***葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小。動物細胞培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基是一個全營養(yǎng)型培養(yǎng)基,***應用于哺乳動物細胞和雜交瘤細胞的培養(yǎng),如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞。**初設計用于懸浮細胞培養(yǎng)和人白血病細胞的單層細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基編輯語音選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓。長寧區(qū)特色干粉培養(yǎng)基及配套試劑誠信互利
二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。靜安區(qū)特色干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務
應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,**后必須加以補足。培養(yǎng)基pH的初步調整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正,因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養(yǎng)基的**終pH,保證培養(yǎng)基的質量。pH調正后,還應將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。培養(yǎng)基注意事項編輯語音培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果。靜安區(qū)特色干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務
上海申啟生物科技有限公司總部位于上海市普陀區(qū)綏德路118弄60號4層、62號4層,是一家從事生物科技領域內的技術開發(fā)、技術研制、技術咨詢、技術轉讓,一類醫(yī)療器械的銷售,微生物干粉培養(yǎng)基的生產(chǎn)加工(限綏德路118弄62號4層),醫(yī)用體外診斷試劑(限綏德路118弄60號4層),從事貨物及技術的進出口業(yè)務,。的公司。上海申啟擁有一支經(jīng)驗豐富、技術創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供技術開發(fā),技術研發(fā),技術轉讓,醫(yī)療器材。上海申啟不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術為先導,以產(chǎn)品為平臺,以應用為重點,以服務為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務。上海申啟始終關注醫(yī)藥健康市場,以敏銳的市場洞察力,實現(xiàn)與客戶的成長共贏。