MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。與MTT相比較,cck-8法優(yōu)勢(shì)明顯。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),cck-8檢測(cè)OD值與活細(xì)胞數(shù)的線性關(guān)系比MTT法明顯。而且,MTT法產(chǎn)生不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶,需要有機(jī)溶劑DMSO溶解,操作過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)溶解不完全或細(xì)胞丟失的現(xiàn)象,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。cck-8法只是加染料的一步操作,操作簡(jiǎn)單,檢測(cè)可實(shí)時(shí),免去了去除培養(yǎng)基的操作。對(duì)環(huán)境保護(hù)更為有利,不使用有機(jī)溶劑DMSO,所需的耗材也少。CCK-8試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性檢測(cè)的快速、高靈敏度試劑盒。貴州HUMSC試劑盒基因表達(dá)分折
His標(biāo)簽是當(dāng)前*流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的使用,一是能構(gòu)成表位利于檢測(cè);二是構(gòu)成獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征(結(jié)合配體)利于純化。其特點(diǎn)可總結(jié)為以下幾點(diǎn):1.標(biāo)簽的分子量小,只有~0.84KD,而GST和蛋白A分別為~26KD和~30KD,一般不影響目標(biāo)蛋白的功能;2.His標(biāo)簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化,前者在純化疏水性強(qiáng)的蛋白得到應(yīng)用,后者在純化包涵體蛋白時(shí)特別有用,用高濃度的變性劑溶解后通過(guò)金屬螯和親和層析去除雜蛋白,使復(fù)性不受其它蛋白的干擾,或進(jìn)行金屬螯和親和層析復(fù)性;3.His標(biāo)簽融合蛋白也被用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究;4.His標(biāo)簽免疫原性相對(duì)較低,可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫制備抗體;5.可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng),純化的條件溫和;6.可以和其它的親和標(biāo)簽一起構(gòu)建雙親和標(biāo)簽。純化:組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有強(qiáng)烈的吸引力,可用于固定化金屬螯合層析(IMAC),對(duì)重組蛋白進(jìn)行分離純化。新疆人臍帶間充質(zhì)干試劑盒干細(xì)胞試劑盒zhi liao性基因表達(dá)的持久性是針對(duì)應(yīng)用需求選擇病毒載體的關(guān)鍵考慮因素。
ELISPOT法源自ELISA,又突破傳統(tǒng)ELISA法,是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。兩者都是檢測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子或其他可溶性蛋白,它們*大的不同在于:ELISA通過(guò)顯色反應(yīng),在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出定量的可溶性蛋白總量。ELISPOT通過(guò)顯色反應(yīng),在細(xì)胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn),可直接通過(guò)ELISPOT分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù),從而計(jì)算出分泌該蛋白或者細(xì)胞因子的細(xì)胞的頻率。由于是單細(xì)胞水平檢測(cè),需細(xì)胞量少, 比ELISA更靈敏。捕獲抗體為高親和力、高特異性、低內(nèi)du素單抗,在研究者以刺激劑激huo細(xì)胞時(shí),不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。但該方法對(duì)于操作者的技術(shù)要求較高,要保證孔中細(xì)胞的均勻性,否則讀板誤差會(huì)很大。
CCK-8試劑(Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑 [1] )中含有WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan),生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。WST-1在代謝活性細(xì)胞上產(chǎn)生高度水溶性的福爾馬贊,允許直接和用戶友好的細(xì)胞活力和增殖的比色測(cè)量。
源于病毒的載體系統(tǒng)作為基因遞送工具已經(jīng)在基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域應(yīng)用了多年。已經(jīng)有多種類型的病毒載體類型可以選擇使用,其中,基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域*常使用的是慢病毒(LV)、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒(GRV)、腺病毒(AV)以及腺相關(guān)病毒(AAV)。分別源于小鼠白血病病毒和HIV的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(GRVV)和慢病毒載體(LVV)是*常使用的兩種逆轉(zhuǎn)錄病毒。針對(duì)特定的應(yīng)用選擇病毒載體系統(tǒng)時(shí)需要考慮的主要因素包括zhi liao性GOI(目的基因)的負(fù)載量(插入大小)、免疫原性、細(xì)胞趨向性和被靶細(xì)胞攝取的效率、基因表達(dá)的持續(xù)時(shí)間以及規(guī)?;a(chǎn)的簡(jiǎn)單性。Thomas等曾總結(jié)介紹過(guò)不同的病毒載體系統(tǒng),整合vs非整合、囊膜vs無(wú)囊膜、病毒DNA基因組vs病毒RNA。此外,Patel等強(qiáng)調(diào)過(guò)每種系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),每種載體系統(tǒng)從其各自的特性來(lái)說(shuō)都是獨(dú)yi無(wú)er的,這也使其可能適合某些應(yīng)用,而不適合另一些應(yīng)用。研究者可以利用光來(lái)檢測(cè)、測(cè)量和控制分子信號(hào)、細(xì)胞和細(xì)胞群,以便了解它們的活動(dòng)。貴州HUMSC試劑盒基因表達(dá)分折
GFP可以標(biāo)記轉(zhuǎn)基因修飾的ES細(xì)胞,然后可以將其用于轉(zhuǎn)入小鼠并產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠。貴州HUMSC試劑盒基因表達(dá)分折
熒光素(Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中*有代表性的是來(lái)自螢火蟲(chóng)體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光,常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。熒光素酶的具體應(yīng)用,主要有以下兩個(gè)方面:(一):pGL3-Basic---用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與啟動(dòng)子活性分析。把待分析啟動(dòng)子區(qū)段構(gòu)建到F-Luciferase上游,和轉(zhuǎn)錄因子共轉(zhuǎn)染分析F-Luciferase活性即可反應(yīng)啟動(dòng)子的活性高低。該質(zhì)粒通常需要結(jié)合持續(xù)性表達(dá)R-Luciferase的載體作為內(nèi)參以校正不同樣品之間轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。(二):psiCHECK2---miRNA與其靶點(diǎn)相關(guān)分析,包括miRNA靶基因驗(yàn)證、lncRNA與circRNA吸附miRNA驗(yàn)證等。 需要把miRNA潛在結(jié)合靶點(diǎn)克隆到R-Luciferase (hRLuc) 3’UTR區(qū)域,然后與待測(cè)miRNA共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)測(cè)定R-Luciferase活性高低,F(xiàn)-Luciferase (hLuc+)作為校正內(nèi)參校正不同樣品之間轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。貴州HUMSC試劑盒基因表達(dá)分折
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過(guò)STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。