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通過傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)，以PtDAL1為誘餌，篩選樣本來源于不同年齡段的油松cDNA文庫。將獲得的陽性克隆，10個一組，挑選到1個96孔板的PCR板孔中，獲得10*96個陽性克隆的96孔板。以其中陽性克隆mix為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將所有的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。使用純化后的PCR產(chǎn)物，進(jìn)行打斷后構(gòu)建二代測序文庫，通過NGS測序，獲得6G的陽性克隆數(shù)據(jù)。通過分析二代測序數(shù)據(jù)，獲得陽性克隆基因信息（去冗余后獲得135個互作子，包含21個TFs，2個TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結(jié)合等蛋白，部分見表1）。挑選重要的候選基因進(jìn)行一對一驗證（圖2）。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行比對分析。對DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表達(dá)譜、啟動子中的順勢作用元件功能進(jìn)行分析，并對DIPs進(jìn)行GO注釋（圖3）。綜合生信分析結(jié)果，構(gòu)建針葉樹老化途徑的調(diào)控模型（圖4）。博士期間長期從事酵母單/雙雜交文庫構(gòu)建及篩選的工作。吉林酵母文庫做什么

酵母雙雜交還可以這么用？Y2H-seq 揭示不老松年齡。***小歐又給大家?guī)砹艘黄湍鸽p雜交結(jié)合高通量測序技術(shù)的應(yīng)用文章。北京林業(yè)大學(xué)鈕世輝老師團(tuán)隊，在傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術(shù)流程基礎(chǔ)上，巧妙的結(jié)合了NGS技術(shù)，優(yōu)化建立了Y2H-seq技術(shù)，**縮短了常規(guī)的篩庫后測序驗證周期，節(jié)約了實驗成本。文章中應(yīng)用Y2H-seq技術(shù)，對不老松年齡密碼進(jìn)行了有趣的研究，其中所用酵母雙雜交文庫由歐易生物協(xié)助完成。眾所周知，酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)的。但是做過酵母雜交實驗的小伙伴也都知道蛋白篩選較容易，但是篩選后，想知道獲得的陽性克隆都對應(yīng)的是啥基因，所花費的人力物力相當(dāng)不小。有困難解決困難，勇敢牛牛不怕困難。山東酵母文庫多少錢酵母文庫篩庫歐易生物。

酵母雙雜交文庫：本研究通過藍(lán)/紅光誘導(dǎo)青蒿中青蒿素生物合成基因的表達(dá)，使用轉(zhuǎn)錄組分析確定了一個WRKY轉(zhuǎn)錄因子AaWRKY9，可明顯***青蒿素生物合成相關(guān)基因的表達(dá)。實驗表明AaWRKY9通過光依賴JA信號通路調(diào)節(jié)，在青蒿素生物合成中發(fā)揮重要作用，AaWRKY9通過與AaDBR2和AaGSW1的啟動子結(jié)合正向調(diào)節(jié)青蒿素的積累。此外，JA信號通路中的抑制因子AaJAZ9與AaWRKY9相互作用，并抑制其轉(zhuǎn)錄***活性，而在MeJA存在情況下，AaJAZ9被降解，AaWRKY9的轉(zhuǎn)錄***活性增加，進(jìn)而促進(jìn)青蒿素生物合成基因的表達(dá)。酵母雙雜交文庫結(jié)果表明，AaWRKY9有助于光和JA信號調(diào)節(jié)青蒿素的生物合成，為兩種信號途徑在植物次生代謝物合成中的整合調(diào)控提供了新見解。

水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫篩選服務(wù)：近幾年，中國科學(xué)院分子植物科學(xué)***創(chuàng)新中心王二濤課題組在植物根瘤共生和菌根共生領(lǐng)域取得三項可以寫入教科書級的研究成果。尤其是近兩年，已經(jīng)連續(xù)發(fā)表了Cell、Nature、MP和PNAS等高水平文章。此外，王二濤研究員也是第二屆"科學(xué)探索獎"的獲得者，肯定他在植物-微生物共生營養(yǎng)交換和菌根共生信號受體發(fā)現(xiàn)方面的貢獻(xiàn)。2021年10月12日，分子植物***中心王二濤研究團(tuán)隊在Cell上發(fā)表題為“磷信號中樞網(wǎng)絡(luò)調(diào)控菌根共生）”的封面論文。***繪制了水稻-叢枝菌根共生的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)植物直接磷營養(yǎng)吸收途徑（根途徑）和共生磷營養(yǎng)吸收途徑（共生途徑）均是受到植物的磷信號網(wǎng)絡(luò)統(tǒng)一調(diào)控，回答了菌根共生領(lǐng)域"自我調(diào)節(jié)"這一困擾領(lǐng)域的重要科學(xué)問題。歐易生物CEO肖云平先生也參與了此項研究。文中水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫篩選服務(wù)由歐易生物提供。酵母文庫已知蛋白互作靈活定制建庫。

蛋白被泛素化后（即蛋白上結(jié)合了泛素），意味著將要被運往蛋白酶體降解，一般用于降解細(xì)胞內(nèi)老弱病殘蛋白，再回收利用。同時也被用于排除異己，抵御外敵。該過程需要一系列酶介導(dǎo)：泛素***酶（E1）、泛素偶聯(lián)酶（E2）和泛素E3連接酶（E3）。其中E3是起特異性識別作用的，即決定誰該被降解，不能把好同志降解掉。所以E3基因很多，植物中主要有四種類型：HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**豐富的E3連接酶。本研究中，通過酵母雙雜交篩選到的標(biāo)題蛋白MdBT2，整好是CRLs亞家族之一。因此作者推測MdBT2可能在與ApNMV1a結(jié)合后，起到了促進(jìn)其泛素化和降解的作用。酵母文庫篩選做文庫篩選前,首先需要檢測你的誘餌的自***活性和對酵母的毒性。吉林實力酵母文庫

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目前，歐易生物負(fù)責(zé)該水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫的維護(hù)和保存工作，并對廣大水稻科研工作者提供轉(zhuǎn)錄因子篩選服務(wù)。如去年歐易生物助力中國科學(xué)院分子植物科學(xué)***創(chuàng)新中心的王二濤老師應(yīng)用該文庫對水稻-叢枝菌根進(jìn)行了深入研究，成功構(gòu)建了水稻-叢枝菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果發(fā)表于《Cell》封面。截至文章發(fā)表，該文庫已收錄了1683個水稻轉(zhuǎn)錄因子，隸屬于54個家族，覆蓋預(yù)測的水稻轉(zhuǎn)錄因子總量的70%。文庫中水稻轉(zhuǎn)錄因子的a基因信息來源于PlantTFDB和KOME數(shù)據(jù)庫。文庫載體使用pGADT7，酵母菌株使用Y187，每一個轉(zhuǎn)錄因子菌株**保存于96孔板中。吉林酵母文庫做什么

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