酵母雙雜交還可以這么用？Y2H-seq 揭示不老松年齡。***小歐又給大家?guī)砹艘黄湍鸽p雜交結合高通量測序技術的應用文章。北京林業(yè)大學鈕世輝老師團隊，在傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術流程基礎上，巧妙的結合了NGS技術，優(yōu)化建立了Y2H-seq技術，**縮短了常規(guī)的篩庫后測序驗證周期，節(jié)約了實驗成本。文章中應用Y2H-seq技術，對不老松年齡密碼進行了有趣的研究，其中所用酵母雙雜交文庫由歐易生物協(xié)助完成。眾所周知，酵母雙雜交技術是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過酵母雙雜交技術發(fā)現(xiàn)的。但是做過酵母雜交實驗的小伙伴也都知道蛋白篩選較容易，但是篩選后，想知道獲得的陽性克隆都對應的是啥基因，所花費的人力物力相當不小。有困難解決困難，勇敢牛牛不怕困難。Gateway方法酵母雙雜交文庫構建核系統(tǒng)與膜系。天津技術酵母文庫做什么
進行了酵母雙雜交篩選實驗，結果顯示 MdMPK3 可以與 MdWRKY17 相互作用（圖 C），并且通過 BiFC、Co-IP 得以證實（圖 D-E）。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升（圖 B）。進一步的 BiFC 和 Co-IP 表明，MdMEK4 可以與 MdMPK3 相互作用（圖 F-G）。體外激酶試驗表明，MdWRKY17 能夠被MdMEK4- MdMPK3 級聯(lián)磷酸化（圖 H）。綜上，MdMEK4-MdMPK3 級聯(lián)磷酸化 MdWRKY17。與對照相比，MdWRKY17過表達植株中水楊酸含量降低，而RNAiMdWRKY17植株中水楊酸含量升高（圖A）。廣東什么是酵母文庫報價歐易生物結合多年的文庫構建經(jīng)驗。
酵母雜交試驗:隨著分子生物學研究進入以蛋白質(zhì)組學為標志的后基因組時代，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-DNA相互作用已成為互作組學研究的熱門主題。人類基因粗略約編碼2萬種蛋白，只算一對一的相互作用種類也有12萬到100萬種。而加上動態(tài)變化，每個物種、個體、細胞中都存在著一張張不同的互作網(wǎng)絡圖，這一張張圖譜中，蘊藏著各種生命的奧秘。有兩種通用的相互作用組圖譜繪制方式：第一種酵母雜交試驗，通過偶聯(lián)基因表達體現(xiàn)細胞內(nèi)發(fā)生直接相互作用的蛋白對。第二種是通過抗體/標簽分離純化復合體，然后用質(zhì)譜鑒定復合體內(nèi)部組分，識別直接相互作用或間接相互作用的蛋白質(zhì)。兩種高通量方法彼此互補，相互驗證。
酵母文庫實驗：本研究發(fā)現(xiàn)了一個硝酸鹽響應的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2，它參與調(diào)節(jié)硝酸鹽介導的蘋果植株生長。利用酵母雙雜交、蛋白質(zhì) pull-down、BiFC 實驗證實，MdBT2 可以與一個 DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作，這種互作是 MdRGL3a 蛋白經(jīng)由 26S 蛋白酶體途徑的泛素化及降解所必需的。此外，異源表達 MdBT2 部分回復了 MdRGL3a 過表達所導致的擬南芥生長抑制。綜上表明，MdBT2 可以通過降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的豐度促進硝酸鹽介導的植物生長。實驗室培養(yǎng)顯示，培養(yǎng) 45 天，蘋果幼苗的高度和生物量隨硝酸鹽濃度的增加而增加（圖 A-C）。專業(yè)化的篩庫流程，多重質(zhì)檢保證質(zhì)量。初篩+復篩提高目標陽性克隆質(zhì)粒精確度。
酵母雙雜交技術，自創(chuàng)建以來被廣泛應用于蛋白互作研究領域，在生命科學的基礎探秘研究中起著重要作用。然而該技術設計初衷，*是斯坦利先生為了完成申請學校經(jīng)費的目的。該技術設計巧妙，它的許多優(yōu)點在設計之初并未顯現(xiàn)，反而在這么多年的高頻使用和進一步開發(fā)利用過程中越發(fā)明顯。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）盡管酵母雜交技術揭示了蛋白質(zhì)結合位點的詳細信息，但操作簡單。只需2個質(zhì)粒+1個菌株即可完成，且有不同體系方便選擇。（2）該技術利用比較好的DNA結合位點，有效的***結構域和友好的報告基因系統(tǒng)，可以放大弱互作的信號。（3）該技術可用于各種物種的蛋白互作檢測，具有物種普適性，尤其是人類蛋白。（4）衍生技術具有更***的應用，可擴展到檢測蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與小分子以及其他組合之間的相互作用，甚至可實現(xiàn)將生理相互作用與表型數(shù)據(jù)直接關聯(lián)。當然，做過酵母雜交實驗的小伙伴應該都了解，互作結果的判斷，往往要等酵母生長好幾天才能看出來（當然，小歐認為這在偉大的科研事業(yè)過程中算不上啥），互作強弱也是主觀判斷性較強，存在假陽性。歐易生物提供的酵母雜交技術服務已經(jīng)協(xié)助科研用戶發(fā)表了Science、Cell、PNAS等多家前列期刊雜志。陜西酵母文庫
文庫質(zhì)粒與酵母文庫載體重組。天津技術酵母文庫做什么
通過酵母雙雜交進行篩選，結果顯示 SWC6 可以在藍光下與 CRY1 相互作用（圖 A-C）。同樣，酵母雙雜交實驗顯示 CRY2 也可以在藍光下與 SWC6 相互作用（圖 D）。并通過 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗（圖 E-L）證實 CRY1、CRY2 與 SWC6 的結合是藍光依賴性的。SWC6 是真核生物中已報道的 SWR1 復合物亞基，負責催化 H2A.Z 在染色質(zhì)上的替換。已報道 SWR1 復合物中 SWC6 可以與 ARP6 亞基結合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗（圖 A-H）顯示，CRY1、CRY2 可以藍光依賴性與 ARP6 結合。天津技術酵母文庫做什么
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