1.慢病毒生物學(xué)慢病毒生存所需的基本基因是gag、pol和env；gag編碼結(jié)構(gòu)蛋白，pol編碼逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，env編碼病毒包膜糖蛋白。所有逆轉(zhuǎn)錄病毒都有相似的生命周期。當(dāng)成熟病毒通過(guò)直接膜融合或通過(guò)包膜糖蛋白與靶細(xì)胞表面同源受體結(jié)合而介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞時(shí)，生命周期就開始了。融合之后是脫殼過(guò)程，在此階段，一些病毒蛋白（包括部分Gag亞基）從病毒核xin解離。病毒RNA經(jīng)過(guò)復(fù)雜的多步逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程轉(zhuǎn)化為前病毒雙鏈DNA。該前病毒DNA與病毒蛋白形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核并整合到宿主基因組中。整合過(guò)程由關(guān)鍵的病毒蛋白（例如整合酶）和內(nèi)源性宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（例如LEDGF）輔助完成。野生型慢病毒的前病毒基因組轉(zhuǎn)錄和翻譯依賴于宿主機(jī)制來(lái)啟動(dòng)和完成。病毒完成感ran性顆粒組裝后，其后代通過(guò)出芽離開宿主細(xì)胞。在該過(guò)程中，慢病毒利用蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)途徑所需的內(nèi)體分選復(fù)合物來(lái)執(zhí)行復(fù)雜的出芽過(guò)程并將病毒顆粒釋放到細(xì)胞外。在出芽過(guò)程中，宿主細(xì)胞的內(nèi)源性膜蛋白會(huì)摻入病毒顆粒的包膜中，例如MHC分子，這可能會(huì)影響后代病毒顆粒的分布。這些蛋白質(zhì)對(duì)細(xì)胞發(fā)育、增殖、遷移、分化和成熟來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。試劑盒代測(cè)
來(lái)自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GFP)可能已經(jīng)在水母等生物中存在了數(shù)百萬(wàn)年。直到20世紀(jì)60年代，科學(xué)家才開始真正研究綠色熒光蛋白，并推斷出它的生化特性?，F(xiàn)在，GFP及其熒光衍生物已成為實(shí)驗(yàn)室的主要研究對(duì)象。GFP被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)科的研究，包括：標(biāo)記基因以闡明其表達(dá)或定位，作為生物傳感器或細(xì)胞標(biāo)記，研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，可視化啟動(dòng)子活性等等。
GFP是一種由238個(gè)氨基酸組成的大約27kda的蛋白，來(lái)源于水晶水母Aequorea victoria。它的熒光發(fā)射波長(zhǎng)在可見光譜的綠色部分(因此得名)，這是由于蛋白中心的三個(gè)特定氨基酸(Ser65、Tyr66和Gly67)成熟反應(yīng)形成的發(fā)色團(tuán)。第yi次發(fā)現(xiàn)時(shí)，GFP*令人覺得不可思議的一點(diǎn)是發(fā)色團(tuán)自發(fā)形成，不需要額外的輔助因子、底物或酶活性——它只需要在成熟過(guò)程中存在氧氣。這意味著該蛋白可以直接從維多利亞藻中提取，并在任何生物體中表達(dá)，同時(shí)仍然保持熒光。 還原糖含量測(cè)定試劑盒在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性，MTT 吸光度盡量在0-0.7 范圍內(nèi)。
就eGFP而言，相對(duì)于GFP，其熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。mCherry是從DsRed演化來(lái)的性能*好的一個(gè)單體紅色熒光蛋白，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實(shí)現(xiàn)多色標(biāo)記。熒光蛋白活性和被融合的目標(biāo)蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標(biāo)簽蛋白，其融合表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.不用破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接通過(guò)熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，實(shí)時(shí)顯示目的基因的表達(dá)情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽(yù)為活細(xì)胞探針。2.其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等情況。3.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會(huì)干擾標(biāo)簽蛋白檢測(cè)，從而使其檢測(cè)更顯得快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。4.其低消耗、高靈敏度檢測(cè)，十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP表達(dá)標(biāo)簽被廣fan地應(yīng)用于基團(tuán)表達(dá)調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細(xì)胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。5.mCherry紅色熒光蛋白在標(biāo)記病毒顆粒，研究病毒和宿主細(xì)胞之間更有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)。如用mRFP或mCherry標(biāo)記HIV病毒顆粒，研究HIV和宿主細(xì)胞問(wèn)的相互作用以及HIV侵染宿主細(xì)胞的過(guò)程．用mRFP標(biāo)記慢病毒顆粒，研究慢病毒在小鼠體內(nèi)的復(fù)制過(guò)程等。
細(xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加，在整個(gè)生命周期中對(duì)正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細(xì)胞會(huì)處于持續(xù)增殖狀態(tài)，如皮膚和骨髓細(xì)胞，但許多成人組織中的細(xì)胞會(huì)處于非增殖狀態(tài)，只有在損傷或感ran時(shí)，才能被激huo來(lái)補(bǔ)充細(xì)胞。與之相反，細(xì)胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細(xì)胞增殖失調(diào)是各類cancer的標(biāo)志，會(huì)造成**異常的不受控制的生長(zhǎng)。增殖檢測(cè)一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測(cè)是細(xì)胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會(huì)使用的手段。目前廣泛應(yīng)用于**生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。FACS可以用于分離表達(dá)GFP的細(xì)胞和不表達(dá)GFP的細(xì)胞。
細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過(guò)對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。
細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過(guò)檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來(lái)評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗**藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)，另外也可以通過(guò)Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。 研究者可以利用光來(lái)檢測(cè)、測(cè)量和控制分子信號(hào)、細(xì)胞和細(xì)胞群，以便了解它們的活動(dòng)。酶聯(lián)免疫吸附
熒光素酶通過(guò)載體構(gòu)建可以研究基因組織的特異性表達(dá)；對(duì)一些細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移等變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。試劑盒代測(cè)
His標(biāo)簽是當(dāng)前*流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于檢測(cè)；二是構(gòu)成獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。其特點(diǎn)可總結(jié)為以下幾點(diǎn)：1.標(biāo)簽的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分別為~26KD和~30KD，一般不影響目標(biāo)蛋白的功能；2.His標(biāo)簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化，前者在純化疏水性強(qiáng)的蛋白得到應(yīng)用，后者在純化包涵體蛋白時(shí)特別有用，用高濃度的變性劑溶解后通過(guò)金屬螯和親和層析去除雜蛋白，使復(fù)性不受其它蛋白的干擾，或進(jìn)行金屬螯和親和層析復(fù)性；3.His標(biāo)簽融合蛋白也被用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究；4.His標(biāo)簽免疫原性相對(duì)較低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫制備抗體；5.可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)，純化的條件溫和；6.可以和其它的親和標(biāo)簽一起構(gòu)建雙親和標(biāo)簽。純化：組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有強(qiáng)烈的吸引力，可用于固定化金屬螯合層析(IMAC)，對(duì)重組蛋白進(jìn)行分離純化。試劑盒代測(cè)
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。