酵母雙雜交還可以這么用？Y2H-seq 揭示不老松年齡。***小歐又給大家?guī)?lái)了一篇酵母雙雜交結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用文章。北京林業(yè)大學(xué)鈕世輝老師團(tuán)隊(duì)，在傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術(shù)流程基礎(chǔ)上，巧妙的結(jié)合了NGS技術(shù)，優(yōu)化建立了Y2H-seq技術(shù)，**縮短了常規(guī)的篩庫(kù)后測(cè)序驗(yàn)證周期，節(jié)約了實(shí)驗(yàn)成本。文章中應(yīng)用Y2H-seq技術(shù)，對(duì)不老松年齡密碼進(jìn)行了有趣的研究，其中所用酵母雙雜交文庫(kù)由歐易生物協(xié)助完成。眾所周知，酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)的。但是做過(guò)酵母雜交實(shí)驗(yàn)的小伙伴也都知道蛋白篩選較容易，但是篩選后，想知道獲得的陽(yáng)性克隆都對(duì)應(yīng)的是啥基因，所花費(fèi)的人力物力相當(dāng)不小。有困難解決困難，勇敢牛牛不怕困難。酵母雜交案例專業(yè)的碩博團(tuán)隊(duì)。吉林生物技術(shù)酵母文庫(kù)
酵母雙雜交、pulldown和BiFC實(shí)驗(yàn)均顯示，MdTRB1可以通過(guò)其C末端與JAZ1蛋白互作。在蘋果葉片和愈傷組織中過(guò)表達(dá)MdJAZ1，花青素和原花青素的累積受到明顯抑制。在蘋果葉片和愈傷組織***表達(dá)MdJAZ1/MdJAZ1，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)MdJAZ1抑制了MdTRB1對(duì)花青素和原花青素累積的促進(jìn)作用。Pull down 實(shí)驗(yàn)和熒光素酶互補(bǔ)成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在 MdJAZ1 存在下，MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合減弱（圖 a-c）；外源施加 JA 可以部分恢復(fù) MdTRB1 與 MdMYB9 的結(jié)合。對(duì)于 MdTRB1 在 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素積累中的作用機(jī)制，本研究建立了一個(gè)新的模型：MdTRB1 通過(guò)與 MdMYB9 互作，增強(qiáng)了 MdMYB9 對(duì)下游基因的轉(zhuǎn)錄***活性，進(jìn)而正向調(diào)節(jié)了 JA 介導(dǎo)的花青素和原花青素累積。在 JA 缺乏的條件下，MdJAZ1 與 MdTRB1 互作，干擾了 MdTRB1 與 MdMYB9 之間的結(jié)合；在 JA 存在的條件下，MdJAZ1 被降解，MdTRB1 被釋放出來(lái)以參與后續(xù)過(guò)程。陜西實(shí)力酵母文庫(kù)做什么酵母文庫(kù)篩選研究多年建庫(kù)與篩選經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)證。
酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。2021年3月，上海師范大學(xué)楊洪全教授為通訊作者，在ThePlantCell(IF:9.618)雜志發(fā)表了題為“ArabidopsisCryptochrome1ControlsPhotomorphogenesisthroughRegulationofH2A.ZDeposition”的研究論文，報(bào)道了擬南芥光形態(tài)建成調(diào)控的分子機(jī)制。上海師范大學(xué)茅志磊博士為***作者，文章中酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。太陽(yáng)光不僅為植物的光合作用提供能量來(lái)源，也是調(diào)節(jié)許多植物發(fā)育過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)境信號(hào)。植物可以通過(guò)多種光受體監(jiān)測(cè)和響應(yīng)不同波長(zhǎng)、方向和強(qiáng)度的光，其中**早發(fā)現(xiàn)的是藍(lán)光受體隱花素 CRYs。擬南芥中 CRYs 有 2 個(gè)，其中 CRY1 主要參與調(diào)控光形態(tài)建成，CRY2 主要參與光周期開花調(diào)控。
小歐從2018年即開始關(guān)注酵母雜交與高通量測(cè)序相結(jié)合的技術(shù)發(fā)展，如2017年CaoGang老師等發(fā)表的RLL-Y2H技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了文庫(kù)篩文庫(kù)可能，該技術(shù)通過(guò)對(duì)酵母雙雜常用載體的改造，并結(jié)合高通量測(cè)序，可直接獲得AD-BD互作蛋白對(duì)。所用方法相當(dāng)巧妙，感興趣的同學(xué)請(qǐng)點(diǎn)擊《當(dāng)酵母雙雜交遇到高通量測(cè)序》。鈕老師團(tuán)隊(duì)之前的研究已經(jīng)鑒定了DAL1作為一種保守的針葉樹年齡生物標(biāo)記基因，在油松從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)到生殖生長(zhǎng)的時(shí)相轉(zhuǎn)變過(guò)程中起重要作用。為了進(jìn)一步理解年齡效應(yīng)如何驅(qū)動(dòng)針葉樹的發(fā)育，闡明與DAL1相關(guān)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)很關(guān)鍵。鈕老師團(tuán)隊(duì)利用傳統(tǒng)的Y2H篩選技術(shù)結(jié)合NGS測(cè)序技術(shù)，優(yōu)化得到了Y2H-seq技術(shù)，與傳統(tǒng)的篩選測(cè)序相比，大幅度節(jié)省了時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本。酵母文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)酵母基因功能鑒定。
酵母文庫(kù):細(xì)菌鞭毛蛋白是一種重要的細(xì)菌毒力因子，可刺激動(dòng)植物細(xì)胞中的分子免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。脊椎動(dòng)物識(shí)別鞭毛蛋白和建立有效免疫反應(yīng)的詳細(xì)機(jī)制已經(jīng)被揭示；然而，無(wú)脊椎動(dòng)物是否能夠識(shí)別鞭毛蛋白仍未可知。2022年1月24日，山東大學(xué)王顯偉團(tuán)隊(duì)在PLOSPATHOGENS（IF：6.823）上發(fā)表了題為“Shoc2regnizesbacterialflagellinandmediatesantibacterialErk/Statsignalinginaninvertebrate”的研究論文，揭示了MjShoc2可以與鞭毛蛋白FlaA互作，引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，促使對(duì)蝦抵抗細(xì)菌***，為無(wú)脊椎動(dòng)物對(duì)鞭毛蛋白的感知機(jī)制提供了見解。該項(xiàng)目中所用的對(duì)蝦酵母文庫(kù)由歐易生物構(gòu)建。酵母文庫(kù)篩庫(kù)歐易生物。吉林生物技術(shù)酵母文庫(kù)
為客戶提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)專業(yè)醫(yī)學(xué)課題標(biāo)書論文一站式酵母雙雜交。吉林生物技術(shù)酵母文庫(kù)
進(jìn)行了酵母雙雜交文庫(kù)的篩選，結(jié)果顯示鈣依賴的種子特異性蛋白激酶SPK可以與OsNF-YB9相互作用，分段截取互作驗(yàn)證顯示OsNF-YB9的N端是互作所必須的（圖a-b），并通過(guò)雙熒光分子互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)、BiFC、體外GST-pulldown實(shí)驗(yàn)得以證實(shí)（圖c-e）。亞細(xì)胞定位顯示SPK主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，OsNF-YB9在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有表達(dá)，共表達(dá)SPK和OsNF-YB9***促進(jìn)了OsNF-YB9的入核（圖f），表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促進(jìn)了OsNF-YB9從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核的運(yùn)輸。RT-PCR顯示SPK在發(fā)育中的種子中高表達(dá)，在5DAF開始***，并在10-30DAF維持高表達(dá)水平（圖a-b）。spk敲除突變體種子中堊白率的增加（圖c-e），但粒形和粒重與野生型沒有***差別。吉林生物技術(shù)酵母文庫(kù)
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