酵母雙雜交還可以這么用？Y2H-seq 揭示不老松年齡。***小歐又給大家?guī)砹艘黄湍鸽p雜交結(jié)合高通量測序技術(shù)的應(yīng)用文章。北京林業(yè)大學(xué)鈕世輝老師團隊，在傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術(shù)流程基礎(chǔ)上，巧妙的結(jié)合了NGS技術(shù)，優(yōu)化建立了Y2H-seq技術(shù)，**縮短了常規(guī)的篩庫后測序驗證周期，節(jié)約了實驗成本。文章中應(yīng)用Y2H-seq技術(shù)，對不老松年齡密碼進(jìn)行了有趣的研究，其中所用酵母雙雜交文庫由歐易生物協(xié)助完成。眾所周知，酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)的。但是做過酵母雜交實驗的小伙伴也都知道蛋白篩選較容易，但是篩選后，想知道獲得的陽性克隆都對應(yīng)的是啥基因，所花費的人力物力相當(dāng)不小。有困難解決困難，勇敢牛牛不怕困難。百種酵母文庫,讓您的科研不再困難!！吉林酵母文庫質(zhì)量
歐易生物酵母文庫技術(shù)發(fā)表的又一篇高水平研究論文。植物***茉莉酸(JA)參與植物許多發(fā)育過程的調(diào)控。JAZ蛋白是茉莉酸信號反應(yīng)的阻遏物，通過抑制JA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑來負(fù)向調(diào)節(jié)JA信號。花青素和原花青素是種子、葉、花和果實中重要的植物次生代謝產(chǎn)物，可充當(dāng)抗氧化劑，幫助***活性氧和對**老，對人類健康具有重要價值。已有研究表明，花青素和原花青素的生物合成基因的轉(zhuǎn)錄受MYB、basichelix-loop-helix(bHLH)及WD40蛋白的調(diào)控。其中，蘋果MYB轉(zhuǎn)錄因子MdMYB9參與調(diào)控JA介導(dǎo)的花青素和原花青素的生物合成，但其分子機制仍有待深入研究。福建運用酵母文庫做什么酵母三雜交酵母文庫數(shù)據(jù)庫。
通過酵母雙雜交文庫進(jìn)行了互作蛋白的篩選，結(jié)果顯示TaTIFY9可以與TaSRL1相互作用（下圖A），并通過Bi-FC、熒光互補實驗得以證實（圖B-C）。TaTIFY9屬于茉莉酸信號途徑關(guān)鍵因子JAZ家族的成員之一。RT-PCR顯示TaTIFY9也主要表達(dá)于小麥根部，外源施加茉莉酸可以***誘導(dǎo)TaTIFY9表達(dá)。這一結(jié)果表明，TaSRL1可能通過與TIFY9結(jié)合介導(dǎo)了茉莉酸對根生長的抑制。已有研究表明 ERF 蛋白可以特異性結(jié)合到靶基因啟動子序列中的 GCC-box 序列。TaSRL1 屬于 ERF 家族。在生長素轉(zhuǎn)運基因 TaPIN2 的啟動子序列中含有一個 GCC-box 序列。酵母單雜交實驗顯示，TaSRL1 可以直接與 TaPIN2 啟動子結(jié)合并***其表達(dá)（圖 A），但該***作用會被TaSRL1的互作蛋白TaTIFY9 所抑制（圖 B和C）。
進(jìn)行了酵母雙雜交篩選實驗，結(jié)果顯示 MdMPK3 可以與 MdWRKY17 相互作用（圖 C），并且通過 BiFC、Co-IP 得以證實（圖 D-E）。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升（圖 B）。進(jìn)一步的 BiFC 和 Co-IP 表明，MdMEK4 可以與 MdMPK3 相互作用（圖 F-G）。體外激酶試驗表明，MdWRKY17 能夠被MdMEK4- MdMPK3 級聯(lián)磷酸化（圖 H）。綜上，MdMEK4-MdMPK3 級聯(lián)磷酸化 MdWRKY17。與對照相比，MdWRKY17過表達(dá)植株中水楊酸含量降低，而RNAiMdWRKY17植株中水楊酸含量升高（圖A）。歐易生物酵母文庫項目發(fā)表 Science 封面文章歐易生物。
酵母雙雜交實驗表明，PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用（圖 C），并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實（圖 D-E）。為進(jìn)一步研究在年齡信號調(diào)控中的作用機制，分別構(gòu)建了過表達(dá)PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比，過表達(dá)PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時相轉(zhuǎn)換（圖A），證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過表達(dá)PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過早終止，表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點關(guān)鍵基因突變體進(jìn)行功能互補實驗，結(jié)果顯示過表達(dá)PtDAL1可以恢復(fù)由于過表達(dá)miR156導(dǎo)致的開花延遲，但ft缺失會導(dǎo)致PtDAL1失活，PtDAL1過表達(dá)也不能恢復(fù)soc1-1-2突變體的表型，表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達(dá)PtMADS11可以恢復(fù)由過表達(dá)miR156或ft缺失導(dǎo)致的開花延遲，表明PtMADS11對開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。酵母文庫篩庫 在酵母雙雜交系統(tǒng)中 。湖北篩庫酵母文庫做什么
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母文庫實驗由歐易生物完成。2021年3月16日，寧波大學(xué)陳劍平院士、孫宗濤研究員為共同通訊作者，在PNAS雜志（IF:9.412）在線發(fā)表了題為“AclassofindependentlyevolvedtranscriptionalrepressorsinplantRNAvirusesfacilitatesviralinfectionandvectorfeeding”的研究論文，深入報道了在不同植物RNA病毒中一種***存在的、通過劫持茉莉酸信號途徑以協(xié)同促進(jìn)病毒傳播和介體昆蟲攝食的新機制。植物病毒基因組通常*編碼少數(shù)幾個蛋白，它們必需依賴寄主植物才能完成自身的侵染和增殖。因此植物病毒往往通過其編碼的蛋白來劫持或者利用寄主因子來實現(xiàn)自身的復(fù)制，并在植物體內(nèi)傳播，產(chǎn)生系統(tǒng)性***。吉林酵母文庫質(zhì)量
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