青海胰酶聯(lián)系方式

0.25%胰酶是細胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會有顏色差異？商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn)。消化液經(jīng)過過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些組織的消化。青海胰酶聯(lián)系方式

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機溶劑。胰蛋白酶的等電點pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護和***作用。[1]內(nèi)蒙古胰酶牌子在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質(zhì)水解為肽進而分解為氨基酸，其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成，不含 EDTA，經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。該溶液濃度較高，可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用。

胰酶中的酚紅有哪些作用？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞尤其是哺乳類細胞時，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，在做流式細胞檢測時，也會使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8、在做細胞凋亡檢測時，細胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V，進而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進行消化，時間可以長一點。隨時觀察細胞情況，避免消化過度；也可使用細胞刮刀將細胞刮下，后用***吹勻，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害。胰蛋白酶溶液作為細胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細胞的連續(xù)培養(yǎng)。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會，因為加的量很少，所以一般不會凍壞細胞。9、消化時。 胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。青海胰酶聯(lián)系方式

EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。青海胰酶聯(lián)系方式

胰酶分裝凍存時要注意什么？胰酶分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。青海胰酶聯(lián)系方式