不過也有用單抗做檢測(cè)抗體的情況，尤其是在科研中。雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專一性的優(yōu)勢(shì)，但該法只適用于有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的抗原檢測(cè)，主要用于檢測(cè)各種大分子抗原——例如在醫(yī)學(xué)檢測(cè)中測(cè)定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關(guān)的，以及在科研中檢測(cè)細(xì)胞因子等。
由于雙抗體夾心法特異性高，在檢測(cè)過程中有時(shí)會(huì)將樣本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，稱為雙抗體夾心一步法，因?yàn)椴僮鲿r(shí)間短，在商業(yè)化生產(chǎn)中有很大優(yōu)勢(shì)。
但雙抗體夾心一步法要特別注意ELISA中的鉤狀效應(yīng)（hook ffect），因?yàn)榇藭r(shí)如果樣本中抗原含量過高會(huì)導(dǎo)致其與固相抗體和酶標(biāo)抗體均有結(jié)合而無法形成“夾心復(fù)合物”，此時(shí)測(cè)出的結(jié)果將低于實(shí)際含量甚至是陰性結(jié)果。
因此，如果使用雙抗體夾心一步法測(cè)定樣本中抗原含量時(shí)要注意測(cè)量的線性范圍，另外使用高親和力的單抗也可削弱鉤狀效應(yīng)。 許多用于檢測(cè)各種細(xì)胞內(nèi)條件的生物傳感器都是基于GFP。細(xì)胞抗體
來自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GFP)可能已經(jīng)在水母等生物中存在了數(shù)百萬年。直到20世紀(jì)60年代，科學(xué)家才開始真正研究綠色熒光蛋白，并推斷出它的生化特性。現(xiàn)在，GFP及其熒光衍生物已成為實(shí)驗(yàn)室的主要研究對(duì)象。GFP被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)科的研究，包括：標(biāo)記基因以闡明其表達(dá)或定位，作為生物傳感器或細(xì)胞標(biāo)記，研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，可視化啟動(dòng)子活性等等。
GFP是一種由238個(gè)氨基酸組成的大約27kda的蛋白，來源于水晶水母Aequorea victoria。它的熒光發(fā)射波長(zhǎng)在可見光譜的綠色部分(因此得名)，這是由于蛋白中心的三個(gè)特定氨基酸(Ser65、Tyr66和Gly67)成熟反應(yīng)形成的發(fā)色團(tuán)。第yi次發(fā)現(xiàn)時(shí)，GFP*令人覺得不可思議的一點(diǎn)是發(fā)色團(tuán)自發(fā)形成，不需要額外的輔助因子、底物或酶活性——它只需要在成熟過程中存在氧氣。這意味著該蛋白可以直接從維多利亞藻中提取，并在任何生物體中表達(dá)，同時(shí)仍然保持熒光。 細(xì)胞抗體本試劑盒可以檢測(cè)穩(wěn)定的，細(xì)胞內(nèi)的乳酸脫氫酶，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，這種酶會(huì)被釋放出來。
源于病毒的載體系統(tǒng)作為基因遞送工具已經(jīng)在基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域應(yīng)用了多年。已經(jīng)有多種類型的病毒載體類型可以選擇使用，其中，基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域*常使用的是慢病毒（LV）、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒（GRV）、腺病毒（AV）以及腺相關(guān)病毒（AAV）。分別源于小鼠白血病病毒和HIV的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（GRVV）和慢病毒載體（LVV）是*常使用的兩種逆轉(zhuǎn)錄病毒。針對(duì)特定的應(yīng)用選擇病毒載體系統(tǒng)時(shí)需要考慮的主要因素包括zhi liao性GOI（目的基因）的負(fù)載量（插入大?。?、免疫原性、細(xì)胞趨向性和被靶細(xì)胞攝取的效率、基因表達(dá)的持續(xù)時(shí)間以及規(guī)?；a(chǎn)的簡(jiǎn)單性。Thomas等曾總結(jié)介紹過不同的病毒載體系統(tǒng)，整合vs非整合、囊膜vs無囊膜、病毒DNA基因組vs病毒RNA。此外，Patel等強(qiáng)調(diào)過每種系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，每種載體系統(tǒng)從其各自的特性來說都是獨(dú)yi無er的，這也使其可能適合某些應(yīng)用，而不適合另一些應(yīng)用。
Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)原理：WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
用途：CCK-8法應(yīng)用非常廣fan，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。 慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組，使宿主細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)外源基因。
His標(biāo)簽是當(dāng)前*流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于檢測(cè)；二是構(gòu)成獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。其特點(diǎn)可總結(jié)為以下幾點(diǎn)：1.標(biāo)簽的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分別為~26KD和~30KD，一般不影響目標(biāo)蛋白的功能；2.His標(biāo)簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化，前者在純化疏水性強(qiáng)的蛋白得到應(yīng)用，后者在純化包涵體蛋白時(shí)特別有用，用高濃度的變性劑溶解后通過金屬螯和親和層析去除雜蛋白，使復(fù)性不受其它蛋白的干擾，或進(jìn)行金屬螯和親和層析復(fù)性；3.His標(biāo)簽融合蛋白也被用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究；4.His標(biāo)簽免疫原性相對(duì)較低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行免疫制備抗體；5.可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)，純化的條件溫和；6.可以和其它的親和標(biāo)簽一起構(gòu)建雙親和標(biāo)簽。純化：組氨酸殘基側(cè)鏈與固態(tài)的鎳有強(qiáng)烈的吸引力，可用于固定化金屬螯合層析(IMAC)，對(duì)重組蛋白進(jìn)行分離純化。在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性，MTT 吸光度盡量在0-0.7 范圍內(nèi)。細(xì)胞抗體
幾乎不受環(huán)境pH影響。細(xì)胞抗體
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細(xì)胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上，只能進(jìn)行瞬時(shí)感ran。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性基因片段大，可以長(zhǎng)期表達(dá)等xian zhu優(yōu)點(diǎn)。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，可作為一種體外基因運(yùn)輸?shù)墓ぞ?。慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能持續(xù)數(shù)月，且無可觀察到的病理學(xué)現(xiàn)象。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)粒或四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)。其中四質(zhì)粒系統(tǒng)比三質(zhì)粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些，所以應(yīng)用較多。細(xì)胞抗體
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。