宣傳空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量

來源: 發(fā)布時間:2021-12-12

10x  Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標(biāo)記的點(barcoded spots),每個點的直徑為55 μm,點和點之間中心的距離為100 μm,并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細(xì)胞中會釋放出mRNA,遷移到每個spot的mRNA會被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,然后進(jìn)行文庫構(gòu)建并進(jìn)行測序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以確定哪些數(shù)據(jù)來自哪個位置,從而實現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,致力通過高效的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。通過培訓(xùn)系統(tǒng)掌握空間轉(zhuǎn)錄組測序原理和方案設(shè)計思路,助力科學(xué)研究。宣傳空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量

本文利用空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究了在AD小鼠模型中,淀粉樣斑塊周圍直徑為100mm的組織域中發(fā)生的轉(zhuǎn)錄變化。發(fā)現(xiàn)了富含髓鞘和少突膠質(zhì)細(xì)胞基因(OLIGs)的基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的早期改變,而斑塊誘導(dǎo)的基因(PIGs)的多細(xì)胞基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)涉及補體系統(tǒng)、氧化應(yīng)激、溶酶體和炎癥,在疾病的后期非常突出。此外作者通過對小鼠和人腦切片進(jìn)行原位測序(ISS),證實了大多數(shù)觀察到的細(xì)胞水平的變化。空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析為探究AD和其他腦部疾病致病特征附近失調(diào)的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)提供了可能。海南歐易生物空間轉(zhuǎn)錄組規(guī)格Science發(fā)表了將組織擴(kuò)展和原位RNA測序結(jié)合起來的新型空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)ExSeq。

空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析的是根據(jù)每個芯片上每個 spot 的基因表達(dá)信息進(jìn)行聚類,然后將 spot 根據(jù)坐標(biāo)位置序列放回到組織的圖像上,同時可以對每個 gene 在組織上表達(dá)的空間位置進(jìn)行定位。獲得測序數(shù)據(jù)后,首先利用 Space Ranger  軟件可以自動化的對圖像進(jìn)行處理、數(shù)據(jù)比對和 Barcode 處理。另外一個軟件 Loupe Cell Browser 是一個適用于 Windows 和 MacOS 的桌面應(yīng)用程序,它可以快速、輕松地可視化和分析10X Visium 數(shù)據(jù)。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項目執(zhí)行經(jīng)驗,致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。

10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的準(zhǔn)確性高嗎?下圖是一個將10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)應(yīng)用于小鼠海馬體研究的案例。A圖為腦組織切片的HE染色結(jié)果,從10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果中,可以清晰看到Tmsb4x(B圖)和Selenow(C圖)在海馬體區(qū)域高表達(dá),和已知的研究結(jié)果一致性較高。開展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組需要做哪些準(zhǔn)備?空間轉(zhuǎn)錄組是一項十分前沿的技術(shù),涉及到很多細(xì)節(jié)方面的準(zhǔn)備工作,例如組織類型的選擇、前期預(yù)實驗的設(shè)計、病理區(qū)域的確認(rèn)等一系列內(nèi)容。而且實驗中存在很多不確定性因素,處理不慎容易導(dǎo)致整個項目失敗。10X Visium空間轉(zhuǎn)錄組的實驗主要分為兩部分:組織學(xué)板塊和組學(xué)板塊。

轉(zhuǎn)錄本的空間位置信息可以通過在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉(zhuǎn)錄本來獲取,目前已有多種技術(shù)策略被開發(fā)報道, 如空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)(Spatial Transcriptomics,ST)和 Visium 技術(shù),通過將包含空間位置信息的條形碼、UMI 標(biāo)簽、poly-dT 的探針固定在商用微陣列載玻片上,來捕獲包含 poly(A) 尾巴的轉(zhuǎn)錄本,并獲取全轉(zhuǎn)錄組水平的基因表達(dá)及位置信息。一些無需成像即可計算重建空間基因表達(dá)模式所需信息的技術(shù)也被開發(fā)了出來,其中之一就是是 DNA 顯微技術(shù),它記錄 cDNA 之間的接近度,該信息可用于重建轉(zhuǎn)錄本之間的相對位置。10x Genomics公司宣布了新一代FFPE空間轉(zhuǎn)錄組商業(yè)化解決方案。福建空間轉(zhuǎn)錄組報價

除了皮膚、胰腺和骨頭組織外,其余樣本類型均可開展10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組研究。宣傳空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量

當(dāng)前的技術(shù)主要有四種策略:1、基于組學(xué)實驗結(jié)合空間重建的計算策略。這種計算方法可以充分利用內(nèi)在基因表達(dá)模式或共表達(dá)的趨勢,從單個細(xì)胞的大量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中重構(gòu)細(xì)胞間的環(huán)境。然而,這些推論方法在某些情況下*呈現(xiàn)空間趨勢或特定組織的總體布局。2、激光切割與NGS測序結(jié)合的策略。基于LCM的轉(zhuǎn)錄組學(xué)或基因組學(xué)成功地獲得了單個細(xì)胞的空間轉(zhuǎn)錄組,盡管其通量很低,但是在可以標(biāo)記成千上萬個單個細(xì)胞位置的多路復(fù)用條形碼策略可行之前,將少量細(xì)胞的數(shù)據(jù)粗略地整合到構(gòu)成***的巨大背景中,可能具有一定價值。3、基于熒光物質(zhì)原位的轉(zhuǎn)錄組學(xué)?;趫D像的原位轉(zhuǎn)錄組學(xué)在很大程度上增加了可檢測區(qū)域,但也存在一些問題,例如幾種smFISH方法很難從包括信號干擾、轉(zhuǎn)錄本積累等復(fù)雜背景中提取單個細(xì)胞。4、基于寡核苷酸的空間條碼加上NGS測序。費用較高且無法在單個細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)錄組。宣傳空間轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量

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