慢病毒載體(Lentiviralvector)較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍,慢病毒能夠有效感ran非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達shRNA,實現(xiàn)在多種類型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達的功能性沉默,為在原代的人和動物細(xì)胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及產(chǎn)生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者,不但具備特異性地使基因表達沉默的能力,而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢,為基因功能的研究提供了更強有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能大da提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大da增加,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達。慢病毒攜帶的基因組可整合到宿主基因組,使宿主細(xì)胞長時間穩(wěn)定表達外源基因。平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細(xì)胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色體上,只能進行瞬時感ran。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性基因片段大,可以長期表達等xian zhu優(yōu)點。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答,可作為一種體外基因運輸?shù)墓ぞ?。慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因表達能持續(xù)數(shù)月,且無可觀察到的病理學(xué)現(xiàn)象。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)?;蛩馁|(zhì)粒包裝系統(tǒng)。其中四質(zhì)粒系統(tǒng)比三質(zhì)粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些,所以應(yīng)用較多。過氧化氫試劑盒幾乎不受環(huán)境pH影響。
慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞等,并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中,從而大da增加了轉(zhuǎn)染效率,并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達若干代,可以進行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因為是隨機整合,也有不確定因素,有些公司還能提供定點整合技術(shù),將靶基因定點整合到基因組特定的部位,從而保證其高效表達并且對細(xì)胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。
慢病毒表達載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran。
ELISPOT法源自ELISA,又突破傳統(tǒng)ELISA法,是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。兩者都是檢測細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子或其他可溶性蛋白,它們*大的不同在于:ELISA通過顯色反應(yīng),在酶標(biāo)儀上測定吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出定量的可溶性蛋白總量。ELISPOT通過顯色反應(yīng),在細(xì)胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點,可直接通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù),從而計算出分泌該蛋白或者細(xì)胞因子的細(xì)胞的頻率。由于是單細(xì)胞水平檢測,需細(xì)胞量少, 比ELISA更靈敏。捕獲抗體為高親和力、高特異性、低內(nèi)du素單抗,在研究者以刺激劑激huo細(xì)胞時,不會影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。但該方法對于操作者的技術(shù)要求較高,要保證孔中細(xì)胞的均勻性,否則讀板誤差會很大。為進行神經(jīng)系統(tǒng)疾病或神經(jīng)科學(xué)相關(guān)研究的研究人員提供*** ELISA 試劑盒。
WST-1細(xì)胞活力和增殖檢測試劑盒描述:
通過存在于活細(xì)胞中的琥珀酸四唑還原酶將四唑鎓鹽還原成有色甲compounds化合物,提供了測量細(xì)胞活力和增殖的靈敏且準(zhǔn)確的方法。然而,*常用的四唑鹽MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物]的缺點是由MTT產(chǎn)生的甲dye染料極不溶于水,因此分光光度定量需要額外的提取步驟。ScienCell WST-1細(xì)胞活力和增殖測定使用四唑鹽WST-1[2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H四唑]。WST-1在代謝活性細(xì)胞上產(chǎn)生高度水溶性的福爾馬贊,允許直接和用戶友好的細(xì)胞活力和增殖的比色測量。 ALP陽性,未分化的細(xì)胞染成紅色,為監(jiān)測干細(xì)胞分化/未分化提供了有效的系統(tǒng)。人血管生成定量PCR芯片試劑盒
熒光素酶(luciferase)是指能催化不同底物發(fā)生氧化使其發(fā)射出熒光的一類酶的總稱。平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
第yi代慢病毒載體包含HIV基因組的很大一部分,包括gag、pol及其他幾種病毒蛋白。第yi代慢病毒載體的設(shè)計中包含了另一種病毒的包膜蛋白,*常見的是VSV-G。VSV-G的受體為低密度脂蛋白(LDL)受體,普遍存在于多種細(xì)胞表面,從而使慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)多種細(xì)胞。VSV-G的編碼基因與其他慢病毒基因分散在不同的質(zhì)粒。第yi代慢病毒載體含有慢病毒輔助基因vif、vpr、vpu和nef以及調(diào)控基因tat和rev。其中,Vif、vpr、vpu和nef為慢病毒在體內(nèi)復(fù)制提供了生存/適應(yīng)性優(yōu)勢,但對于慢病毒在體外的增殖不是必需的;tat和rev是病毒復(fù)制所必需的。隨后開發(fā)了缺乏毒力因子vif、vpr、vpu和nef的更安全的第二代慢病毒載體。輔助基因的去除不影響遺傳物質(zhì)向宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實驗檢測試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實驗。