隨著病毒生物學(xué)的發(fā)展,種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實驗系統(tǒng)(如細胞系、原代細胞、組織臟器等)轉(zhuǎn)運核酸的重要工具。除了在實驗室的組織培養(yǎng)和動物模型生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用,它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗中。目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒(LV)、(γ-)逆轉(zhuǎn)錄病毒(RV)、腺病毒(Ad)和腺相關(guān)病毒(AAV)。我們分述之。慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA副本,cDNA副本又能穩(wěn)定整合至宿主細胞基因組中(這就是常說的穩(wěn)轉(zhuǎn))。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種:簡單的(有時又稱為致ai病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒,如鼠白血病病毒)和復(fù)雜的(如慢病毒)。這些亞型間主要的差異在于復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因,而簡單的則沒有(下文有進一步的討論)。這兩類病毒顆粒都含有兩份正鏈RNA,RNA上附有病毒反轉(zhuǎn)錄酶(RT),它們位于病毒的內(nèi)核(圖1)。位于內(nèi)核的還有結(jié)構(gòu)蛋白和酶,包括核殼(NC)、衣殼(CA)、整合酶(IN)和蛋白酶(PR)。內(nèi)核由一圈外周蛋白層包圍,外周蛋白包括基質(zhì)蛋白(MA),基質(zhì)蛋白又被來源于宿主細胞細胞膜插有包膜糖蛋白的腹膜所包圍。該試劑盒中提供了所有必需的PCR試劑。只需添加DNA模板并進行PCR反應(yīng)。細胞質(zhì)染料
ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。酶試劑盒科學(xué)家們設(shè)計出基于抗體的探針,讓它們純化和研究細胞內(nèi)不同類型的蛋白質(zhì)。
細胞生物學(xué)(cellbiology)是在顯微、亞顯微和分子水平三個層次上,研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能和各種生命規(guī)律的一門科學(xué)。細胞生物學(xué)由cytology發(fā)展而來,Cytology是關(guān)于細胞結(jié)構(gòu)與功能(特別是染色體)的研究?,F(xiàn)代細胞生物學(xué)從顯微水平,超微水平和分子水平等不同層次研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能及生命活動。細胞生物學(xué)是一切生命科學(xué)的*為重要的基礎(chǔ)學(xué)科之一。同時又是生命科學(xué)的生長點,反映了生物科學(xué)發(fā)展的*新成就。細胞生物學(xué)是以細胞為研究對象,從細胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個層次,以動態(tài)的觀點,研究細胞和細胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細胞的生活史和各種生命活動規(guī)律的學(xué)科。細胞生物學(xué)是現(xiàn)代sheng命科學(xué)的前沿分支學(xué)科之一,主要是從細胞的不同結(jié)構(gòu)層次來研究細胞的生命活動的基本規(guī)律。從生命結(jié)構(gòu)層次看,細胞生物學(xué)位于分子生物學(xué)與發(fā)育生物學(xué)之間,同它們相互銜接,互相滲透。
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1.靈敏度高:靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì),對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動力學(xué)范圍:發(fā)光強度在4-6個量級之間,與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色酶聯(lián)免疫分析吸光度(OD值)2.0的范圍相比,優(yōu)勢明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動力學(xué)范圍,但是放射性限制其應(yīng)用。3.光信號持續(xù)時間長:化學(xué)發(fā)光免疫分析的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一tian,簡化了實驗操作及測量。4.分析方法簡便快速:絕大多數(shù)分析測定jin需加入一種試劑(或符合制劑)的一步模式。5.結(jié)果穩(wěn)定、誤差?。簶颖颈旧戆l(fā)光,不需要額外光源,避免了外來因素的干擾(光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器),分析結(jié)果穩(wěn)定可靠。6.安全性好及使用期長:到目前為止還未發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑的危害性;另外這些試劑穩(wěn)定,保存期可達一年之久。FACS可以用于分離表達GFP的細胞和不表達GFP的細胞。
不過也有用單抗做檢測抗體的情況,尤其是在科研中。雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專一性的優(yōu)勢,但該法只適用于有多個結(jié)合位點的抗原檢測,主要用于檢測各種大分子抗原——例如在醫(yī)學(xué)檢測中測定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關(guān)的,以及在科研中檢測細胞因子等。
由于雙抗體夾心法特異性高,在檢測過程中有時會將樣本和酶標抗體同時加入進行反應(yīng),稱為雙抗體夾心一步法,因為操作時間短,在商業(yè)化生產(chǎn)中有很大優(yōu)勢。
但雙抗體夾心一步法要特別注意ELISA中的鉤狀效應(yīng)(hook ffect),因為此時如果樣本中抗原含量過高會導(dǎo)致其與固相抗體和酶標抗體均有結(jié)合而無法形成“夾心復(fù)合物”,此時測出的結(jié)果將低于實際含量甚至是陰性結(jié)果。
因此,如果使用雙抗體夾心一步法測定樣本中抗原含量時要注意測量的線性范圍,另外使用高親和力的單抗也可削弱鉤狀效應(yīng)。 由于其穩(wěn)定性,GFP可用于細胞家系研究中的譜系跟zong。酶試劑盒
研究者可以利用光來檢測、測量和控制分子信號、細胞和細胞群,以便了解它們的活動。細胞質(zhì)染料
中喬新舟CCK-8細胞增殖/毒性檢測試劑盒(Cell Counting Kit-8)產(chǎn)品特點:1.進行高通量操作的同時大da簡化操作步驟,不需要進行移液、離心或預(yù)標記等步驟;2.通過使用試劑盒配備的stopsolution,能隨意終止顏色反應(yīng),控制實驗條件;3.避免使用放射性同位素,保證實驗安全性;4.具有很高的準確度;5.低細胞數(shù)目(小于100個細胞/孔)檢測也能保證良好的線性范圍及靈敏度;6.使用96或384孔板進行操作,節(jié)省實驗操作時間,能同時進行大量樣本檢測。
細胞質(zhì)染料
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實驗。